香豆素衍生物的合成及抗腫瘤活性研究

香豆素衍生物的合成及抗腫瘤活性研究

香豆素是一種具有廣泛生物活性的內(nèi)核化合物。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器和試劑熔點(diǎn)用泰克XT-4熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定,溫度計(jì)未經(jīng)校正;1.2合成部分1.2.13-乙?；?7-羥色胺2的合成化合物1和2的合成按照文獻(xiàn)[11]的方法進(jìn)行.3-乙?；愣顾貫辄S色固體粉末;3-乙酰基-7-羥基香豆素為黃色固體粉末.1.2.2化合物35的合成在磁力攪拌下依次向盛有20mL無(wú)水丙酮的圓底燒瓶中加入2.042g(10mmol)化合物2和0.138gK3-乙酰基-7-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯并吡喃-2-酮(3):黃色固體,產(chǎn)率82%.m.p.135~138℃;1.2.3化合物3a2m的合成在盛有15mL乙醇的圓底燒瓶中依次加入2mmol化合物1(或2,3,4,5),2.5mmol甲氧基胺鹽酸鹽(或乙氧基胺鹽酸鹽),1mL吡啶,攪拌回流4h.反應(yīng)完成后將反應(yīng)液濃縮,加入10mL10%的鹽酸,再用乙酸乙酯(20mL×3)萃取,合并有機(jī)相,依次用飽和NaHCO3-(1-甲氧亞胺基乙基)-7-烯丙氧基苯并吡喃-2-酮(4a):白色粉末,產(chǎn)率76%.m.p.134~135℃;3-(1-甲氧亞胺基乙基)-7-(2,3-丁二烯氧基)苯并吡喃-2-酮(5a):黃色固體,產(chǎn)率85%.m.p.116~119℃;3-(1-乙氧亞胺基乙基)-7-羥基苯并吡喃-2-酮(2b):白色粉末,產(chǎn)率85%.m.p.247~248℃;3-(1-乙氧亞胺基乙基)-7-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯并吡喃-2-酮(3b):白色固體,產(chǎn)率86%.m.p.116~118℃;1.2.4化合物1c2c的合成在磁力攪拌下向盛有15mL乙醇的圓底燒瓶中依次加入1mmol化合物1(或2,3,4),2mmol芐氧胺基鹽酸鹽,熱浴下攪拌直至溶解.然后加入1mL吡啶,混合物在攪拌下回流6h.反應(yīng)完成后,將反應(yīng)液濃縮,再加入10mL10%鹽酸,然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取,合并有機(jī)相,依次用飽和NaHCO3-(1-芐氧亞胺基乙基)苯并吡喃-2-酮(1c):白色粉末,產(chǎn)率70%.m.p.234~236℃;3-(1-芐氧亞胺基乙基)-7-羥基苯并吡喃-2-酮(2c):白色固體,產(chǎn)率54%.m.p.177~179℃;3-(1-芐氧亞胺基乙基)-7-烯丙氧基苯并吡喃-2-酮(4c):橘黃色固體,產(chǎn)率71%.m.p.223~225℃;1.2.5na3-1-哌亞胺基乙基苯并吡喃-2-酮1d的合成在磁力攪拌下將1mmol化合物1(或2,3,4),2mmol氨基脲鹽酸鹽依次加入盛有15mL乙醇的圓底燒瓶中,用Na3-(1-脲亞胺基乙基)苯并吡喃-2-酮(1d):白色固體產(chǎn)率85%.m.p.224~226℃;3-(1-脲亞胺基乙基)-7-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯并吡喃-2-酮(3d):白色固體,產(chǎn)率73%.m.p.198~201℃;3-(1-脲亞胺基乙基)-7-烯丙氧基苯并吡喃-2-酮(4d):黃色固體,產(chǎn)率82%.m.p.200~202℃;1.3細(xì)胞抑制活性所有化合物均按文獻(xiàn)[12]的方法通過(guò)對(duì)KB和KBv200細(xì)胞株的抑制活性進(jìn)行篩選,順鉑作為陽(yáng)性對(duì)照.KB和KBv200癌細(xì)胞來(lái)自中國(guó)藥物科學(xué)研究所,通常保存在RPMI1640溶液中.細(xì)胞于37℃,濕潮恒溫箱(含5%CO2結(jié)果與討論2.1香豆素7-羥基的烯丙基醚的合成香豆素骨架的合成采用經(jīng)典的Knoevenagel反應(yīng),即以2-羥基苯甲醛或2,4-二羥基苯甲醛為起始原料,分別與乙酰乙酸乙酯反應(yīng),得到化合物1和2.化合物2再分別與3-甲基-1-溴-2-丁烯、3-氯丙烯、4-溴-1,2-丁二烯反應(yīng),使7-位羥基醚化,獲得化合物3~5.化合物1和2的合成,是較易進(jìn)行的反應(yīng),可使用的催化劑有吡啶、哌啶、胺等多種.哌啶是較好的催化劑,而用吡啶催化,副產(chǎn)物多,不便于后處理.反應(yīng)所需的溫度也比較低,一般在室溫下進(jìn)行即可,有時(shí)需控溫在40~60℃之間進(jìn)行.反應(yīng)常選用廉價(jià)而易于處理的乙醇作為溶劑.產(chǎn)物后處理容易,一般將反應(yīng)液在冰水中冷卻即可析出產(chǎn)物,過(guò)濾、洗滌后可得較純的產(chǎn)品即使有少量雜質(zhì),使用95%的乙醇進(jìn)行重結(jié)晶即可.香豆素7-羥基的烯丙基醚化,采用傳統(tǒng)的Williamson醚合成法,在K羰基與氨的衍生物發(fā)生加成與消除是經(jīng)典的縮合反應(yīng),反應(yīng)所使用的氨衍生物均為鹽酸鹽形式,故應(yīng)加堿將反應(yīng)體系的pH調(diào)節(jié)到6~7,我們使用Na2.2聯(lián)烯片段對(duì)部分化合物的活性合成目標(biāo)化合物對(duì)KB和KBv200的抑制活性見(jiàn)表1所示,測(cè)試采用抗腫瘤藥物順鉑作為參比對(duì)照.數(shù)據(jù)顯示化合物4a,4b,5b,3d和4d具有中等強(qiáng)度的抗腫瘤活性,其對(duì)KBv200抑制活性的IC根據(jù)測(cè)試數(shù)據(jù)結(jié)果,我們可以發(fā)現(xiàn)大多數(shù)香豆素衍生物的IC化合物3d和4d對(duì)KB和KBv200細(xì)胞均顯示較好的抑制活性,表明在化合物3和4中引入脲亞胺基基團(tuán)能有效地增加它們對(duì)癌細(xì)胞的抑制活性.僅在香豆素骨架的3-位乙?；线B接席夫堿結(jié)構(gòu)片段的化合物如2a~2d,對(duì)KB和KBv200細(xì)胞沒(méi)有顯示活性或活性很低;同樣,僅對(duì)香豆素骨架的7-位羥基進(jìn)行醚化的化合物如3~5,也沒(méi)有顯示活性,事實(shí)表明這些香豆素衍生物對(duì)KB和KBv200的抑制存在一個(gè)協(xié)同作用,即席夫堿片段和烴氧基片段同時(shí)存在于香豆素骨架上時(shí)才起作用.另外,僅在香豆素的7-位羥基上引入聯(lián)烯片段,不一定能導(dǎo)致衍生物的抑制活性或?qū)е碌幕钚暂^低,如化合物5,而文獻(xiàn)[13]報(bào)道一些連接聯(lián)烯片段的天然化合物顯示較好的酶抑制活性、細(xì)胞毒活性以及抗病毒活性,這說(shuō)明不同底物與聯(lián)烯片段的結(jié)合產(chǎn)生的生理活性效果是不同的.我們初始設(shè)計(jì)是希望將聯(lián)烯片段植入香豆素骨架以其獲得活性疊加的新化合物,但從研究的數(shù)據(jù)來(lái)看,并沒(méi)有出現(xiàn)預(yù)期的效果,這說(shuō)明盡管聯(lián)烯片段在某些化合物中是活性部位,但單獨(dú)引入到香豆素骨架中并不一定能改善原化合物的活性.3-乙?；?7-烯丙氧基苯并吡喃-2-酮(4):黃色固體產(chǎn)率72%.m.p.151~152℃;3-乙?；?7-(2,3-丁二烯氧基)苯并吡喃-2-酮(5):黃色固體,產(chǎn)率78%.m.p.153~156℃;3-(1-甲氧亞胺基乙基)苯并吡喃-2-酮(1a):白色粉末,產(chǎn)率83%.m.p.150~151℃;3-(1-甲氧亞胺基乙基)-7-羥基苯并吡喃-2-酮(2a)白色粉末,產(chǎn)率88%.m.p.218~219℃;3-(1-甲氧亞胺基乙基)-7-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯并吡喃-2-酮(3a):黃色固體,產(chǎn)率89%.m.p.124~126℃3-(1-乙氧亞胺基乙基)苯并吡喃-2-酮(1b):白色粉末,產(chǎn)率80%.m.p.103~104℃;3-(1-乙氧亞胺基乙基)-7-烯丙氧基苯并吡喃-2-酮(4b):白色粉末,產(chǎn)率72%.m.p.130~132℃;3-(1-乙氧亞胺基乙基)-7-(2,3-丁二烯氧基)苯并吡喃