微生物實驗室質(zhì)量控制

微生物實驗室質(zhì)量掌握準則質(zhì)量掌握相關(guān)定義質(zhì)量掌握：滿意質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動。質(zhì)量保證：為了滿意實驗室質(zhì)量要求，制定相應(yīng)的計劃，實施證明（記錄）所進行的一系列的系統(tǒng)活動外部質(zhì)量掌握：通過相互校準和/或檢驗對實驗室的操作和結(jié)果所進行的掌握內(nèi)部質(zhì)量掌握：實驗室內(nèi)部實行的以對比分析、跟蹤以及相關(guān)方法，對實驗室工作的連續(xù)性掌握計劃。質(zhì)量手冊：是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。實驗室要求組織：按國家實驗室認可的概念，是指一個能夠擔(dān)當法律責(zé)任的實體。這里所指的是實驗室（微檢室）內(nèi)建立的質(zhì)量管理的保證體系。人員房屋滿意檢測工作需要。設(shè)備人員要求實驗室人員的分類：管理人員、技術(shù)人員、技術(shù)支持人員等。相應(yīng)崗位的人員，應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力，相應(yīng)的技術(shù)能力證明（證書及證件）。微生物檢驗室因有相應(yīng)技術(shù)能力的人負責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作。并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。房屋條件要求房屋要求：具有適宜、足夠?qū)挸?、通風(fēng)有良好的照明。房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采納易于清潔的材料，保持房間清潔。房間的設(shè)置，以其開展的工作內(nèi)容加以分用，設(shè)立專用房間。房間的大小還應(yīng)依據(jù)從事實驗人員的進入數(shù)量上加以考慮。環(huán)境設(shè)施要求專用房間的溫濕度掌握與記錄（樣品存放室）特殊環(huán)境的微生物指標掌握與記錄（無菌室等）專用工作室的標準操作規(guī)程和定期的檢測校準程序。（干凈室等）特殊環(huán)境中的專用設(shè)施質(zhì)量掌握應(yīng)符合有關(guān)要求（凈化工作臺）環(huán)境設(shè)施的相關(guān)技術(shù)指標凈化室、凈化工作區(qū)域、干凈環(huán)境按國家及部頒標準進行檢測?？諝飧蓛舳戎笜耍簷z測頻率及檢測方法。一次/月；空氣細菌檢測（沉降法）。級別≥0.5μm塵粒(個/L)≥5μm塵粒(個/L)活菌顆粒平均數(shù)(cfu/平板)100≤3.5≤0.0≤1.010000≤350.0≤2.5≤3.0設(shè)備/儀器要求總則滿意開展相關(guān)檢測項目的要求。制定相關(guān)設(shè)備/儀器的作業(yè)指導(dǎo)書。設(shè)備/儀器的檢定校準，格外室新購儀器的檢定。設(shè)備/儀器分別以送檢、送校、自檢、自校表示其所檢定的狀態(tài)。。設(shè)備/儀器的運行檢查計劃。設(shè)備/儀器的運行狀況及適用記錄維修后設(shè)備/儀器的再校準或檢查，并具有完整的檢查記錄。設(shè)備掌握和程序微生物檢驗常用需監(jiān)控的設(shè)備和儀器1培育箱（生化培育箱或CO2培育箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、冰箱，（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機、天平、。2小計量容器3微生物測定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標儀專用等。溫度計實驗室必必要有工作溫度計和參照溫度計。工作溫度計：用于日常溫度檢查。參照溫度計：用于校正工作的溫度計。溫度計運行檢查：一般可采納一次/半年的運行檢查。日常檢查、校準檢查、運行檢查等都應(yīng)做好相應(yīng)的技術(shù)記錄。培育箱、水浴箱和冰箱的溫度掌握依據(jù)培育物性質(zhì)及溫度要求，培育箱應(yīng)分別設(shè)置（以用途和溫度分）培育箱的溫差要求，一般顯示值與實測值相差不大于±1℃，箱體內(nèi)各點溫差（內(nèi)部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于±1℃。溫度監(jiān)控方法：可將工作溫度計置甘油中，放入待測箱體內(nèi)，觀察工作溫度計的溫度，最好1-2次/天監(jiān)控記錄，高壓滅菌鍋的溫度掌握（一）高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進行檢測。生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。高壓滅菌鍋由專人按作業(yè)指導(dǎo)書操作，并做好每一次的作業(yè)記錄。高壓滅菌鍋使用時，內(nèi)置物品不能太多，單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶內(nèi)的培育基）不能太多。同時應(yīng)注意內(nèi)容物不同耐受溫度?？偟谋┞稌r間最好不要超過45min。高壓滅菌鍋的溫度掌握（二）高壓滅菌鍋日常工作記錄應(yīng)包含以下信息：高壓滅菌的材料、開頭時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無菌培育代替）高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。高壓滅菌鍋校準周期一般在半年。干燥滅菌箱溫度掌握干燥滅菌箱日常工作記錄中應(yīng)包括以下信息：開頭的時間、到達滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關(guān)閉時間）。干燥滅菌箱的溫度校準；用參考溫度計進行溫度測試。干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5℃或180±5℃。前者為滅菌2h，后者為30min。干燥滅菌箱校準時間一般為一年。培育基配制用蒸餾水的掌握對于蒸餾水器來說：按設(shè)備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。檢測要求：西歐標準為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導(dǎo)率＜0.5ms/m；細菌數(shù)＜50cfu/ml。我們?nèi)粘Ｓ玫臉藴蕿椋?0ms/m，未見有細菌指標。檢測頻率：1次/每月。蒸餾水定點供應(yīng)，并做好相應(yīng)的質(zhì)量掌握，記錄檢測結(jié)果。天平的管理天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。天平要有使用及運行檢查記錄。天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進行檢定。運行檢查頻率按運行計劃或按產(chǎn)品（天平生產(chǎn)廠家）給出的標準重量單位進行對比。容積的掌握（一）通過肯定的掌握方法，保證高壓滅菌后的稀釋劑滿意標準用量。實行稱中法來測定蒸發(fā)量，體積100ml的稀釋劑起重量為101g。高壓夠體積偏差不得超過1%。實行先高壓后定量分裝，可避開因高壓造成的體積誤差。對保存的定量液體應(yīng)在使用時，注意補充容積。容積的掌握（二）吸管的掌握：通過小計量容器校準，后使用。小計量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校準周期一般為1-2次/一年。小計量容器日常使用檢查可每周進行一次，包括容器的完整性。并做好相應(yīng)的記錄。pH計pH計使用前應(yīng)用標準液進行校準。緩沖液使用有效期：PH4.00約1年P(guān)H7.00約6個月pH9.00約6個月pH計的維護：電極外表的定期清洗；電極敏感性檢測及極性恢復(fù)。凈化工作臺的掌握水平流凈化工作臺工作區(qū)域，要求干凈度為100級?？諝獬两?0min，細菌數(shù)＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細菌數(shù)＜0.49個/皿.凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月主要是細菌沉降檢測。凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進行粒子與細菌沉降檢測。紫外線燈的掌握檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管放射的紫外光強度。國家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照耀無1米處，要求其強度為90。生物測試法：采納肯定的菌培育物，經(jīng)肯定比例稀釋，菌量掌握在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照耀，2min，同時設(shè)置一般光源的對比組，后置37℃48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達99%。顯微鏡的掌握顯微鏡應(yīng)制定作業(yè)指導(dǎo)書，日常維護記錄及自校記錄。顯微鏡應(yīng)置于無振動，避開灰塵，防潮等要求的環(huán)境。其它微生物檢測專用儀器的掌握細菌鑒定儀、酶標儀等設(shè)備，工作中常用陽性對比檢測其功能的正常性。儀器的檢定則按有關(guān)的部門檢定或按自校作業(yè)指導(dǎo)書進行。儀器的使用登記、校準計劃、校準記錄等文件存檔。儀器專人使用、操作者應(yīng)取得相應(yīng)的崗位培訓(xùn)合格，持證上崗。培育基質(zhì)量掌握正確進行培育基質(zhì)量掌握，并作為一項常常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實驗室今后通過相應(yīng)級別的認證，在整個檢驗質(zhì)量掌握體系中所必須具備的文件資料?，F(xiàn)有的依據(jù)：衛(wèi)生部1993年發(fā)布的食品檢驗用干燥培育基生產(chǎn)質(zhì)量掌握。但這個標準不完善。培育基的分類按其成分分類：有天然培育基和合成培育基。按用途分類：基礎(chǔ)培育基、增菌培育基、選擇性培育基、鑒別培育基及厭氧培育基。按培育基的形態(tài)分類：液體培育基、流體培育基、半固體培育基及固體培育基。依據(jù)培育基的劑型不同分類：新奇配制培育基和干燥培育基兩種。檢驗中常用的培育基水質(zhì)檢測用培育基：7種化妝品檢驗用培育基：8種食品檢驗用培育基：常用的有37種，110種被列入了GB4789中，其中生化試驗培育基23種，一般和專用培育基89種。食品、化妝品及涉水產(chǎn)品等產(chǎn)品微生物檢驗常規(guī)項目中所用的增菌分離培育基有所不同，對于菌種鑒定所用的培育基，各類產(chǎn)品分離的菌種其鑒定所用的培育基基本相同。

常用培育基的質(zhì)量掌握（一）檢驗項目與方法：對新批號的干燥培育基物理、化學(xué)及生物學(xué)指標鑒定A：感官（外觀）研細程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質(zhì)等；B：PH測定，按各種培育基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應(yīng)在6.4-7.0之間。C：生物學(xué)指標檢定，被檢培育基相應(yīng)細菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。常用培育基的質(zhì)量掌握（二）生長率測試：適用與液體和固體培育基：將菌培育液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進行平板計數(shù)或接種被檢的培育基試管，同時以按相關(guān)的培育基國標配方新奇配制的培育基進行對比。不低與10%。常用培育基的質(zhì)量掌握（三）菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新奇配制的培育基無統(tǒng)計學(xué)差異。常用培育基檢定用標準菌株甲型副傷寒沙門菌50002傷寒沙門菌50096乙型副傷寒沙門茵鴨沙門茵50083鼠傷寒沙門氏菌痢疾志賀菌1型5157O福氏志賀菌2大腸埃希菌25922（ATCC）金黃色葡萄球菌25923（ATCC一般變形桿菌肺炎克雷伯菌肺炎亞種弗勞地枸櫞酸桿菌4197綠膿桿菌27853（ATCC）副溶血性弧菌常用培育基質(zhì)量標準

外觀和理化標準：干粉顏色：淡黃色粉末或呈現(xiàn)本培育基特有的顏色溶解后培育基色澤：清楚透明（含瓊脂除外）淡黃色或特有的色澤；滅菌后的培育基PH：7.2±2℃為多；個別弧菌檢驗用培育基pH值偏高為：8.0±2℃生物學(xué)指標：菌落特征及菌落大小。培育基保存環(huán)境

制成的培育基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，干燥培育基干粉含有活性物質(zhì)、遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8℃條件保存。有的培育基則以存放于10-15℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培育基。養(yǎng)基制備掌握程序

培育基配制所用的儀器設(shè)備培育基配制所用的儀器設(shè)備必須經(jīng)過相應(yīng)的鑒定。配制培育基所用的用具及容器配制培育基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的，一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿，必要時可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后，取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數(shù)分鐘，再用3%鹽酸溶液進行中和，然后用清水沖洗，烘干后備用。培育基配制原料，試劑質(zhì)量掌握培育基的配制程序（一）不同的培育基配制的程序有所不同，但一般培育基配制程序主要有以下7個步驟、調(diào)配、融化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及鑒定。注意點：配制時注意各類成分的用途。pH測定干燥培育基在工廠生產(chǎn)時，對培育基PH進行了肯定的調(diào)試，在實際工作中，由于配制的環(huán)境、配制所用的溶劑（蒸餾水）PH等條件有所不同，都會對所用的培育基PH要有所影響。因此對于干燥培育基配制，同樣需要進行PH測驗。培育基的配制程序（二）配制好的培育基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。，由于培育培育基汲取空氣中的二氧化碳，會使培育基變酸，從而影響細菌的生長。培育基中的抑制劑及指示劑肯定要精確稱量，抑制劑要注意合理配伍。培育基主要原料的質(zhì)量掌握，

配制培育基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無機鹽和瓊脂等，這些主要原料的有劣，直接影響到培育基的質(zhì)量，由此也將影響檢驗質(zhì)量。指標有感官、理化、物理、生物學(xué)。培育基相關(guān)試劑的質(zhì)量掌握培育基相關(guān)試劑的質(zhì)量掌握及陰、陽性對比菌株試驗。對做生化反應(yīng)的各類試劑，在配就后均應(yīng)進行各項必要的鑒定。用已知陰、陽性菌株進行對比試驗。對于其它如氧化酶、觸酶、染色液等也同樣需要經(jīng)鑒定后用于試驗。不合格培育基可能的緣由（一）

干燥培育基結(jié)塊l

培育基過于陳舊l

培育基處于潮濕環(huán)境中l(wèi)

培育基生產(chǎn)時水分過高PH偏離規(guī)定值l

培育基過于陳舊l

配制時所使用的蒸餾水非中性l

培育基過度滅菌不合格培育基可能的緣由（二）培育基不清亮l

使用了劣質(zhì)水l

培育基PH值不對l

使用了不同的容器制備l

生產(chǎn)原料精度不夠l

培育基過度滅菌凝固溫度過高l

培育基干粉用的太多l(xiāng)

瓊脂質(zhì)量發(fā)生了變化不合格培育基可能的緣由（三）凝膠強度過低l

培育基干粉用的太少l

培育基未完全溶解l

培育基過度滅菌l

傾注前未振搖培育基瓶l

瓊脂粉凝固強度較低顏色不對l

PH不正確（帶指示劑的培育基）l

培育基過度滅菌l

使用了不潔的容器制備不合格培育基可能的緣由（四）培育基被污染l

培育基滅菌不徹底l

滅菌后存放不當而污染l

實驗時使用了污染的器皿生長不良l

可能由制備容器設(shè)備、水或樣品帶入抑制物l

樣品中含有亞致死性損傷的微生物l

PH不正確l

添加物（抑制劑）等濃度不當l

培育基過度滅菌l

實驗時培育基或溶解樣品時溫度過高不合格培育基可能的緣由（五）過分生長l

培育基過度滅菌，選擇性物質(zhì)受到了破壞l

添加物濃度不當菌落擴散l

瓊脂表面過濕l

使用了過多的接種體積l

培育基過度滅菌非典型生長l

培育基制備不當l

干燥培育基存放陳舊l

制備成的培育基存放時間過長l

生長條件不當（溫度、時間、氣體）檢測質(zhì)量保證

定期使用有證標準物質(zhì)和次級標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）進行內(nèi)部質(zhì)量掌握。實驗室間的比對或能力驗證利用相同或不同方法進行重復(fù)檢測對留存的樣品進行在檢測。微生物檢驗質(zhì)控方法（一）菌落計數(shù)精密度掌握直接計數(shù)選擇同一標本，要求檢驗人員進行菌落計數(shù)。將大腸菌（25922）或經(jīng)檢定標化的菌片，通過合適的梯度稀釋，選擇合適的稀釋度進行菌落計數(shù)實驗操作。36±1℃培育24h進行菌落計數(shù)。微生物檢驗質(zhì)控方法（二）菌落計數(shù)精密度掌握重復(fù)計數(shù)法選擇十個平板，每個平板具有合適的菌落數(shù)（100以內(nèi)）。將平板編號，由實驗人員進行計數(shù)并記錄結(jié)果。去掉平板編號，將平板置冰箱保存過夜，次日取出，重新給予編號，由實驗人員重復(fù)計數(shù)并記錄。計算每位實驗人員每對結(jié)果的平均數(shù)（X）。X=（a+b）/2；相對誤差（rd）計算：rd=|a+b|/X×100%。其它實驗人員間的相對誤差范圍計算：先計算全部實驗人員的平均菌落數(shù)，X=[Σx]/n，要求每一結(jié)果均應(yīng)在X±18.2%范圍內(nèi)。重復(fù)計數(shù)要求自身同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差小于7.7%實驗人員之間同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差±18.2%自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤小于7.7%實驗人員之間同一梯度計數(shù)誤差X±18.2%范圍不同梯度間菌落計數(shù)最終誤差小于7.7%菌種鑒定質(zhì)控菌種鑒定質(zhì)控要求，對所給的微生物菌種，按有關(guān)的方法及指標進行生化、血清等方面的鑒定。鑒定質(zhì)量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；簡略操作技術(shù)是否嫻熟，結(jié)果報告是否正確。每一項設(shè)立分值為25分。總分為100分。內(nèi)部質(zhì)量掌握的推舉頻率菌落計數(shù)精密度掌握：1次/3月；菌種鑒定掌握：1次/半年或1年盲樣測定丟失的對比1次/半年實驗室平安防護1

培訓(xùn)與告之實驗室管理人員及實驗人員必須了解相關(guān)工作有關(guān)的危險。對招收