烘烤肉制品中3,4-苯并a檢測(cè)的前處理方法

烘烤肉制品中3,4-苯并a檢測(cè)的前處理方法

3、4-苯并合（a）（bap）是一種廣泛存在于環(huán)境中的多環(huán)芳香族碳?xì)浠衔铮╬ah）。肉制品中的Bap主要來(lái)源于加工和貯存過(guò)程,尤其在燒、烤、熏、炸過(guò)程中,有機(jī)物的不完全燃燒或者脂肪的高溫?zé)峤饩僧a(chǎn)生不同數(shù)量的Bap。Bap是一種強(qiáng)致癌物質(zhì),高劑量時(shí)能夠引起免疫抑制,對(duì)健康造成潛在的威脅。我國(guó)國(guó)標(biāo)限定Bap在肉制品中的殘留量應(yīng)在5μg·kg肉制品中Bap的前處理還存在很多問(wèn)題,如處理時(shí)間長(zhǎng)、步驟復(fù)雜、回收率不高等,樣品前處理越來(lái)越成為現(xiàn)代分析方法發(fā)展的瓶頸。筆者在綜合分析比較現(xiàn)有國(guó)內(nèi)外燒烤肉制品中Bap前處理方法11.1儀器、檢測(cè)方法ALPHA1-2LD真空冷凍干燥機(jī)(MartinChrist,Germany),固相萃取儀(美國(guó)Supelco),高效液相色譜儀-熒光檢測(cè)器(Agilent1100),JY92-Ⅱ超聲細(xì)胞破碎儀(寧波新芝生物科技股份有限公司),Allegra64R高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Beckman),RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。0.45μm濾膜Bap標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma,99%)、正己烷(色譜純)、乙腈(色譜純)、二甲亞砜(分析純)、氯化鈉(分析純)及C1.21.2.1貯備液a液準(zhǔn)確稱取Bap標(biāo)準(zhǔn)品10mg,置于100mL容量瓶中,加乙腈溶解并稀釋至刻度,該貯備液(A液)質(zhì)量濃度為100mg·L1.2.2超聲處理法取相同的電烤肉樣,切碎混勻,稱取2g冷凍干燥24h,磨碎,加入50mL正己烷,超聲處理8min,6000r·min1.2.3條件1色譜柱為supelcodiscoveryC22.1甲亞萃取用正己烷超聲提取Bap的過(guò)程中一些脂溶性物質(zhì)也被提取出來(lái),二甲亞砜萃取的作用是除去這些脂溶性雜質(zhì),把Bap分離出來(lái)。二甲亞砜的用量參照Falcón等2.22.2.1洗脫溶劑中bap含量的測(cè)定試驗(yàn)對(duì)3種洗脫液進(jìn)行了回收率試驗(yàn)。用12mL流動(dòng)相(乙腈和水體積比為75∶25)作為洗脫液進(jìn)行洗脫,連續(xù)收集洗脫液并測(cè)定其中Bap含量,結(jié)果表明Bap和雜質(zhì)都主要存在于第2~7mL洗脫液中,難以達(dá)到凈化的目的,并且回收率較低,只有46.27%。將流動(dòng)相乙腈與水的體積比改為65∶35,用12mL進(jìn)行洗脫并測(cè)定收集液中的Bap含量。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Bap主要存在于中間6mL洗脫液中,前面2mL和后面的4mL中Bap含量很少而雜質(zhì)含量卻較多,回收率達(dá)到109.80%。因此,可以通過(guò)選擇洗脫液的收集范圍來(lái)達(dá)到凈化的目的,存在的問(wèn)題是洗脫液不易濃縮。選擇正己烷作為洗脫液,洗脫效果良好,回收率高且易進(jìn)行濃縮,因此選擇正己烷作為洗脫液。2.2.2最好的洗脫體積在15mL二甲亞砜與25mL水的混合液中分別加入40、60和80ngBap標(biāo)樣,過(guò)C2.2.3保持固相萃取柱的溫度小柱在使用之前需要用極性溶劑如二氯甲烷等進(jìn)行清洗以除去干擾物質(zhì),然后用5mL乙腈和10mL水活化,目的是創(chuàng)造一個(gè)與樣品溶劑相容的環(huán)境。為了使固相萃取柱的吸附劑能保持濕潤(rùn),應(yīng)在吸附劑上保持1mL左右活化處理溶劑。萃取過(guò)程中流速保持在2mL·min2.3超聲細(xì)胞粉碎儀低熱試驗(yàn)取相同的電烤肉樣,每份稱取2g(每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)),冷凍干燥24h,磨碎,按20ng·g試驗(yàn)中所用的超聲細(xì)胞粉碎儀采用變幅桿式電壓超聲換能器,由于換能器輸出功率較大,工作過(guò)程中易發(fā)熱,不宜長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)工作,所以在試驗(yàn)過(guò)程工作6s停3s。另外由于換能器在沒(méi)有介質(zhì)的情況下工作易燒壞,超聲提取儀要確保提取器被介質(zhì)浸沒(méi),一般以1cm左右為好,提取開(kāi)始時(shí)要將固液充分?jǐn)嚢杈鶆?以減少試驗(yàn)誤差。2.4最低檢測(cè)限及檢出限將標(biāo)準(zhǔn)溶液依次按0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0μg·L以能檢測(cè)到3倍于噪音峰高的質(zhì)量濃度作為最低檢測(cè)限,試驗(yàn)中Bap的檢出限為0.04μg·L2.5樣品長(zhǎng)度和時(shí)間的確定準(zhǔn)確稱取相同的烤肉樣品4份,每份2g,其中3份分別按1、5和10ng·g3超聲萃取測(cè)定bap殘留量的測(cè)定本試驗(yàn)將超聲提取、液液萃取和固相萃取聯(lián)用對(duì)烤肉進(jìn)行前處理,用高效液相色譜-熒光檢測(cè)器測(cè)定Bap的殘留量,結(jié)果表明:樣品