蛋白質(zhì)含量的測定

蛋白質(zhì)含量的測定蛋白質(zhì)含量的測定第1頁試驗?zāi)繕酥参矬w內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)大多數(shù)是參加各種代謝酶類，測其含量是了解植物體總代謝一個主要指標。在研究每一個酶作用時，常以比活（酶活力單位／mg蛋白）表示酶活力大小及酶制劑純度。所以，測定植物體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)是研究酶活一個主要項目。蛋白質(zhì)含量的測定第2頁一、原理考馬斯亮藍G-250（CoomassitbrilliantblueG-250）測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)正當一個。在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)（5～100μg/ml），蛋白質(zhì)－色素復(fù)合物在595nm波長下光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用于蛋白質(zhì)定量測定。蛋白質(zhì)含量的測定第3頁特點蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結(jié)合在2min左右時間內(nèi)到達平衡，完成反應(yīng)十分快速，其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該反應(yīng)非常靈敏，可測微克級蛋白質(zhì)含量(范圍為5～100μg蛋白質(zhì)）,，所以是一個比很好蛋白質(zhì)定量法。蛋白質(zhì)含量的測定第4頁二、材料、試劑與儀器設(shè)備：植物材料：各種植物葉片及其它器官或離體細胞培養(yǎng)物

試驗器具：分光光度計；離心機；研缽；離心管；移液管，試管等；試劑1．考馬斯亮藍試劑：

2．蛋白質(zhì)標準溶液：

3．90%乙醇；

4.磷酸（85%，W/V）。蛋白質(zhì)含量的測定第5頁三、試驗步驟樣品含量測定：（1）稱取鮮樣0.5g，剪碎放入研缽中加少許pH7.0緩沖液3ml研磨提取,再分別加2ml,1ml清洗研缽和研棒兩次,倒入離心管中，7000rpm/min離心15分鐘,把上清液倒入一刻度試管中,統(tǒng)計體積。蛋白質(zhì)含量的測定第6頁（2）用移液管（或移液器）取上清液0.1ml(若樣品中蛋白質(zhì)含量低可取0.5ml加5ml考馬斯亮藍，按照0～100μg/mL標準曲線求算蛋白質(zhì)含量)，加入到10ml刻度試管中，再加入5ml考馬斯亮藍試劑，充分搖勻，5分鐘后，在分光光度計595nm處比色。蛋白質(zhì)含量的測定第7頁蛋白質(zhì)含量的測定第8頁四、結(jié)果計算樣品蛋白質(zhì)含量（μg/g鮮重）=(C×V/a)/W式中：C－查標準曲線所得每管蛋白質(zhì)含量（μg/mL）；V－提取液總體積（mL）；a－測定所取提取液體積（mL）；W－取樣量（g）。蛋白質(zhì)含量的測定第9頁五、注意事項1.在配制考馬斯亮藍時很輕易看到絮狀物出現(xiàn)，應(yīng)用濾紙加以過濾，以免影響測定結(jié)果。2.