fame全自動酶免處理系統(tǒng)在臨床檢驗中的應(yīng)用

fame全自動酶免處理系統(tǒng)在臨床檢驗中的應(yīng)用

微型自動酶處理系統(tǒng)是由瑞士hamint公司生產(chǎn)的一個完全自動化的酶標(biāo)準(zhǔn)處理系統(tǒng)。它可以執(zhí)行各種必要的elisa試驗操作。此外，該機器還是一個開放系統(tǒng)，可以同時處理不同制造商的不同elisa試驗項目。工作靈活、處理能力大、日常維護方便等特點。筆者參照國內(nèi)外最新的文獻報道和實際工作學(xué)習(xí)經(jīng)驗,從FAME全自動酶免分析儀的概況、發(fā)展、常見問題、檢測意義等幾個方面進行綜述。1酶免實驗室自動化、網(wǎng)絡(luò)化的運動,將給中國新醫(yī)療服務(wù)帶來新的利益酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA/EIA,簡稱“酶免試驗”)是一項現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床檢驗中基本的、常規(guī)的檢測技術(shù)。盡管在90年代初期,由于以聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)為代表的分子生物學(xué)檢測技術(shù)的發(fā)展,人們預(yù)測酶免試驗將被更高靈敏度、數(shù)百萬級信號放大的、病原體水平檢測的核酸放大試驗所取代。但由于免疫標(biāo)志物具有無法替代的臨床意義,以及酶免試驗具有操作簡便、技術(shù)可靠的特點,尤其是90年代末期ELISA檢測系統(tǒng)的靈敏度和特異性以及檢測過程的自動化得到顯著提高與完善,因此,酶免試驗成為傳染病血清學(xué)標(biāo)志物、腫瘤標(biāo)志物及內(nèi)分泌等各種臨床免疫指標(biāo)檢測的主導(dǎo)技術(shù)。應(yīng)當(dāng)指出,酶免試驗結(jié)果在臨床上僅是醫(yī)生診斷的參考數(shù)據(jù);而在血站常規(guī)工作中,血液篩查實驗結(jié)果,將直接決定血液的安全性。以日本為代表的“全面實驗室自動化”(TLA)運動,對于全自動酶免分析系統(tǒng)產(chǎn)生了巨大的需求。90年代初期手工酶免試驗操作曾經(jīng)成為TLA的主要障礙。目前,由于全面實驗室自動化具有標(biāo)準(zhǔn)化、高效率、高質(zhì)量的自動化與網(wǎng)絡(luò)化特征,正成為臨床實驗室發(fā)展的新趨勢。酶免實驗室的自動化與標(biāo)準(zhǔn)化,是全面實驗室自動化系統(tǒng)(LAS)的一部分。實現(xiàn)酶免試驗自動化、網(wǎng)絡(luò)化,是涉及酶免加樣(前處理)設(shè)備、酶免分析(后處理)設(shè)備與醫(yī)學(xué)信息技術(shù)、實驗室管理科學(xué)的嶄新系統(tǒng)集成技術(shù),是邁向全面實驗室自動化的重要基石。截止1999年底,在日本已有160多家醫(yī)院使用實驗室自動化系統(tǒng)(LAS),實現(xiàn)了全面實驗室自動化(TLA)。作為面向21世紀(jì)先進、高度綜合的LAS,目前正向兩個方向發(fā)展,即用戶導(dǎo)向的開放系統(tǒng)和制造商一攬子的封閉系統(tǒng)。前者是建立在目前用戶已有設(shè)備基礎(chǔ)上,是模塊化的系統(tǒng)整合,但需要制造商建立并遵守標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)議。實驗室自動化系統(tǒng)是由樣本處理與傳遞技術(shù)、開放式實驗室儀器和開放式實驗室信息系統(tǒng)(LIS)集成而至,并與醫(yī)院信息系統(tǒng)(HIS)聯(lián)網(wǎng)。實驗室生產(chǎn)力將達到每天20萬次試驗。常規(guī)實驗如生化、血凝、血液常規(guī)、輸血項目等在1h內(nèi)發(fā)報告,而檢測時間長的項目如酶免、病理也將在2h內(nèi)發(fā)出報告。高分析生產(chǎn)力的酶免分析系統(tǒng),快速發(fā)報告意味著快速診斷、快速治療,將給患者與醫(yī)院帶來雙重利益。實驗室自動化的目標(biāo)就是提高檢驗的質(zhì)量,增收節(jié)支。可以預(yù)測,作為一項醫(yī)療服務(wù)競爭策略,酶免實驗室自動化、網(wǎng)絡(luò)化將給中國新醫(yī)療服務(wù)體制下的醫(yī)院酶免實驗室?guī)硇碌膬?yōu)勢與利益。盡管只有少數(shù)全自動酶免分析系統(tǒng)在硬件和軟件上,符合GMP/GLP規(guī)范,具備全過程控制(TPC)系統(tǒng),可以全自動生成操作日志記錄(Traceability)和系統(tǒng)追溯記錄(Trackability),這些性能不但有助于建立信息化的質(zhì)量控制(QC)和質(zhì)量保障(QA)體系,而且在醫(yī)療糾紛舉證中,這些記錄證據(jù)可以闡明實驗操作正確性和可靠性,以及試劑廠商是否應(yīng)承擔(dān)試劑質(zhì)量責(zé)任,便于糾紛的處理。2fame全自動酶免分析系統(tǒng)FAME全自動酶免分析儀是唯一獲FDA批準(zhǔn)使用的、符合醫(yī)學(xué)實驗室要求的酶免儀,集自動加試劑、孵育、洗板、酶標(biāo)讀板于一身,全程采用電腦控制,實現(xiàn)了操作過程的自動化、標(biāo)準(zhǔn)化,克服了手工操作的局限性和繁瑣性,從而節(jié)省了人力和時間,將工作效率大大地提高。同時,也避免了某些人為因素所造成的偶然誤差,使試驗的精密度、重復(fù)性、靈敏度及特異性均有所提高。FAME采用完全模塊化設(shè)計,并行工作模式,同時,FAME根據(jù)其大小有不同的型號,不同的型號有不同的試劑位、孵育位及洗板模塊,符合FDA體外診斷設(shè)備GMP規(guī)范及歐盟IVD指令,是高通量酶免自動化的標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)裝備。本站目前使用的第3代全自動酶免分析系統(tǒng)是哈美頓公司的FAME全自動酶免分析系統(tǒng)。FAME系統(tǒng)獨特品質(zhì)表現(xiàn)在:硬件上采用了綜合模塊化設(shè)計,廣泛采用液體水平檢測(LLD)技術(shù)、體積與重量傳感、光學(xué)位置傳感等,實現(xiàn)真正全過程控制(TPC),特別是專利的洗板液體傳感器,確保了最佳洗板效果,是保障試驗特異性的關(guān)鍵。在軟件與功能上,目前仍是唯一的全自動GMP/GLP規(guī)范符合系統(tǒng),如全面的系統(tǒng)跟蹤記錄(Traceability)與系統(tǒng)追溯(Trackability),標(biāo)本/試劑加樣校驗(Sampleverification)及“自由任務(wù)管理”可實現(xiàn)隨時增加檢測板。1997年FAME系統(tǒng)獲得美國FDA許可,用于血站篩查實驗室,至今仍是唯一的特許全自動酶免分析系統(tǒng)。酶免試驗全過程自動化的意義,并非僅限于降低勞動強度、減少人為誤差。根據(jù)已發(fā)表的FAME評價研究報告,人們發(fā)現(xiàn):全自動酶標(biāo)分析系統(tǒng)可以普遍地、顯著地提高酶免試驗的特異性,如FAME系統(tǒng)可以提高乙肝表抗的特異性(由常規(guī)設(shè)備的87%到91%),丙肝抗體由常規(guī)設(shè)備的89.1%提高到97.4%。此外,多中心評價(Multi-centerClinicalTrail)實驗證明,FAME全自動酶免分析系統(tǒng)也可以顯著提高國產(chǎn)試劑的靈敏度,如FAME系統(tǒng)可以將乙肝表抗的靈敏度由常規(guī)設(shè)備的92%提高到93%,丙肝抗體的靈敏度由常規(guī)設(shè)備的93.7%提高到98.7%。眾所周知,酶免試驗過程具有反應(yīng)時間長、要求嚴格、步驟多而復(fù)雜的特點。因此,就一項具體的酶免試驗而言,其試驗過程與完成試驗時間是不可改變和縮短的。但對于多項的批量處理(Massprocessing),總體試驗時間將大大縮短。1996年中國血站系統(tǒng)開始使用FAME設(shè)備,至今狀態(tài)如新,性能可靠,已成為酶免實驗室的主導(dǎo)設(shè)備。3影響fame測試效果的一般問題和分析3.1選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作。3.2加樣過多造成加樣回箱擴增慢(1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;(2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);(3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。3.3洗板的質(zhì)量控制(1)洗板機針頭堵塞,吸不干凈,導(dǎo)致洗板不好而致花板;(2)準(zhǔn)確配置洗液濃度,使用專項廠家的試驗用洗液,不要混用;(3)反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。3.4服裝原因(1)顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;(2)加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。3.5停止原因加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。4fame的實驗設(shè)備有利于提高檢測的精密度、重復(fù)性及靈敏度由于常規(guī)操作手法受主觀因素的影響,如孵育時間、洗板次數(shù)、酶分配量等,這種操作的不均一性,可造成試驗結(jié)果的變異過大,假陽性或假陰性結(jié)果增高。為減少非特異性反應(yīng),必須給予相對較強的洗板條件,但洗板條件的增強,使試驗體系中的弱陽性標(biāo)本的反應(yīng)程度相應(yīng)降低,可能造成部分弱陽性標(biāo)本的漏檢。因此,常規(guī)操作程序由于人為因素的影響,限制了檢驗水平的發(fā)揮。FAME全自動酶免分析系統(tǒng)克服了手工操作的局限性,避免了人為因素帶來的偶然誤差,使試驗的精密度、重復(fù)性、靈敏度、特異性均有所提高。但在臨床檢驗工作中,各實驗室的實際情況不盡相同,若對各實驗環(huán)節(jié)進行標(biāo)準(zhǔn)化,排除潛在的影響因素,可以最大限度地降低檢測的系統(tǒng)誤差。酶標(biāo)板在FAME中的處理過程按試劑盒說明書由微機編程,使酶聯(lián)免疫的各個步驟都在嚴格控制下進行,每一塊酶標(biāo)板的實驗條件幾乎一致,確保了操作的穩(wěn)定性,避免了手工法的人為誤差,提高了檢測的精確性和重復(fù)性,并可準(zhǔn)確反映出試劑盒所固有的靈敏度和特異性,既有利于弱陽性標(biāo)本的檢出,又可減少非特異性反應(yīng),降低了由輸血傳播疾病的危險,增加了輸血的安全系數(shù)。鑒于以上所述,FAME全自動酶免分析系統(tǒng)目前依然是全國血站系統(tǒng)實驗室的主導(dǎo)設(shè)備,對于ELASA常規(guī)項目的檢測具有重要意義。FAME全自動酶免分析系統(tǒng)全部