人體生物等效性試驗(yàn)豁免指導(dǎo)原則

————附件人體生物等效性試驗(yàn)豁免指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則適用于仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)中口服固體常釋制劑申請(qǐng)生物等效性（Bioequivalence）豁免。該指導(dǎo)原則是基于國(guó)際公認(rèn)的生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)（BiopharmaceuticsClassificationSystem，以下簡(jiǎn)稱(chēng)BCS）起草。一、藥物BCS分類(lèi)BCS系統(tǒng)是按照藥物的水溶性和腸道滲透性對(duì)其進(jìn)行分類(lèi)的一個(gè)科學(xué)架構(gòu)。當(dāng)涉及到口服固體常釋制劑中活性藥物成分（ActivePharmaceuticalIngredient，以下簡(jiǎn)稱(chēng)API）在體內(nèi)吸收速度和程度時(shí)，BCS系統(tǒng)主要考慮以下三個(gè)關(guān)鍵因素，即：藥物溶解性（Solubility）、腸道滲透性（Intestinalpermeability）和制劑溶出度（Dissolution）。（一）溶解性溶解性分類(lèi)根據(jù)申請(qǐng)生物等效豁免制劑的最高劑量而界定。當(dāng)單次給藥的最高劑量對(duì)應(yīng)的API在體積為250ml（或更少）、pH值在1.0—6.8范圍內(nèi)的水溶性介質(zhì)中完全溶解，則可認(rèn)為該藥物為高溶解性。250ml的量來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)的生物等效性研究中受試者用于服藥的一杯水的量。（二）滲透性滲透性分類(lèi)與API在人體內(nèi)的吸收程度間接相關(guān)（指吸收劑量的分?jǐn)?shù)，而不是全身的生物利用度），與API在人體腸道膜間滲透性藥物的吸收影響更顯著。因此，仿制制劑的輔料種類(lèi)必須與參比制劑完全相同，輔料的用量應(yīng)與參比制劑相似或相同。2．前藥（Prodrugs）前藥的滲透性通常取決于轉(zhuǎn)化藥物的機(jī)理和（解剖學(xué)上的）部位。若藥物前體-藥物的轉(zhuǎn)化主要表現(xiàn)在腸道膜滲透之后，則應(yīng)測(cè)定該藥物前體的滲透性。若轉(zhuǎn)化表現(xiàn)在腸道膜滲透之前，則應(yīng)測(cè)定該藥物的滲透性。藥物前體和藥物的溶出、pH溶解度數(shù)據(jù)也應(yīng)與之相關(guān)。3．復(fù)方制劑當(dāng)口服固體常釋的復(fù)方制劑中各活性組分均為BCS1類(lèi)藥物，可按BCS1類(lèi)藥物要求申請(qǐng)生物豁免，但應(yīng)證明各組分之間以及各組分與所有輔料之間沒(méi)有藥物代謝動(dòng)力學(xué)相互作用，否則不能申請(qǐng)豁免。當(dāng)口服固體常釋的復(fù)方制劑中各組分均為BCS3類(lèi)藥物或有BCS1類(lèi)和BCS3藥物，應(yīng)按BCS3類(lèi)藥物要求申請(qǐng)生物豁免，除證明各組分之間無(wú)藥物代謝動(dòng)力學(xué)相互作用外，還應(yīng)證明所有輔料為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局已經(jīng)批準(zhǔn)的常釋制劑常用輔料。4．基于BCS的生物豁免對(duì)下列情況不適用：（1）治療范圍狹窄的藥品受治療藥物濃度或藥效監(jiān)控的制約，按狹窄的治療范圍設(shè)計(jì)的制劑，不適用生物等效性豁免。如：地高辛、鋰制劑、苯妥英、茶堿和華法林阻凝劑。（2）口腔吸收制劑由于BCS分類(lèi)是基于胃腸粘膜的滲透和吸收，因此不適用于口腔吸收制劑，如：類(lèi)似舌下片或頰下片的制劑。對(duì)于口含片、口腔崩解片等，如果該制劑從口腔吸收也不適用。三、申請(qǐng)生物等效豁免應(yīng)提供的資料（一）高溶解性的數(shù)據(jù)支持（或文獻(xiàn)資料）1.測(cè)定方法的描述，包括分析方法和緩沖溶液的組成信息。2.原料藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)，分子量，性質(zhì)（酸、堿、兩性或中性）和解離常數(shù)（pKa）。3.測(cè)試結(jié)果（平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)）以表格的形式匯總，不同pH溶液、藥物溶解度（如mg/ml）以及溶解最大規(guī)格需要的介質(zhì)體積。4.pH-溶解度的曲線圖（二）高滲透性的數(shù)據(jù)支持（或文獻(xiàn)資料）1.測(cè)定方法的描述，包括分析方法和緩沖溶液的組成。2.人體藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究（PK），包括設(shè)計(jì)方案和PK數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)的方法。3.對(duì)于直接滲透性研究方法，需要說(shuō)明所用方法的適用性，包括研究方案的描述，受試者、動(dòng)物和上皮細(xì)胞系的選擇標(biāo)準(zhǔn)，供體液里的藥物濃度，分析方法的描述，計(jì)算吸收程度或滲透性的方法等信息。4.選擇的模型藥物的清單，應(yīng)包含以下數(shù)據(jù)：說(shuō)明研究方法適用性的人體內(nèi)的吸收度數(shù)據(jù)（平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)），每個(gè)模型藥物的滲透率值（平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)），每個(gè)模型藥物的滲透性分類(lèi)，并根據(jù)滲透性數(shù)據(jù)（平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差或95%置信區(qū)間）給吸收程度按照滲透性分類(lèi)上下限和所選內(nèi)標(biāo)作出標(biāo)示。支持一個(gè)被測(cè)原料藥高滲透性的信息包括：被測(cè)原料藥的滲透性數(shù)據(jù)、內(nèi)標(biāo)（平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)）和穩(wěn)定性信息，適當(dāng)?shù)臅r(shí)候包括支持主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的數(shù)據(jù)，以及確定被測(cè)原料藥的高滲透性的研究方法。（三）快速、非常快速溶出和曲線相似性的數(shù)據(jù)支持1.測(cè)定方法的描述，包括分析方法和緩沖溶液的組成描述，溶出測(cè)定使用樣品的信息，包括批號(hào)、有效期、規(guī)格、重量等。2.按上述的推薦試驗(yàn)方法，使用12個(gè)單劑量仿制制劑和參比制劑所得到的溶出數(shù)據(jù)。應(yīng)報(bào)告獨(dú)立被測(cè)單元在每個(gè)規(guī)定時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)示量溶出百分?jǐn)?shù)。應(yīng)將平均溶出百分?jǐn)?shù)、溶出范圍和變異系數(shù)（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）制表。在三種溶出介質(zhì)中的仿制制劑和參比制劑的平均溶出曲線也應(yīng)作圖表示出來(lái)。3.應(yīng)提供支持仿制制劑和參比制劑在這三種溶出介質(zhì)中的溶出曲線相似性的數(shù)據(jù)，使用f2法進(jìn)行判斷的結(jié)果。四、推薦的原料藥分類(lèi)方法和制劑溶出特性測(cè)定方法（一）確定藥物(API)的溶解性分類(lèi)決定藥物的BCS分類(lèi)首先是測(cè)定API在生理pH條件下的平衡溶解度。原料藥pH-溶解性曲線的測(cè)定應(yīng)該在37℃±1℃，pH1.0—6.8的水溶性介質(zhì)中測(cè)定，該曲線上的pH值選擇應(yīng)該有充足的點(diǎn)，并且是在1.0—6.8的范圍內(nèi)，其測(cè)定點(diǎn)的選擇可以參照藥物的解離常數(shù)，包括pKa、pKa+1、pKa-1，以及1.0和6.8這幾個(gè)點(diǎn)。測(cè)定溶解度時(shí)每個(gè)pH值條件至少要平行測(cè)定三次，為保證溶解度數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，可能還需要更多次的重復(fù)測(cè)定?？刹捎锰囟ǖ臉?biāo)準(zhǔn)緩沖溶液作為溶劑，測(cè)定藥物的溶解度。如果特定的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液對(duì)藥物的理化性質(zhì)有影響，也可以使用其他的緩沖介質(zhì)。當(dāng)原料藥加入到作為溶劑的緩沖溶液中，此時(shí)溶劑的pH值需要進(jìn)行驗(yàn)證。預(yù)測(cè)藥物平衡溶解度的方法，除了傳統(tǒng)的搖瓶法，也可以使用酸堿滴定法及其他方法，但應(yīng)證明所用方法的合理性，并且有方法學(xué)數(shù)據(jù)的支持。（二）確定藥物(API)的滲透性分類(lèi)API的滲透性分類(lèi)可以通過(guò)受試者體內(nèi)試驗(yàn)確定，比如質(zhì)量平衡或是絕對(duì)生物利用度，也可以通過(guò)腸道灌注法來(lái)測(cè)定。推薦的不涉及人體受試者的方法包括：在合適的動(dòng)物模型的體內(nèi)或原位腸道灌注、離體腸道組織的滲透性檢測(cè)或者合適的單層上皮細(xì)胞的滲透性測(cè)定等。在很多情況下（例如，絕對(duì)生物利用度等于或大于85%；等于或大于85%的藥物以原型藥的形式從尿液中排出等），單一的檢測(cè)方法可能已足夠充分。當(dāng)一個(gè)單一的滲透性檢測(cè)不足以充分說(shuō)明藥物的滲透性類(lèi)別時(shí)，建議采用兩種不同的分析方法。當(dāng)不同實(shí)驗(yàn)類(lèi)型的研究結(jié)果存在矛盾時(shí)，應(yīng)考慮用人體數(shù)據(jù)替代體外或動(dòng)物數(shù)據(jù)。1．人體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究（1）質(zhì)量平衡研究(MassBalanceStudies)利用無(wú)標(biāo)記藥物、穩(wěn)定同位素或者放射性標(biāo)記藥物進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)質(zhì)量平衡研究可證明藥物的吸收程度。根據(jù)研究的可變性，應(yīng)納入足夠充分的受試者，為吸收程度的可靠評(píng)估提供支持。當(dāng)采用質(zhì)量平衡研究證明高滲透性時(shí)，應(yīng)提供額外的數(shù)據(jù)證明藥物在胃腸道的穩(wěn)定性，或者85%以上的原型藥物從尿液中排出。（2）絕對(duì)生物利用度研究(AbsoluteBioavailabilityStudies)口服的生物利用度試驗(yàn)可以用靜脈給藥作為參考。根據(jù)研究的可變性，一個(gè)研究中要考慮多個(gè)受試者以提供有效的吸收度估計(jì)。當(dāng)藥物的絕對(duì)生物利用度等于或大于85%，則不需要提供更多藥物在消化液中的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。2．腸道通透性檢測(cè)方法(IntestinalPermeabilityMethods)以下方法可以用來(lái)測(cè)定胃腸道中藥物的滲透性：（1）人體體內(nèi)腸道灌注研究；（2）使用合適的動(dòng)物模型，體內(nèi)或原位腸道灌注研究；（3）離體人或動(dòng)物腸道組織的體外滲透性研究；（4）單層人工培養(yǎng)上皮細(xì)胞的離體滲透性研究。體內(nèi)或原位動(dòng)物模型以及體外方法，例如使用動(dòng)物或人類(lèi)單層培養(yǎng)上皮細(xì)胞，都適用于被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物。有些原料藥在人體內(nèi)觀測(cè)到的低滲透性可能是由于藥物在膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（如p-糖蛋白）上的流失造成。當(dāng)這些模型中和藥物流失相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白缺失，或者其表達(dá)程度和人體相比較低，則當(dāng)藥物和轉(zhuǎn)運(yùn)流失相關(guān)的時(shí)候，滲透性分級(jí)失誤的幾率比被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)藥物幾率大。選定的研究方案中要表征出已知轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)。流失機(jī)制的函數(shù)表達(dá)式可以用雙向轉(zhuǎn)運(yùn)研究技術(shù)來(lái)說(shuō)明，即在使用未將外排系統(tǒng)飽和的特定藥物或化學(xué)物質(zhì)時(shí)，相較細(xì)胞膜頂部-基底側(cè)端方向的轉(zhuǎn)運(yùn)率，檢測(cè)到更高的細(xì)胞膜基底測(cè)端-頂部方向的轉(zhuǎn)運(yùn)率。此時(shí)，監(jiān)測(cè)體系中必須的腸道外排置信區(qū)間無(wú)法確定。相反，本指南中建議，對(duì)于被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物來(lái)說(shuō)，要限制非人體的滲透性檢測(cè)方法。當(dāng)基于BCS對(duì)藥物的滲透性進(jìn)行分類(lèi)時(shí)，如滿足下列任一條件，可以很明確地推斷出藥物是被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制：（1）人體內(nèi)，劑量（例如相關(guān)的臨床劑量范圍）和濃度-時(shí)間曲線下面積表現(xiàn)出線性（藥代動(dòng)力學(xué)）關(guān)系。（2）測(cè)量的體內(nèi)或原位滲透性與采用動(dòng)物模型時(shí)灌注液的初始藥物濃度（例如，250ml液體中分別溶解0.01、0.1和1倍最高劑量）無(wú)關(guān)。（3）使用適當(dāng)?shù)摹⒁驯蛔C明能表達(dá)已知轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的細(xì)胞培養(yǎng)方法時(shí)，其供體液和轉(zhuǎn)運(yùn)方向（例如，在給定的藥物濃度中，細(xì)胞膜基底側(cè)端-頂端方向和細(xì)胞膜頂端-基地側(cè)端方向的轉(zhuǎn)運(yùn)率并無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異）證明測(cè)得的體外滲透性與藥物的起始濃度（例如，在250ml液體中溶解0.01，0.1和1倍最高劑量）無(wú)關(guān)。為了申請(qǐng)人體生物等效性豁免而解釋一個(gè)滲透性檢測(cè)方法的實(shí)用性，應(yīng)當(dāng)用足夠的模型藥物來(lái)說(shuō)明受試者體內(nèi)的滲透性檢測(cè)值和藥物吸收程度數(shù)據(jù)的順序關(guān)系。人體內(nèi)腸道灌注研究，推薦使用6種模型藥物。動(dòng)物的體內(nèi)或原位灌注研究或者體外培養(yǎng)細(xì)胞研究，推薦20種模型藥物。根據(jù)研究的可變性，研究中應(yīng)使用足夠數(shù)量的被試者、動(dòng)物、離體組織樣品或者單層細(xì)胞，以提供可靠的藥物滲透性評(píng)價(jià)。這個(gè)順序關(guān)系應(yīng)考慮到高、低腸道通透性的原料藥的精確區(qū)別。為了說(shuō)明一個(gè)分析方法的適用性，應(yīng)該說(shuō)明模型藥物的滲透性：低滲透性（如，＜50%）、中滲透性（如，50%—84%）和高滲透性（≥85%）。申請(qǐng)者可在附錄A里面提供的藥物和/或化學(xué)物質(zhì)列表里面選擇化合物，若其他藥物有已知的吸收機(jī)制和體內(nèi)藥物吸收度的可靠性評(píng)價(jià)，也可以選擇這些藥物。在闡述了一個(gè)分析方法的適用性并且完善了同一個(gè)研究方案后，所有選擇的模型藥物后續(xù)分類(lèi)研究中不需重新檢測(cè)。而用一個(gè)低滲透率和一個(gè)高滲透率的模型藥物作為內(nèi)標(biāo)替代（例如，含有被測(cè)藥物的灌注液或供體液）。這兩個(gè)內(nèi)標(biāo)是在特定類(lèi)型灌注技術(shù)（如閉環(huán)技術(shù)）中流體體積標(biāo)記物之外的（或如聚乙二醇4000一樣的零滲透性化合物）。內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的選擇應(yīng)基于與被測(cè)藥物具有兼容性（例如，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)不應(yīng)顯示出任何顯著的物理、化學(xué)或者滲透性相互作用）。當(dāng)無(wú)法遵循該原則時(shí)，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的滲透性測(cè)定應(yīng)和被測(cè)原料藥一樣，使用同樣的受試者、動(dòng)物、組織或表皮細(xì)胞。內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的滲透性測(cè)試值在不同試驗(yàn)中不應(yīng)相差巨大，包括用來(lái)證明穩(wěn)定性的試驗(yàn)。在體外或原位試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，應(yīng)該測(cè)定膜中藥物的含量。對(duì)于特定條件下的分析方法，建議選擇一個(gè)和高/低滲透率分級(jí)上下限接近的內(nèi)標(biāo)物，用以對(duì)被測(cè)藥物的滲透性進(jìn)行分類(lèi)。例如，當(dāng)一個(gè)被測(cè)藥物的滲透性檢測(cè)值和選定的高滲透率內(nèi)標(biāo)藥物的滲透性相同或更高，則該藥物被認(rèn)為是具有高滲透性的。3．胃腸道穩(wěn)定性研究在測(cè)定吸收度時(shí)，以尿液的總放射性作為研究對(duì)象的質(zhì)量平衡研究，并沒(méi)有考慮到藥物在腸道膜滲透之前在胃腸液中發(fā)生降解的程度。此外，有些測(cè)定滲透性的分析方法可能是基于體內(nèi)或原位灌注到人和/或動(dòng)物的胃腸道中藥物的減少或清除。證明藥物在胃腸道的流失是發(fā)生在腸道薄膜滲透，而不是降解反應(yīng)，將幫助確定藥物的滲透性。藥物在胃腸道中的穩(wěn)定性可以利用在人體內(nèi)取出的胃液和腸液來(lái)證明。藥物溶液應(yīng)在這些液體中以37℃孵育一段時(shí)間，以模擬藥物在人體內(nèi)和該液體的接觸過(guò)程，例如，胃液中1小時(shí)，腸液中3小時(shí)。之后應(yīng)該用已驗(yàn)證的穩(wěn)定性測(cè)定方法來(lái)測(cè)定藥物濃度。這個(gè)操作中藥物顯著地分解（＞5%）可能代表著潛在的不穩(wěn)定性。獲得人胃腸液一般采用插管法，某些情況下會(huì)比較困難。在經(jīng)過(guò)適當(dāng)調(diào)整后，某些合適的動(dòng)物模型胃腸液或者模擬液體，例如中國(guó)藥典2015版收錄的標(biāo)準(zhǔn)胃液和腸液，也可以作為替代使用。（三）測(cè)定制劑的溶出特性和溶出曲線相似性比較采用中國(guó)藥典2015版附錄通則（0931）的方法1（籃法）,轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，或是方法2（槳法），轉(zhuǎn)速為每分鐘50或75轉(zhuǎn)，溶出介質(zhì)體積為500ml（或更少），溶出介質(zhì)：（1）0.1mol/LHCl或是不含酶的模擬胃液；（2）pH4.5緩沖介質(zhì)；（3）pH6.8緩沖介質(zhì)或是不含酶的模擬腸液。有明膠包衣的膠囊和片劑，則可以采用加酶的人工腸液和胃液。溶出儀應(yīng)滿足相關(guān)技術(shù)要求，并通過(guò)機(jī)械驗(yàn)證及性能驗(yàn)證試驗(yàn)。溶出裝置的選擇（籃法或槳法）應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品體外溶出和體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)的對(duì)比而確定。裝置1（籃法）通常適用于膠囊劑和易于漂浮的產(chǎn)品，裝置2（槳法）通常適用于片劑。對(duì)于某些片劑，在溶出時(shí)可能因?yàn)槠瑒┍澜夂蟪猎谌艹霰撞慷斐扇艹鰷p慢，在這種情況下籃法可能要優(yōu)于槳法。如果溶出測(cè)定條件為了更好地反映產(chǎn)品在體內(nèi)的快速溶出而需要調(diào)整（比如使用與上述不同的攪拌轉(zhuǎn)速），這樣的調(diào)整需要比較體外溶出和體內(nèi)吸收數(shù)據(jù)，以證明其合理性。（比如使用單一水溶液作為對(duì)照品的相對(duì)生物利用度研究）生物等效豁免試驗(yàn)至少需要12個(gè)單劑量產(chǎn)品進(jìn)行支持評(píng)估。需要取足夠多的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行溶出曲線的繪制（例如5min、10min、15min、20min和30min）。當(dāng)對(duì)仿制制劑和參比制劑的溶出曲線相似性比較時(shí)，應(yīng)使用相似因子（f2）法。相似因子是誤差平方和的倒數(shù)平方根的對(duì)數(shù)變換，是兩個(gè)曲線之間溶出百分率的相似性的表征。Rt為t時(shí)間點(diǎn)的參比制劑平均溶出量；Tt為t時(shí)間點(diǎn)的仿制制劑平均溶出量；n為取樣時(shí)間點(diǎn)的個(gè)數(shù)。當(dāng)f2值≥50時(shí)，認(rèn)為兩個(gè)物質(zhì)有相似的溶出特性。為了可以使用平均值，則變異系數(shù)（RSD）在第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)不應(yīng)超過(guò)20%，在其他時(shí)間點(diǎn)不應(yīng)超過(guò)10%。應(yīng)注意當(dāng)使用上述溶出介質(zhì)時(shí)，若仿制制劑和參比制劑均能在15分鐘內(nèi)溶出標(biāo)示量的85%及以上，則不必再利用f2法比較其相似性，可認(rèn)為溶出曲線相似。附錄A本附錄包括用于說(shuō)明滲透性試驗(yàn)適用性的推薦藥物。滲透性類(lèi)別藥物高滲透性（fa≥85%）安替比林、咖啡因、酮洛芬、甲氧萘丙酸、茶堿、美托洛爾、普萘洛爾、卡馬西平、苯妥英、丙吡胺、米諾地爾中滲透性（fa=50%—84%）氯非那敏、肌酐、特布他林、氫氯噻嗪、卡托普利、呋喃苯胺酸、二甲雙胍、阿米洛利、阿替洛爾、雷尼替丁低滲透性（fa<50%）法莫替丁、納多洛爾、舒必利、賴諾普利、無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷、磷甲酸、甘露醇、氯噻嗪、聚乙二醇400、依那普利零滲透性FITC標(biāo)記葡聚糖、聚乙二醇4000、熒光黃、菊粉、乳果糖外排基質(zhì)地高辛、紫杉醇、奎尼丁、長(zhǎng)春堿附錄B參考文獻(xiàn)1．中國(guó)藥典2015年版.2．美國(guó)藥典USP39.3．FDA.Guidan