柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠的抗抑郁作用

柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠的抗抑郁作用

柴胡嘉隆谷煮牡蠣治療（clsd）源于傷寒。根據(jù)小柴胡湯（xcd）的記載，它是由甘草和其他藥物引起的。然后加入龍骨、牡蠣、桂枝、椰子和大黃。原書主治“傷寒八九日,下之,胸滿煩驚,小便不利,譫語,一身盡重,不可轉(zhuǎn)側(cè)者”。全方寒溫并用,攻補(bǔ)兼施,具有疏肝理氣,通陽泄熱,重鎮(zhèn)安神之功,尤適用于病情錯(cuò)綜復(fù)雜的證候。現(xiàn)今在臨床上多用于抑郁癥的治療,被認(rèn)為是最適合的古方之一。而小柴胡湯則鮮有用于抑郁癥的報(bào)道。近年本實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn),柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)多種經(jīng)典的抑郁動(dòng)物模型均顯示出抗抑郁作用,對(duì)抑郁大鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)具有明顯的升高作用,并通過逆轉(zhuǎn)HPA軸(下丘腦-垂體-腎上腺素)功能亢進(jìn)發(fā)揮抗抑郁活性。為了研究柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯以及非小柴胡湯部分(即龍骨、牡蠣、桂枝、茯苓、大黃)抗抑郁作用的差別,本實(shí)驗(yàn)采用慢性應(yīng)激的方法造成大鼠抑郁模型,觀察不同藥物組成對(duì)慢性應(yīng)激引起的動(dòng)物行為的變化。1材料表面1.1不同種類植物的干酵母粉的制備柴胡加龍骨牡蠣湯中各藥材(去鉛丹)均購自南京市金陵大藥房,并經(jīng)本校中藥資源學(xué)研究室秦民堅(jiān)博士鑒定:人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根;桂枝為樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥嫩枝;半夏為天南星科植物半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit.的干燥塊莖;茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核;黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根;柴胡為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根;大黃為蓼科植物掌葉大黃RheumpalmatumL.的干燥根及根莖;甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizgauralensisFisch.的干燥根及根莖;牡蠣ConchaOstreae;龍骨FossiliaOssisMastodi;姜為姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.的根莖;大棗為鼠李科植物棗ZiziphusjujubeMill.的干燥成熟果實(shí)。柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯和龍骨、牡蠣、桂枝、茯苓、大黃方(龍牡桂苓軍)均按原方比例配方。用10倍量水煎煮兩次,合并濾液蒸干,制備成浸膏凍干粉,柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯、龍骨牡蠣軍的得率分別為16.9%、19.8%以及12.3%。各凍干粉放于-20℃冰箱里儲(chǔ)存?zhèn)溆?臨用時(shí)用蒸餾水配成所需濃度。鹽酸氟西汀膠囊(fluoxetinehydrochloridecapsules,FLU)為加拿大奧貝泰克制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)HD0560。1.2動(dòng)物SD大鼠,♂,體重180~200g,由中國藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物分籠飼養(yǎng),保持晝夜節(jié)律,室溫22±1℃,食水自由。2方法2.1動(dòng)物模型轉(zhuǎn)化所有大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)7天后,用Open-Field法作行為學(xué)評(píng)分,選擇得分相近的90只大鼠隨機(jī)分為9組:正常組(Normal);模型組(Model);陽性藥對(duì)照組(FLU,20mg/kg);柴胡加龍骨牡蠣湯高、低(500、200mg/kg)劑量組;小柴胡湯高、低(800、320mg/kg)劑量組;龍牡桂苓軍高、低(200、80mg/kg)劑量組。除正常組外,其余各組均連續(xù)接受各種不同的應(yīng)激以復(fù)制慢性應(yīng)激抑郁模型。動(dòng)物模型根據(jù)文獻(xiàn)方法改進(jìn),每天隨機(jī)選取以下應(yīng)激中的任意一種:冷水游泳(4℃,5min)、熱應(yīng)激(45℃,5min)、禁水(24h)、禁食(24h)、夾尾(1min)、水平搖晃(60Hz,15min)和晝夜顛倒等刺激,平均每種刺激各3次,使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生,以避免發(fā)生適應(yīng)性。各組每日上午8時(shí)灌胃給藥,連續(xù)21d,正常組和模型組給予等量蒸餾水。各組動(dòng)物于d1、d7、d14、d21稱量體重。2.2行為觀察指標(biāo)2.2.1運(yùn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)得分所有動(dòng)物于d21灌胃后1~2h,置于安靜、黑暗的箱子里進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。水平運(yùn)動(dòng)得分:大鼠置于敞箱中央格,以穿越1格為1分(四爪均進(jìn)入方格才計(jì)數(shù));垂直運(yùn)動(dòng)得分:兩前爪騰空或攀附墻壁次數(shù)。水平活動(dòng)得分反映大鼠的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)性水平;垂直活動(dòng)得分則反映其興趣高低。2.2.2大鼠攝食蔗糖溶液量的檢測(cè)所有大鼠于實(shí)驗(yàn)d19起禁食水24h(期間灌胃1次),于d20予食物及1%蔗糖水溶液200mL,觀測(cè)大鼠在24h內(nèi)的飲用蔗糖水溶液量。比較正常組大鼠、模型組以及各給藥組大鼠在糖水消耗及糖水偏愛方面的差異。糖水偏愛(SucrosePreference,SP)以蔗糖水溶液的消耗量(mL)/總液體的消耗量(mL)×100%表示。2.3各組大鼠的馬匹比測(cè)量實(shí)驗(yàn)最后一天各組大鼠稱重,股動(dòng)脈取血處死,取雙側(cè)的海馬,稱重。取海馬與大腦重量的比值,以消除各組體重差異的影響。2.4腺組織的制備實(shí)驗(yàn)最后一天各組大鼠稱重,股動(dòng)脈取血處死,剖開腹腔,把腎上腺連同周圍少量脂肪組織一起摘出,浸入生理鹽水中洗凈附著的血液,并將殘余的脂肪組織剔除干凈,用濾紙吸干表面水分,迅速稱重。腎上腺指數(shù)=腎上腺重量(g)×1000/大鼠體重(g)2.5統(tǒng)計(jì)方法數(shù)據(jù)以xˉ±sxˉ±s表示,組間比較采用t檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1動(dòng)物行為指標(biāo)的影響3.1.1大鼠的運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)情況結(jié)果見表1。經(jīng)過21天的不可預(yù)見性慢性應(yīng)激,模型組與空白組相比較,大鼠的水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)均明顯減少;與模型組相比,氟西汀、柴胡加龍骨牡蠣湯(全方組)高低劑量組及龍牡桂苓軍高劑量組均能明顯增加大鼠的水平得分、垂直得分,高劑量小柴胡湯組的水平得分明顯增加。3.1.2水消耗量測(cè)定結(jié)果見表1。模型組與空白組相比,24h糖水消耗量明顯減少;柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組、龍牡桂苓軍高低劑量組、小柴胡湯高劑量組以及氟西汀組可顯著增加24h糖水消耗量。3.2慢性應(yīng)激測(cè)試大鼠海馬小結(jié)果見表1。與空白組相比,模型組的海馬體積明顯減小(P<0.01),提示慢性應(yīng)激可造成大鼠海馬的縮小。氟西汀組、柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組以及龍牡桂苓軍高低劑量組能明顯對(duì)抗慢性應(yīng)激大鼠的海馬萎縮。3.3對(duì)慢性應(yīng)激大鼠臟器臟器免疫組化的影響結(jié)果見表1。模型組與空白組相比,腎上腺指數(shù)明顯升高,氟西汀組、柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組、龍牡桂苓軍高低劑量組可明顯降低慢性應(yīng)激大鼠的腎上腺指數(shù),龍牡桂苓軍低劑量組的效果尤為明顯。4慢性應(yīng)激模型傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為,抑郁癥屬郁證范疇。由情志不舒,肝氣郁結(jié),漸致五臟不和,化火、生痰、瘀阻、耗氣、傷陰等而致。臨床多從肝臟論治,常用柴胡劑。其中柴胡加龍骨牡蠣湯被認(rèn)為是最適合于治療抑郁癥的古方之一,甚至有“抑郁狀態(tài)為柴胡加龍骨牡蠣湯之證”之說。雖然柴胡加龍骨牡蠣湯是由小柴胡湯演變而來的,但是臨床上鮮有用小柴胡湯原方治療抑郁癥的報(bào)道。抑郁癥的病因尚未徹底闡明,目前認(rèn)為慢性、低水平、長(zhǎng)期的應(yīng)激源是促進(jìn)抑郁發(fā)生、加重病情的主要原因。慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁模型就是根據(jù)此理論依據(jù)建立,其特點(diǎn)就是應(yīng)激因子的多變性和不可預(yù)見性,已成為國內(nèi)外學(xué)者探討抑郁癥的發(fā)病機(jī)制及抗抑郁劑作用機(jī)理而廣泛應(yīng)用的動(dòng)物模型。慢性應(yīng)激模型中大鼠活動(dòng)減少、快感缺失與抑郁證患者表現(xiàn)出的情緒低落、興趣喪失有一定程度的相似性。海馬是在眾多腦區(qū)中被認(rèn)為與抑郁癥的關(guān)系最為密切的腦區(qū)之一。重癥抑郁病人左右側(cè)海馬較之正常人顯著縮小,且縮小程度與抑郁持續(xù)時(shí)間呈正相關(guān)。Rubin等研究發(fā)現(xiàn),與健康者相比,抑郁患者的腎上腺皮質(zhì)增生約38%,增生的程度與皮質(zhì)醇的濃度有關(guān),且隨著抑郁的緩解,這種增生似乎也隨著皮質(zhì)醇的正?；鸩较АＲ虼?本實(shí)驗(yàn)采用慢性應(yīng)激模型,通過大鼠活動(dòng)能力、糖水消耗、腎上腺指數(shù)以及海馬體積的變化,考察了小柴胡湯、柴胡加龍骨牡蠣湯及龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃的抗抑郁作用。發(fā)現(xiàn)龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃與柴胡