硫酸軟骨素的檢測方法及比較

硫酸軟骨素的檢測方法及比較

硫酸軟骨素（cs）是d-葡萄糖酸和2-羥色胺-2-脫氧硫酸-d-半乳液糖的基本單位。這是一種由d-1和3糖苷鍵結(jié)合的重糖。CS分子中含有硫酸基與羧基,可與鉀、鈉、鈣離子結(jié)合成鹽。根據(jù)硫酸基團(tuán)結(jié)合的位置不同,CS有A、B、C、D等多種異構(gòu)體,其結(jié)構(gòu)見圖1,以A、C居多。CS有促進(jìn)細(xì)胞增生及存活、調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、保護(hù)胃及口腔黏膜、調(diào)節(jié)血脂及抗動脈粥樣硬化、鎮(zhèn)痛抗炎、增強(qiáng)免疫、抗凝等作用,在臨床上作為藥品或保健品用于防治冠心病有一定療效,還作為抗關(guān)節(jié)炎藥物,不良反應(yīng)少。CS具有保濕功能,在化妝品領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。CS有多種檢測方法,本文對其進(jìn)行概括總結(jié)。1光譜法1.1分光光度法1.1.1對二甲氨基苯甲醛生縮合反應(yīng)的研究部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)采用Elson-Morgan法測定CS含量,根據(jù)CS水解所得氨基葡萄糖與乙酰丙酮發(fā)生縮合反應(yīng),其產(chǎn)物與對二甲氨基苯甲醛的酸醇溶液呈紅色,測定525nm波長處吸光度。謝繼青等認(rèn)為影響測定的主要因素是乙?；惋@色,對該方法進(jìn)行了優(yōu)化。李萍等對測定的時(shí)間條件進(jìn)行了研究,分析時(shí)間比原方法縮短一半以上。曾正宏、魏莉分別用該法測定了角膜寧滴眼液及復(fù)方硫酸軟骨素片中CS含量。1.1.2苯三酚試劑合成產(chǎn)物CS在酸性條件生成糠醛或其衍生物,與間苯三酚試劑反應(yīng),產(chǎn)物在554nm波長處有最大吸收。張華王君等進(jìn)行了操作條件的優(yōu)化,測定了角膜寧滴眼液中CS含量。1.1.3cs含量的測定CS中的葡糖醛酸在硫酸的作用下生成糠醛,在咔唑的醇溶液中顯紅色,在520nm波長處有最大吸收。Zsadon等對測定條件進(jìn)行了優(yōu)化,測定了CS-A的含量。翟詠紅等用該法測定了真靈活膠囊(復(fù)方制劑)中CS的含量,制劑中的氨基葡萄糖對CS測定無干擾。蘇玉永等用該法測定了復(fù)方硫酸軟骨素膠囊中CS的含量。1.1.4cs含量的測定AHMT作為顯色劑,與己糖醛酸或CS顯色靈敏。AHMT在堿性溶液中與CS生成紫色衍生物,在540nm波長處測定吸光度可測定CS的含量。劉坤等利用該法測定了軟骨魚類中CS的含量,并優(yōu)化了測定條件。1.1.5cs與改性反應(yīng)陽離子染料帶正電荷,與CS的硫酸基和羧基作用生成復(fù)合物,在特定波長處隨CS濃度的增加吸光度降低。高貴珍等利用CS與天青A作用,在625nm波長處測定了中藥復(fù)方制劑中CS的含量。施文健等將CS與堿性艷藍(lán)BO反應(yīng),在570nm波長處測定了CS含量。杜美菊等將中性紅作為光譜探針,在533nm波長處測定了康得靈復(fù)方片中CS的含量。陳媛媛等將維多利亞藍(lán)B與CS反應(yīng),在614nm波長處測定了康得靈注射液中CS含量。丁雅勤等將吖啶橙作為光度探針與CS反應(yīng),在492nm波長處測定了CS含量。李明明等將結(jié)晶紫與CS相互作用,在583nm波長處測定了硫酸軟骨素注射液及片中CS含量。Pospichal等通過CS與天青B反應(yīng),用流動注射分析法以分光光度檢測器測定了CS含量,并在靜態(tài)及流動狀態(tài)下分別進(jìn)行了研究。1.1.6透明質(zhì)酸鹽及cs的含量測定CS中的葡糖醛酸以水溶的碳二亞胺為偶聯(lián)劑,與2-硝基苯肼反應(yīng)后形成肼的衍生物,在530nm波長處有最大吸收,Murata等利用該法測定了透明質(zhì)酸鹽及CS的含量。1.2子與硫酸根沉淀茅力等將鯊魚軟骨粉水解后,加入已知量的鋇離子使硫酸根沉淀。將樣品用水浸泡后做浸泡對照,用原子吸收光譜法測得游離硫酸根,從而算出水解出的有機(jī)硫酸根的量,再換算出CS含量。1.3cs-a注射液和甲基紫作用Li等將CS-A與結(jié)晶紫相互作用生成復(fù)合物,其RRS光譜比CS-A及結(jié)晶紫的RRS光譜明顯增強(qiáng)。其復(fù)合物在328nm波長處產(chǎn)生新的散射光譜,檢測了CS-A注射液及CS樣品中痕量的CS-A。李繼桃等將CS與甲基紫相互作用,最大RRS峰在505和661nm波長處,分別用兩種波長測定了硫酸軟骨素注射液中CS的含量。蔣治良等利用CS與溴代十四烷基吡啶作用,在360nm波長處測定了CS樣品及硫酸軟骨素注射液中CS的含量。1.4硫酸軟骨素注射液將CS加到氧化還原體系Ce(SO4)2-Na2SO3-H2SO4中后,發(fā)光強(qiáng)度較空白時(shí)明顯增強(qiáng),李艷平等根據(jù)此原理測定了硫酸軟骨素注射液中CS的含量。2色度法2.1反相hplc法2.1.1cs和鹽酸氨基葡萄糖含量的測定Tyler等在195nm波長處測定了CS含量。牛增元等在195nm波長處同時(shí)測定了CS和鹽酸氨基葡萄糖的含量。林燕飛等以蒸發(fā)光散射檢測器測定了復(fù)方氨基葡萄糖片中CS含量,能避免鹽酸氨基葡萄糖的干擾。潘自國等在209nm波長處測定了CS總量,并同時(shí)測定了A、B、C、D等4種異構(gòu)體的含量。2.1.2cs含量的測定鮑倫軍等將CS粗品用硫酸軟骨素ABC酶定量酶解成軟骨素二糖,在228nm波長處測定了CS含量。Ji等將CS選擇性的水解為無硫、單硫、二硫、三硫不飽和二糖,通過離子對色譜測定了CS含量。2.1.3cs的測定Toyoda等將人尿中的CS用硫酸軟骨素ABC酶或AC酶酶解成二糖后,用2-氰基乙酰胺作柱后衍生劑,以熒光檢測器測定CS含量。Du等將狗和馬血漿樣品用硫酸軟骨素ABC酶酶解成二糖,進(jìn)行柱前衍生后,以熒光檢測器測定了CS含量。2.2離子色度法茅力將CS水解成等摩爾的硫酸根,用離子色譜柱將硫酸根和其他雜質(zhì)分離后以電導(dǎo)檢測器檢測,測定了CS原料、注射液和鯊魚軟骨粉中CS含量。2.3cs的測量方法Way等在207nm波長處用尺寸排阻色譜法測定了營養(yǎng)品中CS含量。孫凌云等用示差折光檢測器在210nm波長處測定了CS的重均分子量、數(shù)均分子量及其分布。陳杰等用示差折光檢測器在210nm波長處測定了硫酸軟骨素注射液中小分子雜質(zhì)含量,同時(shí)串聯(lián)二極管陣列檢測器考察了各組分的純度和組成。3電壓法3.1齡健康志愿者血漿中cs的結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)Volpi等用瓊脂糖凝膠電泳法和分光光度法研究了不同性別和年齡健康志愿者血漿中CS的結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)。結(jié)果顯示,性別之間無差異,年齡之間無明顯差異。Okamoto等發(fā)明了一種用毛細(xì)管內(nèi)酶反應(yīng)進(jìn)行毛細(xì)管電泳測定CS的方法,并與咔唑法比較,結(jié)果一致。3.2電位法張關(guān)順將CS用CPC滴定劑(hexadecyl-pyridimumchloridmonohydrat)進(jìn)行電位滴定測定了CS含量。3.3cs含量Sun等用派洛寧B作電化學(xué)探針,測定了CS含量。將CS加至派洛寧B溶液中,線性掃描伏安還原峰電勢無變化但電流明顯降低,電流降低與濃度呈線性關(guān)系。3.4線性掃描二階導(dǎo)數(shù)極譜在甲苯胺藍(lán)溶液中加入一定量的CS后,線性掃描二階導(dǎo)數(shù)極譜還原峰電流降低,但峰電位基本不變。孫偉等以甲苯胺藍(lán)為生物探針,以線性掃描極譜法測定了CS含量。4物素確定的基礎(chǔ)Kaehnert等利用CS-C與生物素抗原競爭性結(jié)合CS-C單克隆抗體的特性,用競爭性酶聯(lián)免疫法測定了體液和細(xì)胞培養(yǎng)物中CS-C的含量。5標(biāo)準(zhǔn)色譜法測定cs總之,CS的檢測方法有多種,光譜法及色譜法是較常用的方法。分光光度法及原子吸收法操作繁瑣,重現(xiàn)性差,且干擾因素多,經(jīng)改良后可簡化操作;RRS法快速、簡便、靈敏度高,可用于痕量CS的分析;HPLC法測定時(shí)紫外檢測為短波長,基線噪音高,且色譜峰拖尾,另外,由于CS相對分子質(zhì)量范