FQPCR技術(shù)與兒科感染性疾病

FQ-PCR技術(shù)與兒科感染性疾病中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司市場部裴媛媛

達(dá)生命之源安健康之本主要內(nèi)容1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的發(fā)展2、實時熒光定量PCR（FQ-PCR）的原理3、FQ-PCR與兒科感染性疾病（研究進(jìn)展）4、達(dá)安公司兒科FQ-PCR相關(guān)產(chǎn)品PCR的發(fā)明人——

加理·莫理斯（KaryB.Mullis）

達(dá)生命之源安健康之本/pcr.shtml聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR

（polymerasechainreaction）達(dá)生命之源安健康之本達(dá)生命之源安健康之本PCR動力學(xué)原理——指數(shù)擴(kuò)增達(dá)生命之源安健康之本發(fā)射光實時熒光定量PCR(FluorescenceQuantitativePCR,FQ-PCR)實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號的積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過軟件標(biāo)準(zhǔn)曲線對起始模板進(jìn)行定量分析的方法。FQ-PCR原理簡化圖（simplifiedpictureofFQ-PCR）達(dá)生命之源安健康之本FQ-PCR遞增的熒光信號強(qiáng)度檢測范圍廣(101-1010

拷貝數(shù)/毫升)實時數(shù)據(jù)監(jiān)測熒光曲線高靈敏度、高特異性、高穩(wěn)定性高準(zhǔn)確性定量分析FQ-PCR特點(diǎn)達(dá)生命之源安健康之本熒光閾值&循環(huán)閾值（Ct值）達(dá)生命之源安健康之本FQ-PCR擴(kuò)增的理論模式理想PCR反應(yīng)：

X=X0*2n非理想PCR反應(yīng)：

X=X0(1+Ex)n

在擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到閾值線時:XCt=X0(1+Ex)Ct=M(1)logM=logX0(1+Ex)Ct(2)logX0=-log(1+Ex)*

Ct+logM(3)數(shù)學(xué)原理推導(dǎo)過程達(dá)生命之源安健康之本FQ-PCR定量原理圖達(dá)生命之源安健康之本FQ-PCR擴(kuò)增曲線函數(shù)關(guān)系（1）起始模板量越多，達(dá)到熒光閾值的循環(huán)數(shù)就越少，即Ct值越小。（2）各模板起始拷貝數(shù)的對數(shù)（Log濃度）與Ct值呈線性反比關(guān)系，即起始模板量越多，Ct值越小。（3）通過已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)未知樣品Ct值，就可以計算出該樣品中所含的起始模板量。達(dá)生命之源安健康之本FQ-PCR在兒科感染性疾病中的應(yīng)用肺炎支原體（mycoplasmapneumoniae,MP）呼吸道合胞病毒（respiratorysyncytialvirus,RSV）人巨細(xì)胞病毒（humancytomegalovirus,HCMV）EB病毒（epstein-barrvirus,EBv）腸道病毒（enterovirus71,EV71&coxsackievirus,CoxA16）達(dá)生命之源安健康之本研究進(jìn)展達(dá)生命之源安健康之本肺炎支原體（mycoplasmapneumoniae,MP）CLINICALMICROBIOLOGYREVIEWS,Oct.2004,p.697–728達(dá)生命之源安健康之本Science.2009Nov27;326(5957):1235-40.肺炎支原體（MP）蛋白質(zhì)圖譜繪制完成達(dá)生命之源安健康之本Science：呼吸道合胞病毒三維圖像（respiratorysyncytialvirus，RSV）Three-dimensional(3D)crystalstructureofadecameric,annularribonucleoproteincomplexoftheRSVnucleoprotein(N)boundtoRNA.Thevariableregionisinorange,withtheβ-hairpinhighlightedandlabeledwiththeRSV604resistancemutationsites.Science.2009Nov27;326(5957):1279-83.達(dá)生命之源安健康之本人巨細(xì)胞病毒（humancytomegalovirus,HCMV）NewsandViews.NatureMedicine

6,863-864(2000).達(dá)生命之源安健康之本Science：CMV的重復(fù)感染機(jī)制Science.2010Apr2;328(5974):102-6.EvasionofCD8+Tcellsiscriticalforsuperinfectionbycytomegalovirus.達(dá)生命之源安健康之本EB病毒（epstein-barrvirus,EBv）EBv屬于γ皰疹病毒亞科，是一種親淋巴細(xì)胞病毒，能感染人及靈長類動物的B淋巴細(xì)胞。EBv顆粒呈圓形，直徑150~180nm，基因組為雙股DNA，長170~175kb。NatRevCancer.Epstein–Barrvirus:40yearson.(2004)4:757–768.達(dá)生命之源安健康之本PNAS：EB病毒誘發(fā)腫瘤產(chǎn)生機(jī)制TheEpstein–Barrvirus(EBV)nuclearantigen(EBNA)-1istheonlyviralproteinexpressedinallEBV-carryingmalignancies,butitscontributiontooncogenesishasremainedenigmatic.WeshowthatEBNA-1induceschromosomalaberrations,DNAdouble-strandbreaks,andengagementoftheDNAdamageresponse(DDR).Thesesignsofgenomicinstabilityareassociatedwiththeproductionofreactiveoxygenspecies(ROS)andarereversedbyantioxidants.ThesefindingshighlightanovelfunctionofEBNA-1andapossiblemechanismbywhichexpressionofthisviralproteincouldcontributetomalignanttransformationandtumorprogression.ProcNatlAcadSciUSA.2009Feb17;106(7):2313-8.Epub2009Jan12.TheEpstein-Barrvirusnuclearantigen-1promotesgenomicinstabilityviainductionofreactiveoxygenspecies.達(dá)生命之源安健康之本腸道病毒（enterovirus71,EV71&coxsackievirus,CoxA16）FQ-PCR特異性核酸（EV71、CoxA16）檢測陽性被列為首選的檢測方法和確診依據(jù)。2009年7月，達(dá)安公司自主研發(fā)的三種腸道病毒檢測試劑同時獲得SFDA頒發(fā)的醫(yī)療器械注冊證，是目前國內(nèi)唯一獲得權(quán)威部門認(rèn)證的手足口病診斷產(chǎn)品。達(dá)生命之源安健康之本小結(jié)對兒科感染性疾病病原體核酸的特異性診斷已越來越成為病人治療所必需。采用FQ-PCR方法檢測病原體DNA，可以早期、快速、準(zhǔn)確、特異性診斷患者的感染病因。從而有助于避免濫用抗生素，了解患者病情、治療療效監(jiān)測、阻斷病毒傳播等。達(dá)安兒科系列產(chǎn)品肺炎支原體（MP）核酸定量檢測試劑盒呼吸道合胞病毒（RSV）核酸定量檢測試劑盒人巨細(xì)胞病毒（HCMV）核酸定量檢測試劑盒EB病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測試劑盒腸道病毒（EV71型）核酸定量檢測試劑盒柯薩奇病毒A16型（CoxA16）核酸定量檢測試劑盒達(dá)生命之源安健康之本（1）熒光定量PCR法檢測呼吸系統(tǒng)感染兒童肺炎支原體DNA的分析[J]臨床兒科雜志

2002。（2）鼻咽癌患者血漿EB病毒DNA水平的動態(tài)變化與臨床療效的關(guān)系[J]癌癥2002。（3）檢測肺炎支原體抗體對小兒呼吸道疾病診斷的價值[J]

中國臨床醫(yī)藥研究雜志2003。（4）熒光定量PCR與常規(guī)PCR檢測沙眼衣原體、解脲支原體的比較[J]江西醫(yī)學(xué)檢驗2004。（5）熒光定量PCR法檢測呼吸道感染患兒支原體、衣原體感染[J]實用診斷與治療雜志2005。（6）尿巨細(xì)胞病毒定量檢測在巨細(xì)胞病毒感染診斷中的意義[J]實用兒科臨床雜志2006。（7）先天性心臟病患兒體內(nèi)人巨細(xì)胞病毒糖蛋白B基因型研究[J]中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志2008。（8）不同標(biāo)本EV71和CoxA16檢測對于手足口病重癥患者的臨床意義分析[J]中國衛(wèi)生檢驗雜志2009。（9）腸道病毒核酸檢測在兒童手足口病臨床診斷中的價值及意義