微生物分離與純化技術(shù)

一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

掌握從土壤中分離培養(yǎng)微生物方法，從而取得若干種微生物純培養(yǎng)技能。

微生物分離與純化技術(shù)第1頁(yè)二、試驗(yàn)器材及設(shè)備1、無(wú)菌培養(yǎng)皿(直徑90毫米)、無(wú)菌吸管1毫升、盛有90毫升無(wú)菌水錐形瓶、盛有9毫升無(wú)菌水試管5支。2、培養(yǎng)基(已滅菌)、土壤顆粒。微生物分離與純化技術(shù)第2頁(yè)3、接種環(huán)、酒精燈、恒溫箱(培養(yǎng)箱)、超凈工作臺(tái)等。微生物分離與純化技術(shù)第3頁(yè)三、微生物分離純化操作方法1、取樣（取土樣10g）2、稀釋土壤懸濁液介紹兩種方法：稀釋混合平板法和平板劃線法（一）稀釋混合平板分離法（以分離真菌為例）微生物分離與純化技術(shù)第4頁(yè)稀釋土壤懸濁液操作注意：依次編號(hào)：按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6錐形瓶中玻璃珠將顆粒狀樣品打散無(wú)菌操作：超凈工作臺(tái)、酒精燈、無(wú)菌吸管移液管移液后多出液體處理試管中懸濁液須持移液管吹洗三次攪勻微生物分離與純化技術(shù)第5頁(yè)3、平板制作每組準(zhǔn)備兩套無(wú)菌培養(yǎng)皿，在皿底注明稀釋液濃度（10-4、10-5、10-6中任選兩種濃度)、菌名如黑曲霉、班級(jí)、組別。融化錐形瓶中培養(yǎng)基，放在45-50℃恒溫水浴鍋中備用制備混合液平板：無(wú)菌操作下，打開培養(yǎng)皿在無(wú)菌培養(yǎng)皿一邊加兩滴鏈霉素液，另一邊加１mL土壤稀釋液（注意不要讓兩液相混），倒入45-50℃融化真菌培養(yǎng)基約1/4-1/3培養(yǎng)皿高度。培養(yǎng)皿平放在桌上順時(shí)針、逆時(shí)針輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，混勻皿中物質(zhì)。培養(yǎng)基冷凝后即成平板。微生物分離與純化技術(shù)第6頁(yè)恒溫培養(yǎng):平板倒置于28-30℃恒溫箱中,培養(yǎng)5-6天后觀察真菌菌落形態(tài)。轉(zhuǎn)接純化:挑取單個(gè)菌落,接種到新鮮平板上,培養(yǎng)觀察,直至純化。微生物分離與純化技術(shù)第7頁(yè)平板制作操作注意：融化培養(yǎng)基時(shí)不要溢出燒瓶或糊底無(wú)菌操作下，打開培養(yǎng)皿操作一根１mL移液管屢次移液先移低濃度懸濁液，再移高濃度懸濁液。移液管能夠用稀釋懸濁液那根在無(wú)菌操作下接著做，也可另取一根無(wú)菌。為何培養(yǎng)皿要倒置培養(yǎng)微生物分離與純化技術(shù)第8頁(yè)(二)平板劃線分離法（以分離細(xì)菌為例）每組準(zhǔn)備兩套無(wú)菌培養(yǎng)皿,在皿底菌名、班級(jí)、組別。融化培養(yǎng)基，在45-50℃恒溫水浴鍋中備用制備平板：無(wú)菌操作下，打開培養(yǎng)皿，倒入45-50℃融化細(xì)菌培養(yǎng)基約1/4-1/3培養(yǎng)皿高度。培養(yǎng)皿平放在桌上，培養(yǎng)基冷凝后即成平板。微生物分離與純化技術(shù)第9頁(yè)平板劃線:無(wú)菌操作下,用接種環(huán)挑取一環(huán)10-1土壤懸濁液,在平板上輕輕劃線(切勿劃破培養(yǎng)基)劃線方式可取下列圖微生物分離與純化技術(shù)第10頁(yè)恒溫培養(yǎng):平板倒置于28-30℃恒溫箱中,培養(yǎng)１