全自動(dòng)時(shí)間分辨熒光免疫分析儀auocaddelfi-1a235的體會(huì)

全自動(dòng)時(shí)間分辨熒光免疫分析儀auocaddelfi-1a235的體會(huì)

全時(shí)間熒光免疫分析儀（autodellfia235）是由美國perkinelmer公司生產(chǎn)的一個(gè)自動(dòng)96孔微孔板的自動(dòng)處理裝置，集采樣、孵育、清潔和檢測(cè)于一體。本文就筆者操作autoDELFI-A1235的體會(huì)和常見故障及處理進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹。1測(cè)量標(biāo)記物的熒光強(qiáng)度時(shí)間分辨熒光免疫分析方法與傳統(tǒng)標(biāo)記方法的區(qū)別是其應(yīng)用稀土離子作為標(biāo)記物,最常應(yīng)用的是鑭系元素中的銪(Eu)和釤(Sm)。在接受激發(fā)光照射后,普通熒光物質(zhì)的衰變時(shí)間僅為1~10ns,而稀土離子熒光壽命比其長(zhǎng)100~1000倍不等,待樣品中雜的熒光猝滅后,再測(cè)量標(biāo)記物的熒光強(qiáng)度,可以消除自然本底熒光的干擾。此外,測(cè)量時(shí)激發(fā)光是380nm,而發(fā)射光是620nm,發(fā)射光與激發(fā)光的Stock光譜位移大,以上2種因素極大地提高了該方法檢測(cè)信噪比,使得該方法具有極高的檢測(cè)靈敏度。TRFIA應(yīng)用的是微孔板包被抗原或抗體作為固相載體,結(jié)合了待測(cè)樣本中的待測(cè)物質(zhì)后,再加以Eu標(biāo)記的抗原或抗體,經(jīng)洗板后,洗去游離的Eu標(biāo)記物,微孔板內(nèi)形成了固相抗體(抗原)-待測(cè)抗原(抗體)-Eu標(biāo)記抗體(抗原)復(fù)合物,加入增強(qiáng)液后,與上述復(fù)合物中的Eu形成新的螯合物,經(jīng)激發(fā)光照射后,測(cè)量熒光強(qiáng)度,樣本中的物質(zhì)的含量根據(jù)校準(zhǔn)曲線由儀器自動(dòng)計(jì)算出來。2日常維護(hù)和維護(hù)2.1樣本測(cè)試儀器開機(jī)順序:先打開板處理器電源,接著打開樣本處理器電源,最后雙擊計(jì)算機(jī)上的autoDELFIA1235圖標(biāo),啟動(dòng)程序,儀器隨后進(jìn)行模擬進(jìn)樣、沖洗樣品針、模擬加試劑、模擬振蕩、模擬加增強(qiáng)液等一系列自檢步驟,待自檢無誤后,方可進(jìn)行樣本測(cè)試,若自檢不通過,儀器會(huì)給予提示,待故障解決后方可使用。關(guān)機(jī)順序:先關(guān)計(jì)算機(jī)程序,再關(guān)樣品處理器電源,最后關(guān)板處理系統(tǒng)的電源。使用時(shí)須注意:不能隨便改變開關(guān)機(jī)順序,因?yàn)閮x器設(shè)備的總的信號(hào)處理系統(tǒng)集成在板處理器上,必須先打開板處理器的開關(guān),再打開樣品處理器的開關(guān),否則可能燒壞電路板。2.2洗板液及蒸餾在檢測(cè)前,應(yīng)先檢查系統(tǒng)試劑(增強(qiáng)液、洗板液及蒸餾水等)是否夠用(若不夠用,應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充),再排空廢液桶中的廢液,待所有準(zhǔn)備工作做好后方可開始樣品檢測(cè)。2.3物理儀器的維護(hù)由于儀器每次開機(jī)時(shí)都會(huì)自檢,自檢過程中對(duì)儀器的各個(gè)部件進(jìn)行系統(tǒng)詳細(xì)的檢查,所以每天開關(guān)機(jī)都相當(dāng)于對(duì)儀器進(jìn)行一次維護(hù)。每天用完后應(yīng)進(jìn)行維護(hù),包括樣品針的沖洗、擦拭儀器外部的灰塵等。每周維護(hù),除了做好每天維護(hù)的工作外,在關(guān)機(jī)狀態(tài)下,向儀器的3根軸上(樣品加樣器軸、X軸、Z軸)涂抹少量隨機(jī)配送的潤(rùn)滑油,然后手動(dòng)推動(dòng)軸,使?jié)櫥途鶆蚍植?使儀器運(yùn)行自如。3正常的副作用和處理3.1清潔板針，用刀密封孔3.1.1故障現(xiàn)象洗板機(jī)針孔堵孔,洗板無法進(jìn)行。3.1.2錯(cuò)誤分析洗液主要成分為含鹽類的溶液,在每次洗完板后會(huì)有少量洗液殘留在針孔內(nèi),當(dāng)水揮發(fā)后,剩下的鹽會(huì)形成結(jié)晶。3.1.3洗板器的使用在儀器待機(jī)狀態(tài)下,打開板處理器前蓋,卸掉增強(qiáng)液瓶,托起洗板器,移到洗板的位置,從儀器上卸下洗板器,用隨機(jī)附帶的桶針捅針孔,然后用自來水沖洗,故障即可排除。為了預(yù)防這類現(xiàn)象的發(fā)生,建議每次使用完機(jī)器后,點(diǎn)擊菜單欄中的maitance中的rinse項(xiàng),用系統(tǒng)試劑中的蒸餾水對(duì)針進(jìn)行沖洗,以防止殘留在針孔內(nèi)的洗板液形成鹽類結(jié)晶。3.2電磁閥故障3.2.1濾液不全洗板時(shí),洗板器可向微孔內(nèi)注入洗板液,但不能將微孔板中的廢液吸出,從而使得微孔板中的廢液溢到廢液槽內(nèi),浮標(biāo)飄起,頂?shù)綁毫鞲衅?導(dǎo)致儀器報(bào)警。3.2.2電磁閥出現(xiàn)故障對(duì)于這種情況,在排除非洗板機(jī)堵孔的原因后,主要考慮電磁閥出現(xiàn)故障。因?yàn)橄窗迨窃陔姶砰y的驅(qū)動(dòng)下,利用液體的正壓(將洗液由洗液桶注入到微孔板)和負(fù)壓(將微孔板內(nèi)的廢液排到廢液桶)進(jìn)行的。3.2.3更換電磁閥中間在儀器處于關(guān)機(jī)狀態(tài)下,卸下連接洗板器進(jìn)水的電磁閥(位于增強(qiáng)液后面的3個(gè)電磁閥的中間),然后往進(jìn)水口注入適量的蒸餾水,手動(dòng)按動(dòng)電磁閥芯,使其偏向另一側(cè),觀察注入的水能否全部流出,如果沒有水流出或只流出部分,則可判斷電磁閥損壞,應(yīng)更換新的電磁閥。3.3添加樣品針的位置調(diào)整3.3.1故障現(xiàn)象儀器移動(dòng)、搬遷后,儀器的加樣針與96孔微孔板、裝載在樣品架上的試管以及裝載在標(biāo)準(zhǔn)品架上的標(biāo)準(zhǔn)品瓶的位置錯(cuò)位。3.3.2加樣針的調(diào)整由于儀器是由樣品處理系統(tǒng)和板處理系統(tǒng)2部分組成,當(dāng)儀器移動(dòng)后,原有的坐標(biāo)方位被打亂,必須要重新調(diào)整加樣針的位置,否則儀器無法正常工作。3.3.3彈出宏觀元素這里僅介紹加樣針與樣品試管架位置的校正。加樣針與微孔板的位置及加樣針與校準(zhǔn)品的位置的校正與此類似。加樣針與裝載在樣本架上的試管位置的校正:開啟計(jì)算機(jī)和儀器各部分的電源,但并不啟動(dòng)計(jì)算機(jī)的autoDELFIA1235程序。開始菜單→程序-AutoDELFIAService→AutoDELFIAServiceProgram。該程序中有2個(gè)圖標(biāo),1297-sampleprocessor代表樣品處理器,1235-plateprocessor代表板處理器。點(diǎn)擊1297,進(jìn)入程序809c196DevelopmentSystem,點(diǎn)擊菜單欄中l(wèi)oad,待加載完畢后(自對(duì)話框彈出至消失)再點(diǎn)擊init,彈出對(duì)話框“sampletipcheck”頁面“willtipsinwashtubes?”,點(diǎn)擊0=no,(自對(duì)話框彈出至消失),彈出“Sampleprocessorfilltubing[0=no]”對(duì)話框,點(diǎn)擊0-ok。接著點(diǎn)擊菜單欄unit→arm,彈出對(duì)話框“isswitchedoff”,點(diǎn)擊ok。再點(diǎn)擊菜單欄params→coord→“Ifyouareusingatestprobe,pleaseinstallitonrod3”,點(diǎn)擊ok。菜單欄中的“stdtray”、“wash1”、“wash2”、“plate”、“rack”分別代表的是樣品針與標(biāo)準(zhǔn)架、洗液1、洗液2、板和樣品試管架的位置。調(diào)整位置時(shí),先點(diǎn)擊Increment“進(jìn)制”,即樣品針每次前進(jìn)的長(zhǎng)度,以μm記,再分別點(diǎn)擊“Tipup”、“Tipdown”、“Tipin”、“Tipout”、“Tipleft”、“Tipright”,分別代表樣品針向上、向下、向里、向外、向左、向右各個(gè)位置移動(dòng)。然后分別調(diào)整R1C1、R1C4和RIC2的位置(R代表rule,C代表column),最后將