中藥質(zhì)量控制和評價模式

中藥質(zhì)量控制和評價模式

要點建立多元化中藥質(zhì)量控制和評價模式:

形性檢測＋化學(xué)檢測＋生物檢測（三位一體）保證中藥安全性、有效性和質(zhì)量穩(wěn)定性。本章主要內(nèi)容提綱1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀2中藥質(zhì)控方向3中藥質(zhì)控模式1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀

中藥質(zhì)量控制根本目標(biāo)：保證中藥安全有效。而中藥質(zhì)控的現(xiàn)行目標(biāo)：保證中藥材或制劑的一致性和穩(wěn)定性。目前中藥內(nèi)在質(zhì)量控制模式基本上是“惟成分論”，即通過對個別指標(biāo)性成分進行定性或/和定量分析來實現(xiàn)質(zhì)量控制和評價。

中藥與化學(xué)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的根本區(qū)別:

化學(xué)藥品：分子結(jié)構(gòu)清楚，構(gòu)效關(guān)系明確，鑒別、檢查、含量測定可以直接作為療效評價的指標(biāo)。中藥：在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，尤其是復(fù)方制劑，檢測任何一種活性成分均不能體現(xiàn)其整體療效?，F(xiàn)行中藥質(zhì)量控制的基本模式是參照國外植物藥的質(zhì)量控制方法，借鑒化學(xué)藥品質(zhì)量控制的模式建立的。

1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀

1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀中藥化學(xué)指紋圖譜技術(shù)對中藥質(zhì)量控制有一定的促進作用，但中藥化學(xué)成分變化因素較為復(fù)雜，選擇合理的指紋信息難度較大，其重現(xiàn)性、耐受性及譜效關(guān)系等還有待深入研究。中藥化學(xué)指紋圖譜實質(zhì)上是中藥部分成分的“化學(xué)條碼”，與安全性、有效性關(guān)聯(lián)意義不大。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀如冬蟲夏草測定腺苷含量、板藍根檢測精氨酸,既不是其主要有效成分,也不是其專屬性成分,對其中藥質(zhì)量控制幾乎沒有實際意義。即使是檢測有效成分,往往量效關(guān)系不明顯：如人參的人參總皂苷：人參(主根)約含2%,

人參須約含5%,

人參葉可達10%。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀大部分中藥的有效成分仍未得以闡明。據(jù)統(tǒng)計，《中國藥典》2005年版(一部)共收載中藥材(含飲片和提取物)572種，其中只有60%有過化學(xué)成分研究報道，約20%進行過較系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，至今已闡明其有效成分的品種不到5%。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀中藥個別或部分指標(biāo)性成分一致性和穩(wěn)定性≠制劑質(zhì)量一致性和穩(wěn)定性≠臨床上安全性和有效性！2中藥質(zhì)控方向目前中藥質(zhì)量控制和評價的主要手段（《中國藥典》2005年版一部基本上是用這兩種方法）：形性檢測法＋化學(xué)檢測法質(zhì)控策略探索：多元化中藥質(zhì)量控制和評價模式

形性檢測＋化學(xué)檢測＋生物檢測（三位一體）2中藥質(zhì)控方向中藥質(zhì)量控制和評價的方法可以簡單概括為：形性檢測法、化學(xué)檢測法、生物檢測法。形性檢測主要指以藥材的形狀、大小、顏色、氣味、表面特征、質(zhì)地、斷面等表觀性狀來判別藥材的種類和真?zhèn)?，并對部分藥材輔以簡單的理化試驗。2中藥質(zhì)控方向化學(xué)檢測主要是利用藥材所含化學(xué)成分的某些物理性質(zhì)或化學(xué)反應(yīng)來對中藥進行定性和定量分析，一般可用于含不同化學(xué)成分的性狀相似而又無明顯顯微特征的藥材。生物檢測是利用生物體包括整體動物、離體組織、器官、細胞和微生物等評估藥物生物活性(包括藥效和毒性)的一種方法。中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測

從主觀性和模糊性（趨向）組織形態(tài)特征三維化、可視化、定量化。

突破傳統(tǒng)的二維平面局限，借助計算機圖形學(xué)、計算機三維重建、體視學(xué)和圖像分析系統(tǒng)等手段，將生藥組織形態(tài)學(xué)研究推向三維化、可視化、定量化?！皵?shù)字可視化中藥”技術(shù)（中藥計算機三維重建與顯示技術(shù)）（中藥計算機三維仿真技術(shù)）組織連續(xù)切片圖形量化得到深度信息（將物體不同切片上的二維圖像按照切片的空間位置關(guān)系依次疊加排列而組成物體的三維數(shù)據(jù)；再利用計算機圖像處理技術(shù)、圖形生成理論及視覺心理學(xué)原理，在二維平面上形成直觀地顯示出具有生動性和立體感的三維圖像。“數(shù)字可視化中藥”技術(shù)應(yīng)用全方位刻畫中藥材形態(tài)結(jié)構(gòu)、甄別道地與非道地藥材等提供三維立體動態(tài)的鑒定技術(shù)和圖像資料；形象生動地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結(jié)構(gòu)；形象生動地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結(jié)構(gòu)以及組織細胞的空間關(guān)系，有助于揭示植物和中藥材的生長發(fā)育規(guī)律、次生代謝產(chǎn)物積累分布動態(tài)、中藥材品質(zhì)變化規(guī)律等。比如，可以從不同來源、不同產(chǎn)地（道地）、不同規(guī)格（三七多少頭的、人參多少支的）、導(dǎo)管的長度、木質(zhì)化的藥材木質(zhì)化的程度、油細胞的大小多少、淀粉粒的多少等等，分析出藥材的質(zhì)量，使過去經(jīng)驗鑒別的東西變成了形象化的東西。2中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測不同種類不同產(chǎn)地的姜黃屬植物葉：供試材料處理:撕取表皮制片。其中每份材料選取3－5片葉子,每片葉子撕取上下表皮各5－10個視野。一般在葉片中部中脈附近撕取表皮組織。觀測：上表皮氣孔，下表皮氣孔；上表皮副衛(wèi)細胞，下表皮副衛(wèi)細胞；上表皮細胞，下表皮細胞。2中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測

圖像分析操作:①圖像采集,將制片置于配有CCD攝像機的顯微鏡下觀察采樣②圖像預(yù)處理,包括編輯、輪廓修飾、灰度變換、邏輯運算和二值化操作等,以便獲得清晰完整的目標(biāo)灰度圖像;③參數(shù)測定,包括面數(shù)密度(個/mm2)、截面積(μm2)、周長(μm)、最大直徑(μm)、長寬比、圓形度、圓球度等參數(shù)。④數(shù)據(jù)倍數(shù)轉(zhuǎn)換,求出目標(biāo)實際大小值和密度值;⑤采用系統(tǒng)聚類分析和主成分分析進行模式識別處理?！按笮　北碚鳎杭毎睆健⒚娣e、體積、體密度，平均間距等；“質(zhì)地”表征：細胞體積、密度、壁厚，纖維和石細胞密度等；“粉性”表征：淀粉粒和木質(zhì)化細胞的數(shù)密度、體密度、體積等；“油性”表征：油細胞數(shù)密度、體密度、油滴面積、體積等)。

例如2中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測大小、密度和形狀因子（3大類參數(shù)）體視學(xué)原理計算機圖像技術(shù)組織細胞顯微圖像的形態(tài)特征

數(shù)值分類歸納出其形態(tài)學(xué)特征

建立分類鑒定譜系圖2中藥質(zhì)控方向

2.2化學(xué)檢測

采用HPLC、MS、NMR、IR、UV、GC、CE等及其聯(lián)用技術(shù)進行化學(xué)指紋圖譜定性和有效成分或指標(biāo)成分定量，結(jié)合化學(xué)計量學(xué)、人工智能等技術(shù)建立中藥化學(xué)質(zhì)量模式識別系統(tǒng)，表征中藥化學(xué)組分群特征優(yōu)勢：a檢測中藥材及其產(chǎn)品的真?zhèn)危?/p>

b區(qū)分藥材的不同部位；

d追蹤制劑的工藝過程及某些化學(xué)成分的變化；

c監(jiān)測原料與成品之間、成品批間質(zhì)量的穩(wěn)定性、一致性。

2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測生物檢測

將生物檢測方法引入中藥質(zhì)量控制與評價體系，不僅可以輔助鑒定真?zhèn)蝺?yōu)劣，又可不同程度地關(guān)聯(lián)安全性和有效性，尤其在無法對中藥中未知復(fù)雜成分用成分檢控的方法控制其質(zhì)量時，更顯其優(yōu)越性。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測生物效價檢測：是指在嚴(yán)格控制的試驗條件下，通過比較標(biāo)準(zhǔn)品和供試品對生物體或離體器官與組織的特定生物效應(yīng)，從而評價和控制供試品的質(zhì)量或活性。適用于結(jié)構(gòu)復(fù)雜或理化方法不能測定其含量、或者理化測定不能反映其臨床生物活性的藥物。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測中國藥典2005采用了生物效價檢測方法控制水蛭質(zhì)量，本品每1g含抗凝血酶活性應(yīng)不低于16.0U。比濁法測定紅霉素生物效價?；诳咕r檢測的板藍根藥材品質(zhì)評價方法的研究。生物效價檢測研究進展（3000字）（50%外文參考文獻）中藥質(zhì)量控制中的生物效價檢測的作用與進展例：基于神經(jīng)氨酸酶活性檢測的板藍根品質(zhì)的生物評價采用流感病毒神經(jīng)氨酸酶

(NA)體外活性熒光檢測法測定板藍根的NA抑制生物活性,并建立板藍根抗病毒生物效價檢測方法。研究表明板藍根具有抑制NA的活性,IC50=(0.90±0.20)mg·mL?1(相當(dāng)于生藥),其量效曲線形狀與陽性對照藥磷酸奧司他韋相似,提示二者對NA的抑制可能具有相同的作用方式。采用“質(zhì)反應(yīng)平行線”法設(shè)計和優(yōu)化的板藍根抗病毒生物效價檢測方法,重復(fù)性較好(RSD=5.78%),實際樣品檢測結(jié)果均能通過可靠檢驗(偏離直線P>0.05、偏離平行P>0.05)。研究結(jié)果表明,所建立的生物效價檢測方法可以作為板藍根品質(zhì)生物評價的方法之一。

當(dāng)前,板藍根的質(zhì)量控制方法主要是依托常規(guī)性狀鑒別和精氨酸的定性檢識,

該方法既難以做到客觀定量,又與板藍根的藥理活性幾無關(guān)聯(lián),也就難以保證它的臨床有效性。

生物效價檢測方法與常規(guī)鑒別方法比較不僅在結(jié)果上具有一致性,而且具有靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡單、客觀、可定量、快捷等優(yōu)點。本方法的建立提高了板藍根的質(zhì)量控制水平,并且能夠為抗病毒類中藥質(zhì)量生物控制的研究提供參考。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測目前生物效價檢測的常用方法有：酶活力、凝集素活性、抗病毒測試、抗菌活性、抗炎活性等。這些方法的專屬性較強，而通用性較差，有限的實驗條件難以同時滿足幾百甚至幾千種不同中藥及中藥制劑的質(zhì)量控制和評價。另：生物熱動力學(xué)方法2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測生物效價檢測方法選取以下原則：(1)“相關(guān)性”是指所選取的檢測方法應(yīng)與藥物的功能主治或現(xiàn)代藥理作用有關(guān)，從而保證檢測結(jié)果與臨床療效的相關(guān)性；(2)“重復(fù)性”是指在嚴(yán)格規(guī)定的條件下，檢測結(jié)果應(yīng)有一定的重復(fù)性，以保證試驗的延續(xù)性和可重復(fù)性；(3)“靈敏性”是指所選取的檢測指標(biāo)應(yīng)能客觀體現(xiàn)反應(yīng)程度隨劑量的變化而有顯著的改變；2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(4)“適用性”是指選取的檢測方法應(yīng)快速、高效、通用性好、易于推廣；(5)“定性定量”是指所選取的檢測方法最好應(yīng)具有定性鑒別(生物效應(yīng)譜)和定量分析(生物效價值)的雙重特性。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測生物效價檢測方法之一：“熱譜圖”（基于生物熱動力學(xué)的微量熱分析方）測定不同中藥與機體相互作用的能量轉(zhuǎn)移和熱變化，將中藥內(nèi)在的藥性品質(zhì)表達為特征“指紋”——生物熱活性譜線圖(簡稱“熱譜圖”或“生物效應(yīng)譜”)

，可對生物體在生長代謝過程中的相關(guān)信息進行定性、定量分析，有較強的專屬性、靈敏性和重現(xiàn)性，同時亦可按生物統(tǒng)計學(xué)進行實驗設(shè)計，屬于生物效價檢定中的量反應(yīng)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測

生物熱動力學(xué)方法——“熱譜圖”原理：(1)生物體的生長代謝都伴有能量的轉(zhuǎn)移和熱變化，并在一定的閾值內(nèi)呈規(guī)律性波動；(2)中藥的生物活性實質(zhì)上就是中藥藥效物質(zhì)對生物體生長代謝的干預(yù)作用，這種干預(yù)作用不可避免地將影響生物體的能量轉(zhuǎn)移和產(chǎn)熱變化；2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(3)通過測定能量和產(chǎn)熱的變化，可以間接地了解生物體的生長代謝變化，從而判斷藥物的生物活性情況；(4)生物熱活性檢測是以體系的狀態(tài)參數(shù)為研究對象，能實時、在線、快速地刻畫機體的表觀狀態(tài)及其變化情況。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測“熱譜圖”特點：“普適性好”即是指對不同的研究對象(如微生物、組織、細胞、分子、基因)，均只需用：一個方法(生物熱活性測定方法)、一臺儀器(生物熱活性檢測儀)、一套指標(biāo)(生物熱譜圖和熱動力學(xué)參數(shù))2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測“實時在線”是指生物熱活性檢測儀有如多導(dǎo)生理檢測儀，可以在第一時間及時地直觀地反映生命體系的宏觀狀態(tài)變化；“靈敏、準(zhǔn)確”是指生物熱活性檢測所需的藥物樣品量少，一般是毫克級，同時由于研究對象和環(huán)境的可控性好、操作步驟簡單、自動化程度高，所以方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較好；2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測“高效”是指一臺生物熱活性檢測儀可擁有8—16個檢測通道，甚至更多，可同時對多個研究對象或目標(biāo)進行檢測和分析，降低成本。中藥質(zhì)控模式

——基于道地藥材和生物效價檢測的中藥質(zhì)控模式3.1道地藥材在中藥生產(chǎn)質(zhì)量控制上的歷史和現(xiàn)實意義