紫外-可見分光光度計的使用 實驗一 紫外

JIANGSUUNIVERSITY實驗報告系別：藥學院班級：制藥0901姓名：張麗琴學號：3090902007實驗二紫外-可見分光光度計的使用試驗目的了解紫外-可見分光光度計的基本結構與特點，掌握儀器的使用方法。熟悉測繪吸收曲線的一般方法掌握紫外-可見分光光度法定量的方法熟悉平行原則的應用試驗原理電子躍遷原理實驗步驟（一）儀器的使用方法1、接通電源，打開樣品室蓋，預熱20min2、比色皿的使用：比色皿不用時浸泡于醇溶液中；使用時手拿比色皿的毛玻璃面，將比色皿用蒸餾水沖洗幾遍，然后用待測溶液沖洗兩次，然后將待測溶液加入比色皿中，加入溶液體積約為比色皿的2/3或3/4；將比色皿外壁用卷紙擦干，并且保持透光面潔凈，不能有影響光透過的紙屑或痕跡。將比色皿放入光路中，注意比色皿在光路中的方向最好始終保持一致；3、選擇波長，比色皿中置空白溶液，打開樣品室蓋調節(jié)使T讀數為零，關上樣品室蓋調節(jié)使T為100%，反復調節(jié)幾次，直至讀數穩(wěn)定。(注：改變波長時均需重新調0和100%)4、比色皿配對。將其他比色皿盛放相同的空白溶液，測定其他比色皿與剛才調0，調100%的比色皿的吸光度差值，并且記錄。選擇吸收值小的比色皿作為對照皿；記錄其他比色皿與對照比色皿的差值。測定時順序勿顛倒。5、測定物質吸光度。測定時溶液濃度從稀到濃測定。每次蕩洗比色皿1~2次。注意勿將溶液灑于樣品室，否則須立即擦干。6、記錄吸光度值。7、測定完畢洗凈比色皿，置于醇溶液中，關閉電源。（二）標準曲線的制作樣品溶液的測定：配置濃度為0.5000mg/ml的標準苯甲酸鈉儲備液100ml。標準溶液的配置分別吸取標準苯甲酸鈉儲備液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml至5只100ml量瓶中，用0.1mol/LHCl溶液（9→1000）稀釋至刻度，定容，得系列濃度的標準苯甲酸鈉溶液。（預先已經配好）標準曲線的制作以0.1mol/LHCl溶液為參比，分別測定各溶液在240nm處的吸收度A值，以A為y軸，進行線性回歸，得工作曲線和相關系數r。樣品溶液測定：精密吸取樣品溶液2.0ml至100ml容量瓶，用0.1MHCl稀釋至刻度。計算樣品液的濃度。6、數據記錄：編號123456待測液體C(μg/ml)0510152025A240nm0.0080.1480.3130.4330.5330.6200.477（三）實驗結束1、測定完畢將臺面清理干凈。2、繪制標準曲線，求待測溶液濃度。每次測量后的結果需減去0.008，則結果為：編號123456待測液體C(μg/ml)051015202519A240nm00.1400.3050.4250.5250.6120.469當A=0.496時，帶入y=0.0233x+0.0522得：x=19,即：待測液濃度為19(μg/ml).注意事項吸收池配對。注意比色皿每次測定時的方向。比色皿要保持清潔，池壁上液滴應用綢布或擦鏡紙擦干，不能用手拿透光玻璃面。測定吸光度，溶液由稀至濃進行測定。遵守平行原則（加試劑的量、順序、時間盡量一致）測定樣品前應檢查所用溶劑在測定樣品所用波長附近是否有吸收，要求不得有干擾吸收峰。樣品溶液濃度應適當，一般應使測得的吸收度控制在0.2~0.7。操作結束后，應仔細檢查樣品室內是否有溶液溢出，若有溢出，必須及時用吸水紙吸干，否則會引起測量誤差或影響儀器使用壽命。儀器各部存放有干燥劑，發(fā)現干燥劑變色立即更換或烘干在用。儀器每次使用完畢后，請用防塵罩罩住。五、思考題使用分光光度計時，待測溶液的吸光度數值應控制在什么范圍？為什么？如何控制？答：待測液的吸光度數值應控制在0.2-0.8之間，因為在這一吸光度范圍內測量時讀數誤差最?。蝗绻粶y液的吸光度比較大，那應該稀釋后再測量，如果待測液的吸光度比較小，則可以取待測液被稀釋之前的適宜濃度時再次測量。苯甲酸鈉紫外吸收屬于何種分子躍遷？答：（1）n→（2）→實驗心得在學習了幾周的紫外-可見分光光度計理論課程之后，終于有機會在實驗室親自設計和操作分光光度計了，這對我來說，無疑是一次很大的挑戰(zhàn)。實驗一開始，實驗老師為我們細致地講解了這次實驗的目的、原理、過程和注意事項，為了讓大家理解的更全面，老師還專門為大家講解了石英比色皿的外形和用法。實驗老師的講解井井有條，同學們也聽得繪聲繪色。聽完了老師的講解之后，帶著好奇，帶著激動，我們開始了緊張的實驗操作，八名同學一組，進行了簡單的任務分工之后，我們都投入了這次試驗中?？墒?，天有不測風云，我們組選的那一臺儀器，儀器零點飄忽不定，有同學說可能是因為調整零點的電位器接觸不良，也有可能是儀器時間用久了，不管怎樣，我們都要解決這些問題，我們請來了老師，老師建議我們重新換一臺機器。為了得到準確的實驗數據，我們重新換了一臺儀器，這臺儀器比起前邊那臺穩(wěn)定多了，這極大地鼓舞我們每個人的信心。接下來就要進行比色皿配對了，按照老師的講解，如果測量值小于0.002，那就認為比色皿配對，可以忽略比色皿不同而帶來的誤差，可是問題又出現了，我們組使用的比色皿，不管怎么調，讀數都在0.008左右，后來老師告訴我們，如果大于0.002，那在最后的實驗數據里，減去0.008就好。接下來，我們順利地測完了每組溶液的吸光度，并記錄了相關數據，并整理了試驗臺。這次紫外-可見分光光度計的實驗，使我學到了不少實用的知識,更重要的是,做實驗的過程，思考問題的方法,