elisa檢驗結(jié)果的質(zhì)量控制

elisa檢驗結(jié)果的質(zhì)量控制

elisa試驗，即免疫吸附試驗，是各級醫(yī)院免疫室最常用、最基礎的實驗項目之一。它可用于檢測大多數(shù)項目，如甲肝、肝臟、肝腎、甲狀腺功能、腫瘤征象等。隨著醫(yī)療體制改革的不斷深入和“舉證責任倒置”的實施,患者對醫(yī)療質(zhì)量的關(guān)注不斷加大,檢驗報告作為“證據(jù)”,無論是對患者、對醫(yī)院、還是對檢驗人員自身,都起著至關(guān)重要的作用。因此,檢驗結(jié)果的質(zhì)量保證就顯得尤為重要。質(zhì)量保證的核心是質(zhì)量控制,它不僅包括分析中嚴格遵守操作規(guī)程,嚴格質(zhì)量控制,而且包括分析前質(zhì)量控制和分析后質(zhì)量控制。1分析前質(zhì)量控制1.1化驗表的編寫名字清楚,項目齊全,臨床診斷最重要,這也是分析后質(zhì)控所需要的。1.2采集標本前需注意的情況為避免一些生理因素如年齡、性別、妊娠、月經(jīng)期等因素對實驗結(jié)果的錯誤解釋,應要求病人如實反映實際情況,積極配合;采集標本前要求病人處于休息狀態(tài),劇烈運動后可使標本中某些成分升高;要求病人空腹采血(特殊情況除外),以避免飲食對實驗結(jié)果的影響;盡量在治療前或停藥2d后采集標本,以避免藥物對實驗結(jié)果的影響。1.3注意采血后說分析前質(zhì)量控制的核心是標本的質(zhì)量。首先要嚴格執(zhí)行標本查對制度,避免標本的采集錯誤;采血時避免溶血,采血后注明時間,2~8℃保存2d,-20℃保存1mo;輕度溶血、中度脂血的標本不影響檢測,而含有纖維蛋白的標本,重度溶血、脂血、黃疸的標本可影響結(jié)果;血清標本一定要離心充分,避免纖維蛋白對實驗結(jié)果的影響,血清標本還要避免反復凍融。2分析中質(zhì)量控制2.1孔的上接處,孔要使用正確的加樣技術(shù),使移液器的吸頭稍高于孔的平面,不能觸及微孔板或孔中的液體,以避免從一孔帶至另一孔。加完標本再加酶試劑時避免濺出孔外。2.2孵化時間的確定孵育時要貼封片或放入含水濕孵育盒內(nèi),避免液體蒸發(fā)及樣本和試劑干附于孔壁,難于徹底清洗。孵育時間要準確:時間過短,特異性結(jié)合不夠,得值偏低;時間過長,非特異性結(jié)合物緊附于反應孔,難以清洗干凈,得值偏高。2.3孔與孔之間液體交叉污染聚苯乙烯微孔板的徹底清洗是ELISA實驗的關(guān)鍵。2.3.1手工洗板時,洗液要一孔一孔地加,不要溢出到別的孔,防止孔與孔之間液體交叉污染。每洗完一遍,要在吸水紙上扣干凈再洗下一遍,確保洗板干凈徹底。2.3.2半自動洗板機洗板時,一要注意不同步驟洗板遍數(shù)不同,要及時調(diào)準洗板遍數(shù)。二要注意不同實驗要求洗液量不同,要保證洗液量充足。三要注意保證洗板針暢通,因血清中纖維蛋白聚集,每過一段時間要用細針清理洗板針內(nèi)外,挑出堵塞的纖維蛋白,保證抽吸充分。2.4加顯色劑的使用顯色劑需新鮮配制,不要使用放置過久或過期變色顯色劑。加顯色劑時量要準確,并避免濺出孔外,要使用干凈的一次性吸頭。加顯色劑的速度越快越好,從第一孔到最后一孔不能超過10min。2.5停止并結(jié)束加終止液要求液量準確,并避免產(chǎn)生氣泡。2.6閱讀板加終止液后及時讀板。要保證板底無沉渣無裂紋,清潔無污物。3結(jié)果對比和結(jié)論分析要特別重視檢驗結(jié)果出來后,正式發(fā)報告前的質(zhì)量控制,即分析后質(zhì)控,基本原則是檢驗結(jié)果基本符合病人的臨床情況。若檢驗結(jié)果超出醫(yī)學決定性水平(不同檢測項目都各自低值和高值兩個醫(yī)學決定性水平),應當執(zhí)行以下程序:3.1與近期檢驗結(jié)果比較利用手工登記本或計算機數(shù)據(jù)庫對結(jié)果進行回顧性對比,如符合以往檢測規(guī)律,屬于正確結(jié)果,可發(fā)出報告。3.2與臨床資料分析比較與化驗單填寫的臨床診斷或擬診進行對照,如檢測結(jié)果基本符合,可發(fā)出報告。3.3與各參數(shù)之間關(guān)系的比較如乙肝兩對半檢測中出現(xiàn)HBeAg陽性而HBsAg陰性的可能性極小,如出現(xiàn),需重新檢測。以ELISA一步法檢測表面抗體為例,據(jù)統(tǒng)計,100家次將表面抗體陰性誤報為陽性的誤報率為1%,3022家次將表面抗體陽性誤報為陰性的誤報率高達41%,為減少誤報率,除了重視分析前質(zhì)控和分析中質(zhì)控,