公豬精液帶毒與精液凈化技術進展課件

公豬精液帶毒

與精液凈化技術進展況洪

第九屆全國AI關鍵技術研討會2015/06/03北京雁棲湖公豬精液帶毒

與精液凈化技術進展1兩個主題養(yǎng)豬業(yè)精液污染問題探討精液凈化技術研究進展兩個主題養(yǎng)豬業(yè)精液污染問題探討“精液”在疾病傳播中

扮演什么角色？AI是一種將優(yōu)秀基因引入母豬群的非常有效的工具。“精液”在疾病傳播中AI是一種將優(yōu)秀基因引入母豬群的非常有

豬垂直傳播疾病母豬→仔豬：1、經(jīng)胎盤血液直接感染2、分娩時直接或間接接觸感染

3、乳汁（如：仔豬流行性腹瀉）種公豬→精液→母豬：垂直傳播：病原體經(jīng)母體卵巢、子宮或胎盤、初

乳等傳給子代的過程。人工授精自然交配精液豬垂直傳播疾病母豬→仔豬：1、經(jīng)胎盤血液直接感染種公引起豬繁殖障礙的病原（一）可引起母豬繁殖障礙的病原布魯氏菌、鉤端螺旋體、衣原體、弓形體、

CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、PPV、SIV、乙腦病毒、腸病毒、巨細胞病毒、曼那角病毒等引起豬繁殖障礙的病原（一）可引起母豬繁殖障礙的病原（二）可引起公豬睪丸功能障礙的病原布魯氏菌、豬丹毒、豬鏈球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、豬肺炎支原體、乙腦病毒、CSFV、PRRSV、PCV、PPV等（二）可引起公豬睪丸功能障礙的病原公豬精液中能檢出的病毒--國外報導引自Virusesinboarsemen:detectionandclinicalaswellasepidemiologicalconsequencesregardingdiseasetransmissionbyarti?cialinseminationTheriogenology63(2005)556–572傳播風險最大，感染后7~50d精液排毒，持續(xù)期長；對精子產(chǎn)生過程有顯著影響，降低精子量和精子活力。能感染公豬睪丸，從精液排毒，并能通過人工受精感染母豬，病毒能通過胎盤屏障感染仔豬，胚胎仔豬間能互相傳染。公豬精液中能檢出的病毒--國外報導引自Virusesin公豬精液中能檢出的細菌其他：芽孢桿菌、放線桿菌、黃桿菌、克雷伯菌、檸檬酸桿菌、變形桿菌、

腸桿菌、沙雷氏菌、產(chǎn)檢桿菌、棒狀桿菌、綠膿桿菌、腸球菌、念珠菌、波氏菌、產(chǎn)氣桿菌非豬病原體，但可以殺死精子：木糖氧化產(chǎn)堿菌、洋蔥假單胞菌、陰溝腸桿菌、黏質沙雷菌、嗜麥芽糖黃單胞菌。來自美國和瑞典人工授精中心數(shù)據(jù)公豬精液中能檢出的細菌其他：芽孢桿菌、放線桿菌、黃桿菌、克雷公豬精液中能檢出的病毒—國內報導張志，劉爽，張燕霞.豬精液中五種病毒的初步檢測[J].動物醫(yī)學進展,2012,33(7):112-115中國動物衛(wèi)生與流行病學中心數(shù)據(jù)這兩個豬場都采用自繁自養(yǎng)模式。豬場的發(fā)病與否與種公豬帶毒密切相關，即種公豬帶毒率高，豬場發(fā)病機會增大。公豬精液中能檢出的病毒—國內報導張志，劉爽，張燕霞.豬精液中公豬精液中能檢出的病毒—國內數(shù)據(jù)公豬精液中能檢出的病毒—國內數(shù)據(jù)10有很確切的證據(jù)表明歐洲型藍耳是引種來的有很確切的證據(jù)表明歐洲型藍耳是引種來的11王軍一，金擴世，徐敬龍.山東種公豬精液攜帶主要病原的檢測[J].動物醫(yī)學進展，2012,33（8）：108-111.馮迎春，黃攀，顏其貴.四川部分豬場公豬精液帶毒情況的PCR和RT-PCR檢測[J].養(yǎng)豬.2010,（5）：71-72.覃芳蕓，黃夏，陳義祥等.廣西部分種豬場公豬精液中豬瘟和PRRS帶毒情況的調查[J].畜牧與獸醫(yī)，2007,39（12）:52-53.黃夏，陳義祥等.公豬精液CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV的PCR檢測[J].廣西農業(yè)科學,2008,39（2）.云南省種公豬精液中乙型腦炎病毒的監(jiān)測-畜牧與獸醫(yī)-2012,44(2).雷湘蘭，馬乃祥，沈振國.海南種公豬精液中的病毒調查研究[J].養(yǎng)豬，2012，（4）：40.孫泉云，周錦萍，張維誼等.種公豬精液中與繁殖障礙有關的6種病毒的檢測[J].動物醫(yī)學進展，2007,28（11）：30-33.周斌，吳增堅.種公豬精液中豬瘟和藍耳病病毒混合感染的快速檢測[J].畜牧與獸醫(yī)，2005,37（5）.參考文獻：王軍一，金擴世，徐敬龍.山東種公豬精液攜帶主要病原的檢測[J12從國內外數(shù)據(jù)看出，多種病毒能從公豬精液中檢出；公豬精液中可能存在藍耳、豬瘟、偽狂犬、圓環(huán)、細小等病毒；精液中可能存在多病原混合污染現(xiàn)象；藍耳病、豬瘟、偽狂犬、細小、圓環(huán)等已證明可通過精液傳播；在考慮疫病防控和凈化時，必須重視種公豬精液污染和疫病傳播風險問題。公豬精液中能檢出的病毒

小結從國內外數(shù)據(jù)看出，多種病毒能從公豬精液中檢出；在考慮疫病防控能通過精液傳播的病原能通過精液傳播的病原14病毒感染的危險性病毒的排毒可能出現(xiàn)在出現(xiàn)臨床癥狀前就開始。臨床癥狀為溫和型或無癥狀。排毒在癥狀消失后還會持續(xù)很長時間。間歇排毒。病毒感染的危險性病毒的排毒可能出現(xiàn)在出現(xiàn)臨床癥狀前就開始。15病原污染公豬精液的方式（內源、外源）精液精液采集、加工、貯存、運輸公豬生殖、泌尿系統(tǒng)感染（睪丸、附腺、包皮排毒）血源性感染污染的水、飼料、空氣、器具、人糞便污染包皮污染內源性污染外源性污染病原污染公豬精液的方式（內源、外源）精液精液采集、加工、16精液污染病原體的危害影響精子活性--由于營養(yǎng)物質減少、pH值降低、毒素產(chǎn)生生存能力、運動能力、繁殖能力下降，導致精子細胞不成熟，精子凝集、死亡。如E.coli、PRRSV（頂體異常，畸形增加，一次射精新鮮精液含700TCID50/ml）降低精子保存時間導致母豬不育和繁殖障礙--由于公豬精子漿膜上有對卵子透明帶的接受器，可將病原傳給卵子受胎率下降、胚胎早期死亡、母豬子宮內膜炎懷孕早期發(fā)生子宮內感染，胚胎被吸收、返情；懷孕中后期感染導致流產(chǎn)、產(chǎn)死胎/木乃伊胎仔豬隱性帶毒疫病擴散精液污染病原體的危害影響精子活性--由于營養(yǎng)物質減少、pH值人工授精傳播疾病經(jīng)典案例荷蘭1997年豬瘟疫情病毒血癥出現(xiàn)在臨床癥狀之前，公豬發(fā)病前精液帶毒在疫情被發(fā)現(xiàn)之前，感染仔豬已經(jīng)通過貨船從荷蘭運至意大利和西班牙。1992年荷蘭暴發(fā)豬瘟疫情后5年，1997年豬瘟在荷蘭南部再次暴發(fā)。1997年2月首例豬瘟疫情暴發(fā)，之后429起疫情相繼暴發(fā)，近700，000頭豬被銷毀。疫情來源——兩家精液收集中心AI1997年1月28日至1997年4月7日間生產(chǎn)的精液可能被豬瘟病毒污染。2月2頭公豬表現(xiàn)為急性發(fā)熱，6月6頭豬表現(xiàn)為食物攝入減少。潛伏期公豬的精液人工授精給母豬。1680頭母豬中有146頭因為人工授精被感染。人工授精傳播疾病經(jīng)典案例荷蘭1997年豬瘟疫情病毒血癥出

（一）OIE《陸生動物衛(wèi)生法典》4.6章牛、小反芻動物、豬精液采集和處理要求國際貿易要求檢測豬精液中的病原：豬布魯氏菌、FMDV、ASFV、PRRSV、PRV、TGEV、SVDV、CSFV。入境隔離前30d檢測、進入AI前28d檢測、AI內年檢。規(guī)定精液采集和加工的衛(wèi)生要求。精液質量的控制—已有的標準（一）OIE《陸生動物衛(wèi)生法典》精液質量的控制—已有的

（二）國家標準：GB23238-2009種豬常溫精液GB/T25172-2010豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術僅規(guī)定精液采集后細菌計數(shù)要求，對病毒感染方面尚無規(guī)定。（二）國家標準：引種及疫病檢測（PCR/RT-PCR的靈敏度）科學的飼養(yǎng)管理和良好的舍飼條件嚴格的生物安全措施（疫苗接種的風險）病原監(jiān)測（間歇排毒的風險）、及時淘汰病豬建立SPF的人工授精中心精液采集、加工處理、檢測、儲存、運輸過程的控制正確的人工授精操作。精液質量的控制—供體公豬精液采集、加工和貯存母豬評估各環(huán)節(jié)疾病傳播的風險引種及疫病監(jiān)測加入廣譜抗菌素。？？？引種及疫病檢測（PCR/RT-PCR的靈敏度）精液質量的控精液凈化技術最新進展—

靚精?靚精?

讓您不再對精液污染束手無策。精液凈化技術最新進展—靚精?讓您不再對精液污染束手無策。22精液凈化技術進展—靚精?能快速抑制和殺滅精液中多數(shù)細菌及其他微生物；能徹底殺滅CSFV、PRRSV（經(jīng)典株及變異株）、PRV、PPV、PCV-2；對精子、受精卵、胚胎發(fā)育安全，且能顯著減低精子畸形率，延長精液保存時間；能顯著減少因人工授精操作不當引起的母豬產(chǎn)道疾病，降低母豬返情率、提高妊娠率，降低仔豬畸形率、提高健仔率和窩產(chǎn)子豬頭數(shù)。精液凈化技術進展—靚精?能快速抑制和殺滅精液中多數(shù)細菌及其靚精?對精子活力的影響（四川省種豬性能測定中心)靚精?對精子活力的影響（四川省種豬性能測定中心)24靚精?對精子活力的影響（四川省種豬性能測定中心)靚精?對精子活力的影響（四川省種豬性能測定中心)25靚精?對精子活力的影響

添加終濃度為0.5%和1%靚精?組的精子總體活力和前進式活力在同一時間均高于對照組，而快速前進活力在前五天各項指標均比對照組低，從第六天起，各項指標均高于對照組。

添加終濃度為0.75%靚精?的精液精子的三項活力指標在試驗的同一時間均高于對照組及其他試驗組；

與對照組相比，添加終濃度為2%的靚精?會降低精子總體活力、精子前進式活力及快速前進式活力，縮短精液保存時間。即終濃度低于1.0%為靚精?安全使用濃度。由表1、表2、表3可以看出：靚精?對精子活力的影響添加終濃度為0.5%和1%靚26精子稀釋液中添加靚精對精子的影響——來源于中國農大試驗報告精子稀釋液中添加靚精對精子的影響27精液稀釋液中添加不同濃度靚精，6h進行首次檢測，之后間隔12h檢測一次。從表中可以發(fā)現(xiàn)在30h時0.75%組的直線運動精子活率顯著高于1%組，而與其他兩組間無顯著差異。42h時0.75%組的精子活率顯著高于對照組，而與0.5%及1%兩組間沒有顯著差異；并且0.75%組的A+B級精子比例顯著高于對照組和0.5%組；而0.75%組的直線運動精子活率顯著高于其他三組。精液稀釋液中添加靚精對精子的影響—結論精液稀釋液中添加不同濃度靚精，6h進行首次檢測，之28本實驗中添加靚精至精液稀釋液中，使用計算機輔助精液分析系統(tǒng)（CASA）檢測精子指標，如精子活率、A級+B級精子比例、直線運動精子比例、平均曲線運動速度（Curvilinearvelocity，VCL）、平均直線運動速度（Straightlinevelocity，VSL）、精子平均側擺幅度（Amplitudeoflateralheaddisplacement，ALH）以及運動的直線性（Linearity，LIN）等[10]。通過實驗結果發(fā)現(xiàn)，當精液保存一定時間時，靚精添加濃度為0.75%的實驗組的精子活率和直線運動性比其他組效果都好。精液稀釋液中添加靚精對精子的影響—結論精液稀釋液中添加靚精對精子的影響—結論29《上海畜牧獸醫(yī)通訊》2015年4月刊出《上海畜牧獸醫(yī)通訊》2015年4月刊出30表一M199中添加靚精對卵母細胞成熟率的影響

表二M199中添加靚精對卵母細胞孤雌后發(fā)育能力的影響注：組間沒有顯著差異（P<0.05）注：組間沒有顯著差異（P<0.05）以上數(shù)據(jù)來源中國農大試驗報告表一M199中添加靚精對卵母細胞成熟率的影響表二M131結果如表1和表2所示，添加靚精培養(yǎng)組卵母細胞成熟率與對照組間沒有顯著差異。同時對后期發(fā)育結果統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)所有組間卵裂率和囊胚率都沒有顯著差異，然后對囊胚進行TUNEL染色統(tǒng)計囊胚總細胞數(shù)和凋亡細胞數(shù)，均未發(fā)現(xiàn)顯著差異。以上數(shù)據(jù)來源中國農大試驗報告M199中添加靚精對卵母細胞成熟的影響結果如表1和表2所示，添加靚精培養(yǎng)組卵母細胞成熟率與對照32PZM-3中添加靚精對卵母細胞孤雌后期發(fā)育的影響卵母細胞電激活后，放入含有靚精和正常的化學輔助激活藥物的培養(yǎng)液滴中，4h后全部換至正常胚胎培養(yǎng)液中培養(yǎng)。結果顯示對照組的卵裂率（61.22%）和囊胚率（35.54%）與添加靚精的實驗組間均無顯著差異，四組囊胚染色后總細胞數(shù)和凋亡細胞數(shù)間同樣沒有顯著差異。注：組間沒有顯著差異（P<0.05）。以上數(shù)據(jù)來源中國農大試驗報告PZM-3中添加靚精對卵母細胞孤雌后期發(fā)育的影響卵母細胞電激33精液稀釋液中添加靚精對IVF的影響注：組間沒有顯著差異（P<0.05）。精子經(jīng)添加不同濃度靚精的精液稀釋液稀釋后放置一天，用于體外受精。結果如表所示，含不同濃度靚精的精液稀釋液稀釋的精液用于體外受精后，觀察結果發(fā)現(xiàn)對照組卵裂率（61.08%）和囊胚率（21.62%）與其他三組間沒有顯著差異；進一步進行囊胚凋亡染色，發(fā)現(xiàn)囊胚細胞數(shù)和凋亡細胞數(shù)間也都沒有顯著差異。以上數(shù)據(jù)來源中國農大試驗報告精液稀釋液中添加靚精對IVF的影響注：組間沒有顯著差異（P<34經(jīng)過一系列實驗證明：在卵母細胞成熟液、胚胎培養(yǎng)液和精子稀釋液中添加靚精觀察卵裂率、囊胚率、囊胚總細胞數(shù)及凋亡細胞數(shù)。結果顯示添加靚精的實驗組的所有指標與對照組間均無顯著差異，這表明靚精不會危害卵母細胞的成熟及后期發(fā)育，并且精液稀釋液中靚精濃度為0.75%時，精子的保存效果更好。靚精對卵母細胞及精子毒害作用研究——總結以上數(shù)據(jù)來源中國農大試驗報告經(jīng)過一系列實驗證明：在卵母細胞成熟液、胚胎培養(yǎng)液和精子稀釋液35靚精?——對細菌效果試驗數(shù)據(jù)（四川華派生物制藥有限公司)靚精?——對細菌效果試驗數(shù)據(jù)（四川華派生物制藥有限公司36靚精?對細菌效果試驗數(shù)據(jù)不同來源的精液中菌落總數(shù)差異較大。在精液采集后12h和144h，添加1.0%靚精?的各試驗組菌落總數(shù)均比同一時間對照組精液菌落總數(shù)低。因此，添加1.0%靚精?能有效控制精液中的細菌總數(shù)。

靚精?對細菌效果試驗數(shù)據(jù)不同來源的精液中菌落總數(shù)差異較大。37靚精?對細菌效果試驗數(shù)據(jù)(四川華派生物制藥有限公司)靚精?對細菌效果試驗數(shù)據(jù)(四川華派生物制藥有限公司)從表5中可以看出:2%靚精?對實驗中所示全部病原菌在1分鐘內能達到100%的殺滅率；1%靚精?對實驗中所示全部病原菌在10分鐘內的殺滅率能到達到100%，作用5分鐘能對所有病原菌達到98%以上的殺滅率；0.5%靚精?在10分鐘內對兩株大腸桿菌的殺滅率能達到100%，而對另外四株病原菌的殺滅率在10分鐘內不能完全殺滅。靚精?——對細菌效果試驗數(shù)據(jù)從表5中可以看出:靚精?——對細菌效果試驗數(shù)據(jù)靚精?——對病毒試驗數(shù)據(jù)由表6可以看出，靚精?對五種病毒的完全殺滅濃度均遠低于安全濃度1.0%。(四川華派生物制藥有限公司)靚精?——對病毒試驗數(shù)據(jù)由表6可以看出，靚精?對五種病毒的公豬精液帶毒與精液凈化技術進展課件41靚精?——實驗數(shù)據(jù)總結結合以上報告可以看出：

使用濃度靚精?對公豬精子、受精卵、胚胎發(fā)育安全無害，并能延長精子有效存活時間，降低精子畸形率，提高精子質量；

在實驗條件下，靚精?能有效減少精液中的細菌總數(shù)，在10分鐘內能完全殺滅五種試驗病菌，且在0.25%以下能完全殺滅精液中的五種豬病病毒。

靚精?——實驗數(shù)據(jù)總結結合以上報告可以看出：42靚精?——主要成分：

特制高分子生物有機碘、組合增效劑及精子保護劑。靚精?——主要成分：實驗室精液處理：將靚精?與精液稀釋液按照1:1000-2000的比例提前配制好，再用于稀釋原精。注意計算最佳使用終濃度為0.3-0.75%之間。然后按照正常程序稀釋、分裝、保存精液。靚精?使用方法一：精液預防添加關于使用濃度：預防控制：推薦0.3-0.5％左右；污染凈化或感染壓力大時推薦0.5－0.75％；最簡單的用法：10毫升靚精?加入2000毫升精液稀釋液。實驗室精液處理：將靚精?與精液稀釋液按照1:1000-2靚精?使用方法二：公豬采精過程公豬：清洗公豬體表污物，尤其是下腹及側腹，修剪公豬包皮被毛，擠出包皮積液，用0.5%靚精?溶液(用純凈水稀釋即可）噴灑清洗腹部及包皮、陰莖，摸干。采精員：采精前充分洗滌雙手，用0.5%靚精?溶液擦拭后操作。重復使用器械：對實驗室重復使用器械如燒杯、玻璃棒等做清洗、消毒（0.5%靚精?浸泡）、烘干。靚精?使用方法二：公豬采精過程公豬：清洗公豬體表污物，尤其是靚精?使用方法三：母豬輸精過程

1、待配母豬：先用清水將母豬尾根及外陰周圍皮膚的糞污擦洗干凈，然后用0.5%靚精溶液擦洗一遍。2、配種員：操作前雙手用0.5%靚精?溶液浸泡或擦拭消毒。靚精?使用方法三：母豬輸精過程靚精?臨床使用案例案例