藥物分析知識(shí)要點(diǎn)

１藥物分析知識(shí)要點(diǎn)緒論：藥物（drugs/medicines/pharmaceuticalsubstances）：是指用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的的調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能并規(guī)定適應(yīng)證或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)。藥品（medicinalproducts）：通常是指由藥物經(jīng)一定的處方和工藝制備而成的制劑產(chǎn)品，是可供臨床使用的商品。藥物分析（Pharmaceuticalanalysis）：是利用分析測定手段，發(fā)展藥物的分析方法，研究藥物的質(zhì)量規(guī)律，對藥物進(jìn)行全面檢查與控制的科學(xué)。藥物分析的性質(zhì)：1、藥品具有與人的性命相關(guān)性；2、藥品具有嚴(yán)格的質(zhì)量要求性；3、藥品具有社會(huì)公共福利性藥物分析的任務(wù)：就是對藥進(jìn)行全面的分析研究，確立藥物的質(zhì)量規(guī)律，建立合理有效的藥物質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn)，保證藥品的質(zhì)量穩(wěn)定與可控，保障藥品使用的安全、有效和合理。國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門（國家食品藥品監(jiān)督管理局，CFDA）依據(jù)《中華人民共和國藥品管理法》制定了相關(guān)的管理規(guī)范。1、《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodLaboratoryPractice，GLP）；2、《藥物臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodClinicalPractice，GCP）；3《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodManufacturePractice，GMP）；4、《藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodSupplyPractice，GSP）人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）ICH有有關(guān)藥品質(zhì)量的技術(shù)要求（以代碼Q標(biāo)識(shí)）ICH有有關(guān)藥品安全性的技術(shù)要求（以代碼S標(biāo)識(shí)）ICH有有關(guān)藥品有效性的技術(shù)要求（以代碼E標(biāo)識(shí)）ICH有有關(guān)藥品綜合技術(shù)要求（以代碼M標(biāo)識(shí)）第一章藥品質(zhì)量研究的內(nèi)容與藥典概況藥品標(biāo)準(zhǔn)（藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)）：系根據(jù)藥物自身的理化與生物學(xué)特性，按照批準(zhǔn)的來源、處方、生產(chǎn)工藝、儲(chǔ)藏運(yùn)輸條件等所制定的，用以檢測藥品質(zhì)量是否達(dá)到用藥要求并衡量其質(zhì)量是否穩(wěn)定均一的技術(shù)規(guī)定。藥品標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)涵：真?zhèn)舞b別、純度檢查和品質(zhì)要求，藥品在這三方面的綜合表現(xiàn)決定了藥品的安全性，有效性和質(zhì)量可控性。《中國藥典》2015年版由一部、二部、三部、四部、及其增補(bǔ)本組成。一部收載中藥；二部收載化學(xué)藥品，三部收載生物制品；四部收載通則和藥用輔料。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)由凡例與正文及其引用的通則共同構(gòu)成凡例是正確使用《中國藥典》進(jìn)行藥品質(zhì)量鑒定的基本原則，是對《中國藥典》正文、通則及與質(zhì)量鑒定有關(guān)的共性問題的統(tǒng)一規(guī)定。正文就是各種藥品標(biāo)準(zhǔn)的具體內(nèi)容。藥典通則主要收載制劑通則、通用檢測方法和指導(dǎo)原則。精密稱定：稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一稱定：稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的百分之一精密量?。毫咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合該體積移液管的精密度要求量取：用量筒或按照量取體積的有效數(shù)位選用量具取用量“約”若干：取用量不得超過規(guī)定量的±10%恒重：指供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下的重量滴定液：用“XXX滴定液(YYYmol/L)”表示（標(biāo)定）試液：用“YYYmol/LXXX溶液”表示（不需標(biāo)定）溶解度試驗(yàn)法：稱取研成細(xì)粉的供試品或量取液體供試品，于25℃±2℃一定容量的溶劑中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無目視可見的溶質(zhì)顆?；蛞旱螘r(shí)，即視為完全溶解。原料藥的含量（%），若未規(guī)定上限時(shí)，系指不超過101.0%乙醇：未指明濃度時(shí)，均系95%（ml/ml）的乙醇酸堿性試驗(yàn)時(shí)，如未指明用何種指示劑，均系指石蕊試紙酸堿度檢查所用的水，均系指新沸并放冷至室溫的水一般常用的化學(xué)試劑分為基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級純、分析純和化學(xué)純四個(gè)等級。藥物的檢查：安全性檢查；有效性檢查；均一性檢查；純度檢查；藥物制劑質(zhì)量一致性評價(jià)藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)：（1,2,3藥物制劑和原料藥均需進(jìn)行）1.影響因素試驗(yàn)（一批樣）強(qiáng)光照射試驗(yàn)（4500±500lx）高溫試驗(yàn)（60或40℃）高濕度試驗(yàn)（相對濕度為90%或75%）破壞性試驗(yàn)（pH與氧及其它條件）2.加速試驗(yàn)（三批樣，40℃，相對濕度75%）3.長期留樣試驗(yàn)（三批樣，相對濕度60%±10%，25℃）4.配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)（藥物制劑）主要的外國藥典：美國藥典（USP，39）美國國家處方集（NF，34版，19版起與USP合并）USP(40)-NF(35)2002年起將原來的每五年一版改為每一年出一個(gè)新版本，同時(shí)發(fā)行USP亞洲版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有性狀和類別的描述，而是將藥物的性狀和溶解度集中列于參考表中組成：多USP參考標(biāo)準(zhǔn)品英國藥典（BP，2017）正文最后列出了雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式和名稱第六卷為獸藥原料及制劑日本藥局方（JP，第十七版）每五年修訂一次歐洲藥典（EP，9.0版）除生物制品外，歐洲藥典不收載制劑，均為原料藥。國際藥典（Ph.Int，第6版）收載藥物原理（API）、藥用輔料和藥物制劑的分析檢驗(yàn)方法和質(zhì)量指標(biāo)要求。藥物的鑒別試驗(yàn)藥物的鑒別試驗(yàn)是根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法來判斷藥物的真?zhèn)巍Ｋ幬镔|(zhì)量檢驗(yàn)工作的首項(xiàng)任務(wù)。鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目：性狀；一般鑒別試驗(yàn)；專屬鑒別試驗(yàn)性狀：反映了藥物特有的物理性質(zhì)外觀——聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)藥物的多晶型現(xiàn)象極為普遍，晶型不同，它們的物理性質(zhì)如密度、熔點(diǎn)、硬度、外觀、溶解度和溶出速度等方面均有顯著性差異，從而影響藥物穩(wěn)定性、生物利用度、毒副反應(yīng)等。鑒別晶型主要是依據(jù)不同晶型具有不同的理化特性及光譜學(xué)特性，采用熔點(diǎn)法、熱分析法、紅外分光光度法及X-射線衍射法等進(jìn)行鑒別。氨芐西林具有四種不同的固相晶型狀態(tài)。2、溶解度3、物理常數(shù)——相對密度、熔點(diǎn)、比旋度、吸收系數(shù)等熔點(diǎn)：系指一種物質(zhì)按規(guī)定方法測定，由固體熔化成液體的溫度、熔融同時(shí)分解的溫度或在熔融時(shí)自初熔至全熔的一段溫度。比旋度：在一定波長與溫度下，偏振光透過1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測得的旋光度吸收系數(shù)：在給定的波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度。E1%1cm：中國藥典收載的方法是指在一定波長下，溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時(shí)的吸光度一般鑒別試驗(yàn)：依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物的真?zhèn)吴}離子：磚紅色（焰色反應(yīng)）氟離子的茜素氟藍(lán)比色法：有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，被堿性溶液吸收成為無機(jī)氟化物，與茜素氟藍(lán)、硝酸亞鈰在pH4.3溶液中形成藍(lán)紫色絡(luò)合物。專屬鑒別試驗(yàn)根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性不同，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)，來鑒別藥物的真?zhèn)巍Ｊ亲C實(shí)某一種藥物的依據(jù)。鑒別反應(yīng)：化學(xué)鑒別法——呈色，沉淀，熒光，氣體三氯化鐵——酚羥基（紫色）重氮化-偶合——芳伯胺基（橙紅）茜素氟藍(lán)法——有機(jī)氟化物（藍(lán)紫色）雙縮脲——氨基醇結(jié)構(gòu)（藍(lán)紫色）Vitali反應(yīng)——托烷生物堿類（深紫色）四氮唑——腎上腺皮質(zhì)激素類（紅色或藍(lán)色）茚三酮——類似氨基酸結(jié)構(gòu)（藍(lán)紫色）沉淀反應(yīng)：硝酸銀——丙二酰脲類、氯化物銀鏡反應(yīng)——異煙肼氧化亞銅——葡萄糖銅鹽——磺胺類三氯化鐵——苯甲酸鹽重金屬離子——利多卡因生物堿沉淀劑——氮雜環(huán)類熒光反應(yīng)：在硫酸性溶液中本身有熒光——硫酸奎寧于適當(dāng)試劑反應(yīng)產(chǎn)生熒光——維B1的硫色素反應(yīng)氣體反應(yīng)：強(qiáng)堿處理——氨氣強(qiáng)酸處理——硫化氫氣體直火加熱——碘蒸氣硫酸水解，加乙醇——醋酸乙酯香味其它反應(yīng)：使試劑褪色——如維C的二氯靛酚反應(yīng)；司可巴比妥鈉與溴、碘試液的反應(yīng)測定生成物熔點(diǎn)——操作繁、費(fèi)時(shí)，應(yīng)用少紫外光譜鑒別法（UV）1.測定最大吸收波長，或同時(shí)測定最小吸收波長2.規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸光度3.規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法4.規(guī)定吸收波長和吸光度比值法（最精確）5.經(jīng)化學(xué)處理后，測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性第三章藥物的雜質(zhì)檢查雜質(zhì)：任何影響藥品純度的物質(zhì)（ChP）藥物中的雜質(zhì)無治療作用，或者影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至損害人們的健康。藥物的純度是指藥物的純凈程度。藥物的純度檢查也可稱為雜質(zhì)檢查。藥物的純度與雜質(zhì)控制的主要目的是為了保障藥品的安全、有效和質(zhì)量穩(wěn)定可靠。藥物雜質(zhì)的來源：生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì)未完全反應(yīng)的起始原料、反應(yīng)的中間體、反應(yīng)副產(chǎn)物和分降解雜質(zhì)，以及參與反應(yīng)的試劑溶劑和催化劑貯藏過程中引入的雜質(zhì)藥物在貯藏過程中，受環(huán)境相關(guān)因素的影響，而在藥物中引入的雜質(zhì)。例如：在溫度、濕度、日光、空氣等外界條件影響下，或因微生物的作用，引起藥物發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化，使藥物中產(chǎn)生有關(guān)的雜質(zhì)。雜質(zhì)的分類1.按來源分類一般雜質(zhì)是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物生產(chǎn)的貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)，常常稱為信號雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)，也常稱有關(guān)物質(zhì)按照來源的不同還可將雜質(zhì)分為工藝雜質(zhì)（包括合成中位反應(yīng)完全的反應(yīng)物及試劑、中間體、副產(chǎn)物等）、降解產(chǎn)物、從反應(yīng)物及試劑中混入的其他外來雜質(zhì)等。2.按毒性分類可分為毒性雜質(zhì)和信號雜質(zhì)3.按化學(xué)性質(zhì)分類分為無機(jī)雜質(zhì)，有機(jī)雜質(zhì)及有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)（殘留溶劑）無機(jī)雜質(zhì)大都屬于一般雜質(zhì)，主要來源于生產(chǎn)過程中涉及的無機(jī)物質(zhì)。如反應(yīng)試劑、配位體、催化劑、重金屬、其他殘留的金屬、無機(jī)鹽、助濾劑、活性炭等。有機(jī)雜質(zhì)主要包括合成反應(yīng)中未反應(yīng)完全的原料、中間體、降解產(chǎn)物等，亦即有關(guān)物質(zhì)。有機(jī)雜質(zhì)分為特定雜質(zhì)和非特定雜質(zhì)特定雜質(zhì)是指在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中分別規(guī)定了明確的限度，并單獨(dú)進(jìn)行控制的雜質(zhì)，特定雜質(zhì)包括已知的雜質(zhì)和結(jié)構(gòu)未知的雜質(zhì)。非特定雜質(zhì)是在在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未單獨(dú)列出，而僅采用一個(gè)通用的限度進(jìn)行控制的一系列雜質(zhì)，其在藥品中出現(xiàn)的種類與概率并不固定。雜質(zhì)的限量雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm表示）砷<=10ppm重金屬離子<=50ppm雜質(zhì)限量的控制方法一般分為兩種：1.限量檢查法2.定量檢查法限量檢查法只需檢查雜質(zhì)是否超過限量。多數(shù)采用對照法，此外還可采用靈敏度法和比較法。對照法系指去一定量的被檢查雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和一定量供試品溶液，在相同條件下處理，比價(jià)反應(yīng)結(jié)果，以確定雜質(zhì)含量是否超過限量。靈敏度法：在供試品溶液中加入一定試劑后，在一定反應(yīng)條件下觀察有無正反應(yīng)出現(xiàn)，從而判斷供試品中所含雜質(zhì)是否符合限量規(guī)定。比較法：取供試品一定量依法檢查，測定特定待檢雜質(zhì)的參數(shù)（如吸光度）與規(guī)定的限量比較，不得更大。藥物檢查項(xiàng)下包括：純度（雜質(zhì)）檢查有效性：指與藥物療效有關(guān)的一些特定指標(biāo)安全性：異常毒性，熱原，降壓物質(zhì)，無菌等均勻性：制劑中藥物與輔料的混合均勻程度，如含量均勻度等雜質(zhì)的檢查方法雜質(zhì)檢查常用的方法包括：化學(xué)方法、物理方法、色譜方法、光譜方法化學(xué)方法顯色反應(yīng)檢查法；沉淀反應(yīng)檢查法；生成氣體的檢查法；滴定法色譜方法薄層色譜法雜質(zhì)對照法；適用于已知雜質(zhì)并能制備雜質(zhì)對照品的情況供試品溶液的自身稀釋對照法：適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不確定；或者雖然雜質(zhì)結(jié)構(gòu)已知，但是沒有雜質(zhì)對照品的情況。兩法并用法：對照藥物法：當(dāng)無合適的雜質(zhì)對照品，或者是供試品顯示的雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與主成分斑點(diǎn)顏色有差異，難以判斷限量時(shí)。高效液相色譜法外標(biāo)法（雜質(zhì)對照品法）：適用于有雜質(zhì)對照品，而且進(jìn)樣量能夠精確控制的情況加校正因子的主成分自身對照法：僅適用于已知雜質(zhì)的控制。以主成分為對照，用雜質(zhì)對照品測定雜質(zhì)的校正因子。不加校正因子的主成分自身對照法：適用于沒有雜質(zhì)對照品的情況面積歸一化法：通常只適用于供試品結(jié)構(gòu)相似，相對含量較高且限度范圍較寬的雜質(zhì)含量的粗略考察。氣相色譜法用來測定藥物中揮發(fā)性特殊雜質(zhì)，特別是藥物中的殘留溶劑的檢查，各國藥典均采用氣相色譜法。毛細(xì)電泳法可以用于多肽、酶類等藥物中雜質(zhì)的檢查。光譜方法紫外-可見分光光度法紅外分光光度法原子吸收分光光度法主要用于物質(zhì)中重金屬雜質(zhì)的檢查。其他方法熱分析法：熱重分析法（TG）和差熱掃描量熱分析法（DSC）酸堿度檢查法：酸堿度滴定法；指示液法；pH測定法物理性狀檢查法：臭味差異；揮發(fā)性差異；顏色差異；溶解性差異；旋光性差異藥物中一般雜質(zhì)的檢查一、氯化物的檢查原理：在稀硝酸溶液中與一定量標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液按同法操作結(jié)果比較加硝酸的作用：（1）避免Ag2CO3↓，Ag3PO4↓，Ag2O↓等的形成，消除這些陰離子的干擾（2）加速AgCl↓生成，產(chǎn)生較好的乳濁注意事項(xiàng)：Cl-的濃度：50～80μg/50mL為宜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液（10μgCl/mL）5.0～8.0mL供試品不澄清——過濾用含硝酸的水洗凈濾紙中Cl-至洗液與AgNO3不產(chǎn)生渾濁，再過濾供試液供試品有色——內(nèi)消色法內(nèi)消色法供試液（2倍量），等分成兩等分：1/2量+AgNO3→過濾至澄清+標(biāo)準(zhǔn)Cl-→對照1/2量+AgNO3→→→→→→→→→樣品比較對照與樣品的渾濁程度硫酸鹽檢查法原理：在稀鹽酸溶液中SO42-+Ba2+→BaSO4↓（白色渾濁）與一定量標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液按同法所得結(jié)果比較加酸的作用：加稀HCl使成酸性，可防止BaCO3↓,Ba3(PO4)2↓形成。但酸度不可過大使BaSO4溶解，50ml中加2ml稀HCl為宜。注意事項(xiàng)：SO42-的濃度：0.1～0.5mgSO42-/50mL為宜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液（0.1mgSO42-/mL）1.0～5.0mL溶液渾濁或有色；處理方法與Cl-檢查法相似鐵鹽檢查法原理：在鹽酸酸性溶液中紅色反應(yīng)在HCl酸性中進(jìn)行，可防止Fe3+水解Fe2+無此反應(yīng)，需加入氧化劑過硫酸氨氧化，同時(shí)防止硫氰酸鐵分解，或加硝酸處理，但需加熱煮沸除去亞硝酸Fe3+的濃度：5～90μgFe3+/50mL為宜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鐵銨[FeNH4(SO4)2﹒12H2O]0.5～9.0mL(10μgFe3+/mL)；標(biāo)準(zhǔn)液配置時(shí)為防止水解，需加適量硫酸注意事項(xiàng)：反應(yīng)可逆，加過量試劑可提高反應(yīng)靈敏度，同時(shí)可消除一些陰離子（Cl-，PO43-，SO42-，枸櫞酸根）與Fe3+形成有色配位物而引起的干擾供試品與對照品色調(diào)不一致或呈色淺；可加正丁醇或異戊醇提取環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物；需經(jīng)熾灼破壞后測定重金屬檢查法重金屬系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。第一法硫代乙酰胺法適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物，并且不含有可與金屬離子強(qiáng)配位基團(tuán)的藥物。原理：硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5）條件下水解，產(chǎn)生硫化氫，與重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物懸濁液。方法：注意事項(xiàng)：標(biāo)準(zhǔn)液：取Pb(NO3)2，先配成儲(chǔ)備液（為防水解），臨用時(shí)再稀釋成10μgPb/mL標(biāo)準(zhǔn)液濃度以10～20μgPb/27mL為宜（相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)Pb溶液1～2mL）供試品溶液有色：在對照管中加少量稀焦糖溶液，（也可加其他無干擾指示劑等）使兩管色調(diào)一致。如果外消色法不能消除干擾，可采用內(nèi)消色法。第二法熾灼后的硫代乙酰胺法應(yīng)用范圍：適合于難溶于水、稀酸或與水互溶有機(jī)溶劑的，含芳環(huán)或雜環(huán)等能與重金屬離子形成配位化合物的有機(jī)藥物原理：重金屬可能會(huì)與含有強(qiáng)配位基團(tuán)的芳環(huán)、雜環(huán)藥物形成牢固的價(jià)鍵作用，或者供試品不溶解，可能包裹重金屬。方法;方法：采用三酸處理，然后按第一法測定①取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)℉2SO4處理）②殘?jiān)?HNO3→加熱處理，蒸干→殘?jiān)蹥堅(jiān)?HCl→溶解→加熱蒸干（除殘留HCl）④殘?jiān)?水→溶解，加氨試液調(diào)pH至中性→移至比色管，按第一法檢查注意事項(xiàng)①標(biāo)準(zhǔn)管同法處理；熾灼溫度應(yīng)在500-600℃②熾灼殘?jiān)酉跛崽幚砗蟊仨毘M氧化氮③含鈉或含氟有機(jī)物熾灼時(shí)改用鉑坩堝或石英坩堝第三法硫化鈉法適合于不溶于稀酸而溶于堿的藥物或在稀酸中即生成沉淀的藥物。原理：在堿性介質(zhì)中，以硫化鈉為沉淀劑，Pb2+＋S2-→PbS↓，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較。注意：硫化鈉試液對玻璃有腐蝕，久置產(chǎn)生絮狀物，應(yīng)臨用新配；上述方法中使用的硫化鈉或硫代乙酰胺試液可以用飽和的硫化氫水溶液代替砷鹽檢查法第一法古蔡氏法原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)產(chǎn)生具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑。再與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較。方法：古蔡氏法儀器裝置注意事項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)砷液（As2O3溶液，1μgAs/mL)藥典規(guī)定取2mL制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑碘化鉀及氯化亞錫的催化作用：碘化鉀及氯化亞錫將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，被氧化生成的碘又可被氯化亞錫還原為碘離子，后者與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成穩(wěn)定的配離子，有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。氯化亞錫又可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生。碘化鉀及氯化亞錫還可抑制銻化氫的生成。醋酸鉛棉花的作用：吸收供試品中的硫化物在酸性溶液中產(chǎn)生的硫化氫氣體。供試品為硫化物：可先加HNO3處理，使硫化物氧化成硫酸鹽，以消除干擾。供試品為鐵鹽：消耗KI，SnCl2，并氧化AsH3，可先加酸性SnCl2，使Fe3+→Fe2+，再檢查第二法二乙基二硫代氨基甲酸銀法（DDC-Ag）原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)產(chǎn)生具有揮發(fā)性的砷化氫，還原二乙基二硫代氨基甲酸銀，產(chǎn)生紅色膠態(tài)銀，用目視比色法或于510nm處測定吸收度，以DDC-Ag溶液為空白。注意事項(xiàng)：本法靈敏度高（0.5μgAs/30mL)，在1～10μgAs/40mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，呈色可穩(wěn)定2h，重現(xiàn)性好，可采用標(biāo)準(zhǔn)對照法進(jìn)行定量本反應(yīng)可逆，加入有機(jī)堿與HDDC結(jié)合，有利于反應(yīng)向右定量進(jìn)行完全常用有機(jī)堿：吡啶（USP法）；三乙胺-氯仿溶液（ChP法）其他方法白田道夫法：含銻藥物，，棕褐色的膠態(tài)砷。次磷酸法：在鹽酸酸性溶液中，次磷酸將砷鹽還原為重色的游離砷。干燥失重檢查法指藥物在規(guī)定的條件下經(jīng)干燥后所減失的重量。主要指水分，也包括其他揮發(fā)性雜質(zhì)常壓恒溫干燥法——用于受熱較穩(wěn)定的藥物減壓干燥法與恒溫減壓干燥法——適用于mp低，受熱不穩(wěn)定及難除去水分的藥物干燥劑干燥法——適用于受熱分解或易升華的藥物熾灼殘?jiān)鼨z查法熾灼殘?jiān)赣袡C(jī)藥物或揮發(fā)性無機(jī)藥物，在硫酸存在條件下，進(jìn)行炭化和熾灼后，所殘留的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽灰分。方法：供試品置恒重的坩堝中，緩緩熾灼至炭化，放冷后加硫酸濕潤，低溫加熱至硫酸蒸汽除盡后，于高溫（700～800℃）熾灼至完全灰化，放冷，稱重，再熾灼至恒重?zé)胱浦梁阒氐牡诙畏Q重應(yīng)在規(guī)定溫度繼續(xù)熾灼30min以后含氟、鈉藥物對瓷坩堝有腐蝕，應(yīng)采用鉑坩堝有機(jī)溶劑殘留量測定溶液直接進(jìn)樣法靜態(tài)頂空進(jìn)樣法易炭化物檢查法藥物中存在的遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)稱為易炭化物。溶液顏色檢查法目視比色法；吸光度比較法；色差計(jì)法溶液澄清度檢查法芳酸類非甾體抗炎藥藥物的分析非甾體抗炎藥是一類不含有甾體骨架的抗炎藥，多數(shù)具有芳酸基本結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（鄰羥基苯甲酸類）其他非甾體抗炎藥主要理化性質(zhì)酸性pKa3~6，無機(jī)強(qiáng)酸>芳酸>碳酸>酚水解性：酯鍵、酰胺鍵吸收光譜特性基團(tuán)或元素特性鑒別試驗(yàn)與三氯化鐵反應(yīng)水楊酸反應(yīng)水楊酸的水溶液加三氯化鐵溶液，生成紫堇色配位化合物。反應(yīng)宜在中心或弱酸性（pH4-6）條件下進(jìn)行，在強(qiáng)酸性溶液中配位化合物可分解。阿司匹林——紫堇色；雙水楊酯（煮沸后）——紫色；二氟尼柳（在乙醇中）——深紫色酚羥基反應(yīng)水溶液加三氯化鐵試液：對乙酰氨基酚——藍(lán)紫色吡羅昔康——玫瑰紅色美洛昔康——淡紫紅色縮合反應(yīng)酮洛芬具有二苯酮結(jié)構(gòu)，在酸性條件下可與二硝基苯肼縮合生成橙色重氮化偶合物。重氮化-偶合反應(yīng)對乙酰氨基酚具有潛在的芳伯氨基，在稀鹽酸中加熱水解生成對氨基酚，后者具有游離的芳伯氨基，在酸性溶液中與亞硝酸鈉試液進(jìn)行重氮化反應(yīng)，生成的重氮鹽再與堿性β-萘酚偶合生成紅色偶氮化合物。其他反應(yīng)水解反應(yīng)阿司匹林與碳酸鈉試液加熱水解，得水楊酸鈉及醋酸鈉，加過量稀硫酸酸化后，則生成白色水楊酸沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣。元素反應(yīng)氯元素硫元素：美洛昔康中含二價(jià)硫高溫分解產(chǎn)生硫化氫氣體，遇醋酸鉛生成硫化鉛黑色沉淀。光譜法：UV、IR色譜法：TLC、HPLC有關(guān)物質(zhì)與檢查阿司匹林及雙水楊酯中游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)的檢查阿司匹林及雙水楊酯的合成阿司匹林中游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)的檢查游離水楊酸十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）ChP2015規(guī)定阿司匹林片、腸溶片、腸溶膠囊、泡騰片及栓劑均照原料藥方法與色譜條件檢查水楊酸，限量分別為0.3%，1.5%，1.0%，3.0%和3.0%。有關(guān)物質(zhì)：此中指除“游離水楊酸”外的其他未命名的相關(guān)雜質(zhì)（三）雙水楊酯中游離水楊酸的檢查含量測定（一）酸堿滴定法注意事項(xiàng)：采用中性乙醇作溶劑的目的：易于溶解樣品；防止本品水解滴定過程中不斷振搖的目的：防止局部堿度過大而促使其水解采用酚酞作指示劑：本品是弱酸，用強(qiáng)堿滴定時(shí)，化學(xué)計(jì)量點(diǎn)偏堿性，故選用堿性區(qū)域變色的酚酞水解后剩余滴定法原理——利用阿司匹林分子中的酯鍵，先加過量定量的NaOH溶液使之水解，然后用H2SO4滴定剩余的NaOH，同時(shí)做空白苯乙胺類擬腎上腺素藥物的分析擬腎上腺素類藥物大多具有苯乙胺的基本結(jié)構(gòu)，具有收縮血管、升高血壓、散大瞳孔、舒張支氣管、弛緩胃腸肌、加速心率、加強(qiáng)心肌收縮力等藥理作用。臨床上主要用作升壓、平喘、充血治療等，應(yīng)用廣泛。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)苯乙胺類擬腎上腺素類藥物的基本結(jié)構(gòu)為：（下述結(jié)構(gòu)式中兩個(gè)羥基為取代基R1）：苯環(huán)上的3,4位都有2個(gè)鄰位酚羥基，與兒茶酚胺類似，屬于兒茶酚胺類似物。腎上腺素鹽酸異丙腎上腺素鹽酸去氧腎上腺素鹽酸麻黃堿鹽酸苯乙雙胍鹽酸多巴胺主要理化性質(zhì)：酚羥基特性：具有鄰苯二酚結(jié)構(gòu)，可與重金屬離子配位呈色，露置空氣中遇光、熱易氧化，色澤變深，在堿性溶液中更易變色。弱堿性：具有烴氨基側(cè)鏈，氮為仲胺氮，顯弱堿性。游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，其鹽可溶于水。存在手性碳原子，具有光學(xué)活性。紫外吸收特性鑒別試驗(yàn)與鐵鹽的反應(yīng)：酚羥基，可與Fe3+離子配位呈色（大多為綠色）；加入堿性溶液即變色（大多為紫色），隨即被高鐵離子氧化并發(fā)生顏色變化（大多為紫紅色）與甲醛-硫酸反應(yīng)（氧化反應(yīng)）具有酚羥基取代的本類藥物，可與甲醛-硫酸反應(yīng)，形成具有錕式結(jié)構(gòu)的有色化合物。還原性反應(yīng)多數(shù)具有酚羥基，易被碘，過氧化氫，鐵氰化鉀等氧化劑氧化而呈現(xiàn)不同的顏色。氨基醇的雙縮脲反應(yīng)鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿和鹽酸去氧腎上腺素等藥物分子結(jié)構(gòu)中，芳環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)，可顯雙縮脲特征反應(yīng)。鹽酸麻黃堿和鹽酸去氧腎上腺素的鑒別之一即為雙縮脲反應(yīng)。鹽酸麻黃堿：加乙醚振搖，乙醚層顯紫紅色，水層變藍(lán)色；鹽酸去氧腎上腺素加乙醚不顯色脂肪伯胺的Rimini試驗(yàn)分子結(jié)構(gòu)中具有脂肪伯氨基的化合物，顯脂肪族專屬的Rimini反應(yīng)。Rimini試驗(yàn)中所含的丙酮必須不含甲醛成分。（重酒石酸間羥胺采用該法進(jìn)行鑒別）吸收光譜特征UV；IR特殊雜質(zhì)與檢查酮體雜質(zhì)的檢查腎上腺素、去甲腎上腺素等是經(jīng)相應(yīng)的酮體氫化還原而得，若氫化不完全，可能引進(jìn)酮體雜質(zhì)，藥典采用紫外法檢查。光學(xué)純度的檢查有關(guān)物質(zhì)的檢查鹽酸苯乙雙胍——檢查有關(guān)雙胍，用紙層析法分離鹽酸特步他林——TLC法鹽酸氨溴索——HPLC法鹽酸去氧腎上腺素——TLC法含量測定非水溶液滴定法非水溶液滴定法在非水溶劑中進(jìn)行的酸堿滴定測定法。主要用來測定有機(jī)堿及其氫硫酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽以及有機(jī)堿金屬鹽類藥物的含量。非水溶劑的種類有四種：酸性溶劑：有機(jī)弱堿在酸性溶劑中可顯著地增強(qiáng)其相對堿度，最常用的酸性溶劑為冰醋酸。堿性溶劑：有機(jī)弱酸在堿性溶劑中可顯著地增強(qiáng)其相對堿度，最常用的酸性溶劑為二甲基甲酰胺（DMF）兩性溶劑：常用的為甲醇惰性溶劑：這一類溶劑沒有酸堿性，如甲苯、三氯甲烷、丙酮等在非水酸性溶劑中，只要其在水溶液的pKb小于10，都能被冰醋酸均化到溶劑醋酸根（AcO-），相對堿強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，因而使弱堿性藥物的滴定能順利進(jìn)行?；驹砀呗人岬味ㄟ^程，實(shí)際上是一個(gè)置換滴定，即強(qiáng)酸（HClO4）置換出與有機(jī)弱堿結(jié)合的較弱的酸（HA）。方法適用范圍：主要用于Kb<10-8的有機(jī)堿鹽，對于不同堿性的雜環(huán)類藥物只有選擇合適的溶劑和指示終點(diǎn)方法才能獲得滿意的滴定結(jié)果酸根的影響：冰醋酸溶液中各酸根的酸性強(qiáng)弱如下：高氯酸>氫溴酸>硫酸>鹽酸>硫酸氫根>硝酸>磷酸、有機(jī)酸如測定有機(jī)堿性藥物氫鹵酸時(shí)，由于被置換出的氫鹵酸的酸性相當(dāng)強(qiáng)，影響滴定終點(diǎn)，不能直接滴定，需要進(jìn)行處理。一般處理方法是加入定量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中難解離的鹵化汞。硫酸鹽可直接滴定，但滴定至其成為硫酸氫鹽為止。供試品為硝酸鹽時(shí)，置換出的硝酸可使指示劑褪色，導(dǎo)致終點(diǎn)極難觀察，遇此情況應(yīng)以電位滴定法指示終點(diǎn)為宜。滴定劑的穩(wěn)定性滴定供試品與標(biāo)定高氯酸滴定液時(shí)的溫差超過10℃，則應(yīng)重新標(biāo)定。溴量法（需做空白對照）鹽酸去氧腎上腺素和重酒石酸間羥胺原料藥采用溴量法測定含量。三、亞硝酸鈉法（第八章詳細(xì)介紹）第八章對氨基苯甲酸酯和酰苯胺類局麻藥物的分析...卡因（類藥物）：局部麻醉藥局麻類藥物是一類能在用藥部位局部可逆性的阻斷感覺神經(jīng)沖動(dòng)發(fā)生與傳導(dǎo)的藥物。局麻藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通常包括三個(gè)部分：1.親脂性芳香環(huán)；2.中間連接功能基；3.親水性胺基。第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)對氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu)：，HX鹽酸普魯卡因苯佐卡因鹽酸丁卡因酰苯胺類局麻藥物的基本結(jié)構(gòu)：典型藥物：鹽酸利多卡因（水解后無重氮化-偶合反應(yīng)，因側(cè)鏈連兩個(gè)甲基）鹽酸布比卡因鹽酸羅哌（pai）卡因上述兩類藥物的主要理化性質(zhì)：芳伯氨基特性：對氨基苯甲酸類藥物的結(jié)構(gòu)中具有芳伯氨基（除鹽酸丁卡因外），故顯重氮化-偶合反應(yīng)：與芳醛縮合成Schiff堿反應(yīng)：易氧化變色等。鹽酸利多卡因、鹽酸布比卡因和鹽酸羅哌卡因因酰胺基鄰位存在兩個(gè)甲基，由于空間位阻影響，較難水解，所以其鹽的水溶液比較穩(wěn)定。水解特性：含有酯鍵弱堿性：脂烴側(cè)鏈為叔胺氮原子（除苯佐卡因外），具有一定的堿性，可以成鹽：能與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)：只能在非水溶劑體系中滴定與重金屬離子反應(yīng)特性：鹽酸利多卡因、鹽酸布比卡因和鹽酸羅帕卡因分子結(jié)構(gòu)中酰胺基上的氮可在水溶液中與銅離子或鈷離子結(jié)合，生成有色的配位化合物沉淀。可溶于三氯甲烷等有機(jī)溶劑而呈色。吸收光譜特性：具有苯環(huán)及相應(yīng)的取代基與脂烴側(cè)鏈，具有特征的紫外吸收光譜和紅外吸收光譜行為。其他特性：基于結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，其游離的堿多為堿性多為堿性油狀液體或低熔點(diǎn)固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑：其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶粉末，具有一定的熔點(diǎn)，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。第二節(jié)鑒別試驗(yàn)重氮化-偶合反應(yīng)：分子結(jié)構(gòu)中具有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物，均可發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成的重氮鹽可與堿性β-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。鹽酸丁卡因分子結(jié)構(gòu)中的芳香仲胺在酸性溶液中與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成N-亞硝基化合物的乳白色沉淀。與金屬離子反應(yīng)：1.鹽酸利多卡因的鑒別方法：分子結(jié)構(gòu)中具有芳酰胺和脂肪胺，在碳酸鈉試液中與硫酸銅反應(yīng)生成藍(lán)紫色配位化合物，此有色物質(zhì)轉(zhuǎn)溶入三氯甲烷中顯黃色。在酸性溶液中與氯化鈷試液反應(yīng)，生成亮綠色細(xì)小鈷鹽沉淀。鹽酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞試液煮沸，顯黃色：對氨基苯甲酸酯類藥物顯紅色或橙黃色。鹽酸普魯卡因胺的鑒別方法：因其分子結(jié)構(gòu)中具有芳酰胺結(jié)構(gòu)，可被濃過氧化氫氧化成羥肟酸，再與三氯化鐵作用形成配位化合物羥肟酸鐵。（溶液顯紫紅色，隨即變成暗棕色至棕黑色）水解產(chǎn)物反應(yīng)鹽酸普魯卡因的鑒別方法：10%氫氧化鈉試液，生成白色沉淀（普魯卡因）；加熱，變?yōu)橛蜖钗铮ㄆ蒸斂ㄒ颍?；繼續(xù)加熱，發(fā)生的蒸氣（部分普魯卡因水解，生成溶于水的對氨基苯甲酸鈉，以及揮發(fā)性的二乙氨基乙醇）能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變成藍(lán)色；熱至油狀物消失（全部水解，生成對氨基苯甲酸鈉）后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀（對氨基苯甲酸）。次沉淀溶于過量的鹽酸。苯佐卡因的鑒別方法：加氫氧化鈉試液，煮沸，即有乙醇生成，加碘試液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。吸收光譜特征鹽酸布比卡因：每1ml中約含0.40mg的溶液，照紫外-分光光度法測定，在263nm和271nm的波長處有最大吸收；其吸光度分別為0.53-0.58和0.43-0.48鹽酸普魯卡因胺片：每1ml中含鹽酸普魯卡因胺5μg的溶液，照紫外-分光光度法測定，在280nm的波長處有最大吸收。三、特殊雜質(zhì)與檢查對氨基苯甲酸類雜質(zhì)的檢查含有酯鍵，可發(fā)生水解反應(yīng)。特別是在注射液制備過程中受滅菌溫度、時(shí)間、溶液pH、貯藏時(shí)間以及光線和金屬離子等因素的影響，易發(fā)生水解反應(yīng)生成對氨基苯甲酸類的雜質(zhì)，其中對氨基苯甲酸隨貯藏時(shí)間的延長或受熱，可進(jìn)一步脫羧轉(zhuǎn)化成苯胺，而苯胺又可被氧化為有色物。鹽酸普魯卡因及其注射液以及注射用鹽酸普魯卡因?qū)Π被郊姿岬臋z查采用高效液相色譜法酰苯胺類局麻藥中2,6-二甲基苯胺及其他雜質(zhì)的檢查酰苯胺類局麻藥結(jié)構(gòu)中的酰胺鍵水解會(huì)產(chǎn)生2,6-二甲基苯胺等雜質(zhì)四、含量測定一、亞硝酸鈉滴定法1.基本原理：本類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基（潛在芳伯氨基），在酸性溶液中可與亞硝酸鈉反應(yīng)，可用亞硝酸鈉滴定法測定含量。（硝基苯類被鋅粉還原成苯胺類）基本原理：芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法指示反應(yīng)終點(diǎn)。2.測定的主要條件：加入適量溴化鉀加快反應(yīng)速度：在不同的無機(jī)酸體系中，氫溴酸>鹽酸>硝酸、硫酸。多用鹽酸。加入適量的溴化鉀，使體系中的溴化鉀和鹽酸起到氫溴酸的加速作用。反應(yīng)歷程：決速步：第一步。第一步反應(yīng)的快慢與含芳伯氨基化合物中芳伯氨基的游離密切程度有關(guān)。游離的芳伯氨基多，重氮化反應(yīng)速度就快；反之則慢。供試液中加入適量溴化鉀，與鹽酸作用產(chǎn)生溴化氫，或者與亞硝酸作用NOBr（溴化亞硝酰）；若供試品中僅有鹽酸，則生成NOCl（氯化亞硝酰）。前者的平衡常數(shù)比后者大300倍，即生成的NOBr量大得多，也就是在供試液中NO+的濃度大很多，從而加速了重氮化反應(yīng)。加過量鹽酸加速反應(yīng)：芳伯胺與鹽酸的摩爾比為1:2。過量鹽酸有利于：重氮化反應(yīng)加快；重氮鹽在酸中穩(wěn)定；可防止生成偶氮氨基化合物。一般胺:酸的比例以1:2.5~6為宜。反應(yīng)溫度：溫度低反應(yīng)慢，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，室溫10～30℃為宜，15℃以下滴定結(jié)果較準(zhǔn)確滴定速度：為防止滴定過程中亞硝酸揮發(fā)與分解，宜將滴定管尖端插入液面下約2/3處，一次將大部分滴定液在攪拌下加入，然后將滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，緩緩滴定至終點(diǎn)。在近終點(diǎn)時(shí)，因尚未反應(yīng)的芳伯氨基藥物的濃度極稀，須在最后一滴加入后，攪拌1-5分鐘，再確定終點(diǎn)是否真正到達(dá)。指示終點(diǎn)的方法：永停滴定法終點(diǎn)前：電流計(jì)指針處于零終點(diǎn)時(shí)：溶液中少量HNO2使電極兩端起氧化還原反應(yīng)，使指針偏轉(zhuǎn)不再回復(fù)而指示終點(diǎn)指示終點(diǎn)的其他方法：外指示劑法——碘化鉀-淀粉糊劑原理：內(nèi)指示法常用的有：中性紅，橙黃Ⅳ-亞甲藍(lán)等電位法非水溶液滴定法：鹽酸丁卡因、鹽酸利多卡因等分子結(jié)構(gòu)中含有烴胺側(cè)鏈，具弱堿性，可用非水溶液滴定法測定含量。以冰醋酸為溶劑，結(jié)晶紫為指示劑，用高氯酸滴定液滴定注意：鹽酸丁卡因、鹽酸利多卡因含有鹽酸，滴定前需加醋酸汞處理，以消除鹽酸干擾紫外分光光度法高效液相色譜法二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析...地平（類藥物）：降血壓藥物二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物，也稱鈣拮抗劑。本類藥物的共同特征是均含有苯基-1,4-二氫吡啶的母核二氫吡啶類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、常見藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)含有苯基-1,4-二氫吡啶的母核，基本骨架：硝苯地平苯磺酸氨氯地平二、主要理化性質(zhì)：1.二氫吡啶環(huán)的還原性：（可用氧化還原反應(yīng)鑒別或氧化還原滴定法進(jìn)行含量測定）2.硝基的還原性：可被還原劑還原成芳伯氨基，進(jìn)一步可用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別3.二氫吡啶環(huán)氨基質(zhì)子解離性：與堿作用，二氫吡啶環(huán)1.4-位氫均可發(fā)生解離，形成P-π共軛而發(fā)生顏色變化（可用于鑒別）4.光不穩(wěn)定性：二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)歧化作用。（避光操作和檢查引入的特殊雜質(zhì)）5.旋光性：C4位多為手性碳原子，手性對映體具有旋光性。（臨床類二氫吡啶類藥物大多為消旋體）6.吸收光譜特性：具有芳環(huán)，在紫外光區(qū)有特征吸收。鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)鑒別法：1.與亞鐵鹽反應(yīng)：二氫吡啶類藥物苯環(huán)上硝基具有氧化性，可將氫氧化亞鐵氧化成紅棕色氫氧化鐵沉淀。（ChP2015用該反應(yīng)鑒別尼莫地平）2.與氫氧化鈉試液反應(yīng)：二氫吡啶類藥物的丙酮溶液與氫氧化鈉試液反應(yīng)呈橙紅色。（ChP2015用該反應(yīng)鑒別尼索地平、尼群地平、硝苯地平）3.沉淀反應(yīng)：（1,4-二氫吡啶可與重金屬鹽類形成沉淀）（如尼莫地平與氯化汞反應(yīng)生成白色沉淀，尼群地平與碘化鉍鉀反應(yīng)生成橙紅色沉淀）4.重氮化-偶合反應(yīng)：苯環(huán)上硝基具有氧化性，在酸性條件下被鋅粉還原成芳伯氨基，可用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別。（BP2015、EP8.0、JP16均用該反應(yīng)鑒別硝苯地平）有關(guān)物質(zhì)與檢查一、硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)的檢查硝苯地平在光照和氧化劑存在條件下分別生成兩種降解氧化產(chǎn)物：雜質(zhì)Ⅰ：2,6-二甲基-4-（2-硝基苯基）-3,5-吡啶二甲酸二甲酯；雜質(zhì)Ⅱ：2,6-二甲基-4-（2-亞硝基苯基）-3,5-吡啶二甲酸二甲酯。雜質(zhì)二為硝苯地平的主要光分解產(chǎn)物，對人體極為有害。ChP2015、USP38、BP2015、EP8.0硝苯地平項(xiàng)下均規(guī)定采用HPLC進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查。二、苯磺酸氨氯地平中有關(guān)物質(zhì)的檢查在光照和氧化劑存在條件下光催化將二氫吡啶芳構(gòu)化成氧化產(chǎn)物，對人體極為有害。ChP2015、USP38；采用TLC（正相）和HPLC（反相）進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查；BP2015、EP8.0、JP16采用HPLC進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查。含量測定鈰量法（利用二氫吡啶類藥物的還原性），也稱硫酸鈰法，是以Ce（SO4）2為標(biāo)準(zhǔn)溶液的氧化還原滴定法。由于酸度較低時(shí)Ce4+易水解，故本滴定在強(qiáng)酸性條件下進(jìn)行。Ce4+具有黃色，Ce3+為無色，故自身可作指示劑，但不夠靈敏，常用鄰二氮菲作指示劑，終點(diǎn)敏銳。ChP2015收載的二氫吡啶類原料藥，BP2015、EP8.0收載的尼莫地平、尼群地平、非洛地平、硝苯地平、JP16收載的尼群地平采用該法測定含量。硝苯地平與硫酸鈰反應(yīng)的摩爾比為1:2.用鄰二氮菲指示液指示終點(diǎn)。終點(diǎn)時(shí)微過量的Ce4+將指示液中的Fe3+氧化成Fe2+，使橙紅色消失，以指示終點(diǎn)。鄰二氮菲指示液應(yīng)臨用新配。巴比妥及苯二氮卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析巴比妥類是第一代鎮(zhèn)靜催眠藥物，長期用藥可產(chǎn)生耐藥性和成癮性，用量大時(shí)可抑制呼吸中樞而造成死亡，目前較少用于鎮(zhèn)靜催眠，主要用于作為抗癲癇藥物應(yīng)用于臨床。苯二氮卓類是第二代鎮(zhèn)靜催眠藥。第一節(jié)巴比妥類藥物的分析結(jié)構(gòu)與性質(zhì)巴比妥類藥物均為巴比妥酸的衍生物，為環(huán)狀酰脲類鎮(zhèn)靜催眠藥?；窘Y(jié)構(gòu)通式：藥物R1R2巴比妥—C2H5—C2H5苯巴比妥—C2H5—C6H5司可巴比妥—CH2CH=CH2—CH(CH3)(CH2)2CH3戊巴比妥—C2H5—CH(CH3)(CH2)2CH3異戊巴比妥—C2H5—CH2CH2CH(CH3)2硫噴妥鈉—C2H5—CH(CH3)(CH2)2CH3C2上S取代物的鈉鹽巴比妥類藥物通常為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；具有一定的熔點(diǎn)；在空氣中穩(wěn)定，加熱多能升華。該類藥物一般微溶或極微溶于水，易溶于乙醇等有機(jī)溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而溶于有機(jī)溶劑。巴比妥藥物的理化性質(zhì)特征：1.弱酸性巴比妥類藥物的母核結(jié)構(gòu)環(huán)狀結(jié)構(gòu)中含有1,3-而酰亞胺基團(tuán)，因而其分子能發(fā)生酮式-烯醇式互變異構(gòu)，在水溶液中發(fā)生二級電離。本類藥物具有弱酸性，故可與強(qiáng)堿反應(yīng)生成水溶性的鹽類，一般為鈉鹽。2.水解反應(yīng)巴比妥類藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有酰亞胺結(jié)構(gòu)，與堿液共沸即水解，釋放出氨氣，可使紅色石蕊試紙變藍(lán)。3.與金屬離子反應(yīng)：該類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有丙二酰脲或酰亞胺基團(tuán)，在合適的pH的溶液中，可與某些重金屬離子，如Ag+，Cu+，Co+，Hg+等反應(yīng)顯色或產(chǎn)生有色沉淀。（1）與銀鹽的反應(yīng)：含有酰亞胺基團(tuán)，在碳酸鈉溶液中，生成鈉鹽而溶解，再與硝酸銀溶液反應(yīng)，首先生成可溶性的一銀鹽，加入過量的硝酸銀溶液，則生成難溶性的二銀鹽白色沉淀。（2）與銅鹽的反應(yīng)：巴比妥類藥物在吡啶溶液中生成的烯醇式異構(gòu)體與銅吡啶試液反應(yīng)，形成穩(wěn)定的配位化合物，產(chǎn)生類似雙縮脲的呈色反應(yīng)。在此反應(yīng)中，巴比妥類藥物呈紫堇色或生成紫色沉淀，含硫巴比妥類藥物則呈現(xiàn)綠色。（3）與鈷鹽的反應(yīng)：巴比妥類藥物在堿性溶液中可與鈷鹽反應(yīng)，生成紫堇色配位化合物。在無水條件下比較靈敏，生成的有色產(chǎn)物比較穩(wěn)定。常用溶劑為無水甲醇或乙醇；鈷鹽為醋酸鈷、硝酸鈷或氯化鈷；堿以有機(jī)堿尾號，一般采用異丙胺。（4）與汞鹽的反應(yīng)：巴比妥類藥物與硝酸汞或氯化汞溶液反應(yīng)，可生成白色汞鹽沉淀，此沉淀在氨試液溶解。4.與香草醛的反應(yīng)巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中，丙二酰脲基團(tuán)中的氫比活潑，可與香草醛在濃硫酸存在下發(fā)生縮合反應(yīng)，生成棕紅色產(chǎn)物（1）紫外吸收光譜特性在酸性溶液中，5,5-二取代和1,5,5-三取代巴比妥類藥物不電離，無明顯的紫外吸收峰；在pH10的堿性溶液中，發(fā)生一級電離，形成共軛體系結(jié)構(gòu)，在240nm波長處有最大吸收峰；在pH13的強(qiáng)堿性溶液中5,5-二取代巴比妥類藥物發(fā)生二級電離，引起共軛體系延長，導(dǎo)致吸收峰紅移至255nm；1,5,5-三取代巴比妥類藥物因1位取代基的存在，故不發(fā)生二級電離，最大吸收波長仍位于240nm。（2）薄層色譜行為特征顯微結(jié)晶：巴比妥為長方形結(jié)晶；苯巴比妥在開始結(jié)晶時(shí)呈現(xiàn)球形，后變?yōu)榛ò隊(duì)睢０捅韧着c硫酸銅-吡啶試液反應(yīng)后，生成十字形的紫色結(jié)晶；苯巴比妥反應(yīng)后，則生成淺紫色細(xì)小不規(guī)則會(huì)類似菱形的結(jié)晶.鑒別試驗(yàn)丙二酰脲反應(yīng)銀鹽反應(yīng)銅鹽反應(yīng)特征基團(tuán)反應(yīng)利用硫元素的鑒別試驗(yàn)：硫代巴比妥類分子中含有硫元素，可在氫氧化鈉溶液中與鉛離子反應(yīng)生成白色沉淀；加熱后，沉淀轉(zhuǎn)變?yōu)榱蚧U。利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn)：因其分子結(jié)構(gòu)中含有烯丙基，分子中的不飽和鍵可與碘、溴或高錳酸鉀作用，使其褪色。與碘試液的反應(yīng)：所顯棕黃色應(yīng)在5分鐘內(nèi)消失與高錳酸鉀的反應(yīng)：堿性條件，將紫色的高錳酸鉀還原成棕色的二氧化錳。利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗(yàn)硝化反應(yīng)：含有芳香取代基的巴比妥類藥物，可與硝酸鉀及硫酸共熱，可發(fā)生硝基化反應(yīng)，生成黃色硝基化合物。與硫酸-亞硝酸鈉的反應(yīng)：苯巴比妥可與硫酸-亞硝酸鈉反應(yīng)，生成橙黃色產(chǎn)物，并隨即變?yōu)槌燃t色。與甲醛-硫酸的反應(yīng)：苯巴比妥與甲醛-硫酸反應(yīng)，生成玫瑰紅產(chǎn)物含量測定銀量法ChP2015采用銀量法測定苯巴比妥及其鈉鹽、異戊巴比妥及其鈉鹽以及其制劑的含量為減少誤差，曾用丙酮作為介質(zhì)來克服滴定過程中溫度變化的影響和改善終點(diǎn)的觀察，ChP1985改用甲醇及3%無水碳酸鈉溶劑系統(tǒng)，采用銀-玻璃電極系統(tǒng)電位法指示終點(diǎn)。（替代目視法）注意事項(xiàng)：無水碳酸鈉需新鮮配制；銀電極使用前用硝酸清洗，再用水洗凈溴量法凡在5位取代基中含有不飽和雙鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵可與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)。至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，滴定至藍(lán)色消失。酸堿滴定法在水-乙醇混合溶劑中的滴定：由于巴比妥類藥物在水中的溶解度較小，生成的弱酸鹽易于水解，影響滴定終點(diǎn)的觀察，故滴定時(shí)多在醇溶液或含水的醇溶液中進(jìn)行。以麝香草酚酞為指示劑，滴定至淡藍(lán)色為終點(diǎn)。在膠束水溶液中進(jìn)行的滴定：本法是在有機(jī)表面活性劑的膠束水溶液進(jìn)行滴定，用指示劑或電位法指示終點(diǎn)。非水溶液滴定法：巴比妥類藥物在非水溶劑中的酸性增強(qiáng)，用堿性標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定時(shí)，終點(diǎn)較為明顯。常用的指示劑為麝香草酚藍(lán)，也可以用玻璃-甘汞電極以電位法指示終點(diǎn)。紫外分光光度法巴比妥類藥物在酸性介質(zhì)中不電離，無明顯的紫外吸收，但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收的特征結(jié)構(gòu)紫外分光光度法E1%1cmA=Ecl→c=A/El標(biāo)準(zhǔn)曲線法A=a+b×cr>0.999，a接近0標(biāo)準(zhǔn)對照法c樣/c標(biāo)=A樣/A標(biāo)直接測定的紫外分光光度法例：供試品中硫噴妥鈉的含量測定計(jì)算公式硫噴妥鈉（mg）=1.091×Cs×（Au/As）×D×10-3式中Au和As分別為供試品溶液和對照品溶液的吸光度；Cs為對照品溶液的濃度（μg/ml）；1.091為硫噴妥鈉和硫噴妥的分子量比值；D為稀釋倍數(shù)。苯巴比妥鈉（mg）=5×1.095×Cs×（Au/As）式中，Cs為對照品溶液的濃度（μg/ml）；Au和As分別為供試品溶液和對照品溶液的吸光度；1.095位苯巴比妥鈉與苯巴比妥分子量之比；5位稀釋倍數(shù)和重量單位的換算因子。抽取分離后的紫外分光光度法高效液相色譜法填充劑：辛烷基硅烷鍵合硅膠苯二氮卓類藥物的分析苯二氮卓類藥物為苯環(huán)與七元含氮雜環(huán)稠合而成的有機(jī)藥物，其中1,4-苯并二氮雜卓類藥物是目前臨床應(yīng)用最廣泛的抗焦慮、抗驚厥藥。典型藥物：地西泮（水解后，茚三酮反應(yīng)）奧沙西泮（水解后，重氮化-偶合反應(yīng)）勞拉西泮氯硝西泮氯氮卓（水解后，重氮化-偶合反應(yīng)）三唑侖主要理化性質(zhì)苯二氮卓類藥物通常為白色或微黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；具有一定的熔點(diǎn)。該類藥物一般不溶或極微溶于水，溶于丙酮或三氯甲烷等有機(jī)溶劑。弱堿性本類藥物結(jié)構(gòu)中紅二氮雜卓環(huán)為七元環(huán)，環(huán)上的氮原子具有堿性，苯基的取代使堿性降低。上述藥物中，僅奧沙西泮、勞拉西泮和氯硝西泮，具有仲酰胺結(jié)構(gòu)，能在堿性介質(zhì)中共振去質(zhì)子化，而具有兩個(gè)pKa值。水解性在強(qiáng)酸性溶液中，可水解，形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物。UV吸收特性含有較大共軛體系鑒別試驗(yàn)化學(xué)鑒別試驗(yàn)沉淀反應(yīng)氯氮卓的鹽酸溶液（9→1000），遇碘化鉍鉀試液，生成橙紅色沉淀。硫酸-熒光反應(yīng)此類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。如地西泮為黃綠色，氯氮卓為黃色。在稀硫酸中，地西泮為黃色，氯氮卓為紫色。特征基團(tuán)反應(yīng)氯化物的鑒別反應(yīng)此類藥物大多為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞芳伯胺的反應(yīng)本類藥物如N1位為取代者，與鹽酸共熱水解后，生成芳伯胺，可發(fā)生重氮化-偶合反應(yīng)顯色吸收光譜特征常利用紫外最大吸收波長，以及最大吸收波長處的吸光度或吸光度比值法進(jìn)行鑒別。紅外吸收光譜用于大多數(shù)1,4-苯并二氮卓類藥物的指紋鑒別。色譜法廣泛用于本類藥物原料和制劑的專屬鑒別含量測定非水溶液滴定法非水堿量法本類藥物多為堿性，在非水酸性溶劑中，藥物的堿度能被溶劑均化到陰離子水平，相對堿強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，從而使滴定能順利進(jìn)行。當(dāng)藥物的pKb為8-10時(shí)，一般選擇冰醋酸作為溶劑；堿性更弱的藥物，pKb為10-12時(shí)，宜選擇冰醋酸與醋酐的混合液作為溶劑；pKb>12時(shí)，應(yīng)用醋酐作為溶劑。非水酸量法僅有奧沙西泮及勞拉西泮能在堿性介質(zhì)中去質(zhì)子化，具有一定的酸性?？刹捎脷溲趸亩』@滴定液非水酸量法進(jìn)行含量測定。紫外分光光度法對照品比較法分別配制供試品和對照品溶液，在規(guī)定波長處分別測定吸光度，供試品中被測組分的濃度cx=（Ax/AR）cR，cx和cR分別為供試品和對照品溶液的濃度；Ax和AR為別為供試品和對照品溶液的吸光度。吸收系數(shù)法配制供試品溶液，在規(guī)定波長處測定其吸光度A，在根據(jù)吸收系數(shù)E1%1cm，則供試品溶液的濃度c=A/（l×E1%1cm）高效液相色譜法吩噻嗪類抗精神病藥物的分析吩噻嗪類（硫氮雜蒽類）藥物能夠阻斷多巴胺受體，在保持意識(shí)清醒的情況下控制幻覺及妄想等癥狀，主要用于治療Ⅰ型精神分裂癥，屬于抗精神病藥物。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)典型藥物與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)吩噻嗪類藥物具有硫氮雜蒽母核2位的R’為電負(fù)性較大的基團(tuán)；10位的R為堿性側(cè)鏈。鹽酸異丙嗪鹽酸氯丙嗪奮乃靜鹽酸三氟拉嗪主要理化性質(zhì)弱堿性：硫氮雜蒽母核的氮原子堿性極弱；10位取代的脂烴氨基、哌嗪及哌啶的衍生物所含的氮原子堿性極強(qiáng)，可用于鑒別和含量測定。易氧化性：環(huán)上硫原子易被氧化成亞砜和砜。光照時(shí)易氧化變色，本類藥物應(yīng)避光保存。與金屬離子配合呈色：硫氮雜蒽母核的二價(jià)硫可與鈀離子配合，生成有色化合物，可用于鑒別和含量測定。其氧化物亞砜和砜則無此反應(yīng)。紫外吸收光特性：在205、254和00nm三個(gè)波長處有最大吸收。紅外光吸收特性鑒別試驗(yàn)與生物堿沉淀劑反應(yīng)氧化顯色反應(yīng)本類藥物與H2SO4，HNO3，Br2水，H2O2，F(xiàn)eCl3等試劑的顯色反應(yīng)，與金屬鈀離子的顯色反應(yīng)分解反應(yīng)含氟藥物經(jīng)與碳酸鈉、碳酸鉀在600℃熾灼，分解成氟化物，與茜素鋯作用成[ZrF6]2-，游離出茜素，是溶液由紅色→黃色氯化物鑒別反應(yīng)有關(guān)物質(zhì)與檢查鹽酸異丙嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查：主要指合成過程中副產(chǎn)物（異構(gòu)體）鹽酸硫利達(dá)嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查均采用HPLC法——供試品稀釋液對照法含量測定酸堿滴定法非水溶液滴定法：ChP2015鹽酸氯丙嗪的含量測定乙醇水溶液中氫氧化鈉滴定法：ChP2015鹽酸異丙嗪的含量測定分光光度法直接分光光度法本法適用于純度較高、雜質(zhì)及輔料無干擾或干擾易排除的吩噻嗪類藥物的含量測定。如ChP2015鹽酸氯丙嗪（糖衣）片、注射液的含量測定。提取后分光光度法通過提取排除輔料干擾，通常用于吩噻嗪類藥物制劑的含量測定。如USP38鹽酸異丙嗪口服液的含量測定。提取后雙波長分光光度法吩噻嗪類藥物的氧化物不能夠去除，且因結(jié)構(gòu)相近，在測定波長處產(chǎn)生干擾，故采用雙波長分光光度法測定含量。如USP38鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定。原理：1-繪制光譜圖2-選擇波長3-樣品測定波長選擇原則：雜質(zhì)在兩個(gè)波長處存在等吸收，吸光度的值存在足夠大的差。鈀離子比色法反應(yīng)摩爾比，2:1高效液相色譜法反相高效液相色譜法（RP-HPLC法）通常在流動(dòng)相中加入含氮堿性競爭試劑（掃尾劑），以抑制堿性藥物與弱酸性硅醇基的作用。常用的掃尾劑有醋酸銨、三乙胺、二乙胺、乙腈等。離子對高效液相色譜法（Ion-PairRP-HPLC法）通常在反相色譜流動(dòng)相的水中加入與待測組分離子電荷相反的離子對試劑，使之在洗脫中與待測組分離子形成離子對，以增強(qiáng)待測組分在非極性固定相中的保留。喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的分析用于預(yù)防和治療瘧疾的藥物按其結(jié)構(gòu)可以分為喹啉類、青蒿素類和嘧啶類。喹啉類藥物的分析喹啉類藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，換上雜原子的反應(yīng)性能基本與吡啶相同。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)典型藥物與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)按其結(jié)構(gòu)可將喹啉類抗瘧疾進(jìn)一步分為4-喹啉甲醇類（代表藥物喹啉）、4-氨基喹啉類（代表藥物為氯喹、哌喹、咯萘啶等）和8-氨基喹啉類（代表藥物為伯氨喹）硫酸奎寧：磷酸伯氨喹：主要化學(xué)性質(zhì)：堿性：生物堿旋光性：喹啉類抗瘧藥基本都具有手性。熒光特性：硫酸奎寧和二鹽酸奎寧在稀硫酸溶液中顯藍(lán)色熒光。紫外吸收光譜特征：具有共軛體系，可用紫外吸收光譜的特征鑒別該類藥物。鑒別試驗(yàn)（一）奎寧為6-位含氧喹啉衍生物，可以發(fā)生綠奎寧反應(yīng)。反應(yīng)的基本機(jī)制是6-位含氧喹啉經(jīng)氯水（或溴水）氯化，再以氨水處理縮合，生成綠色的二醌基亞胺的銨鹽。（二）光譜特征1.紫外吸收光譜特征：吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，具有共軛體系2.熒光光譜特征：硫酸奎寧和二鹽酸奎寧在稀硫酸溶液中均顯藍(lán)色熒光。3.紅外吸收光譜特征（三）無機(jī)酸鹽1.硫酸鹽的鑒別反應(yīng)2.氯化物的鑒別反應(yīng)3.磷酸鹽的鑒別反應(yīng)：(1)取供試品的中性溶液，加硝酸銀試液，即生成淺黃色沉淀；分離，沉淀在氨試液或稀硝酸中均易溶解。(2)取供試品溶液，加氯化銨鎂試液，即生成白色結(jié)晶性沉淀。(3)取供試品溶液，加鉬酸銨試液與硝酸后，加熱即生成黃色沉淀；分離，沉淀能在氨試液中溶解。三、有關(guān)物質(zhì)與檢查1.酸度主要是在成鹽過程中引入。2.三氯甲烷-乙醇中不溶物質(zhì)本項(xiàng)檢查主要控制藥物在制備過程中引入的醇中不溶性雜質(zhì)或無機(jī)鹽類等。3.其他金雞納堿本項(xiàng)檢查主要控制硫酸奎寧中的其他生物堿，采用HPLC或TLC中的主成分自身對照法或雜質(zhì)對照品對照法進(jìn)行檢查。（奎寧丁的主要藥理活性則是抗心律失常）四、含量測定硫酸奎寧的含量測定：非水溶液直接滴定，摩爾比，硫酸奎寧：高氯酸=1:3提取后滴定，摩爾比，硫酸奎寧：高氯酸=1:4青蒿素類藥物的分析青蒿素又名黃蒿素，是我國學(xué)者從菊科職務(wù)黃花蒿中提取分離得到的一個(gè)含過氧基團(tuán)的新型倍半萜內(nèi)酯。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)典型藥物與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)青蒿素類藥物是具有過氧橋的倍半萜內(nèi)酯類化合物。二、鑒別試驗(yàn)呈色反應(yīng)過氧橋的氧化反應(yīng)（碘化鉀試液-淀粉）：由于青蒿素類是具有過氧橋的倍半萜內(nèi)酯類化合物，這類化合物具有氧化性。在酸性條件能將I-氧化成I2與淀粉指示液，生成藍(lán)紫色。羥肟酸鐵反應(yīng)：含有內(nèi)酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯類化合物在堿性條件與羥胺作用，生成羥肟酸；在稀酸中與高鐵離子呈色。吸收光譜特性：UV、IR色譜法利用比較供試品溶液主峰與對照品溶液主峰的保留時(shí)間(tR)是否一致或比較供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色與對照品溶液主斑點(diǎn)的位置和顏色是否相同進(jìn)行鑒別。莨菪烷類抗膽堿藥物的分析莨菪烷（拖烷）類抗膽堿藥物是由莨菪烷衍生的氨基醇與不同的有機(jī)酸縮合成脂的生物堿。分子結(jié)構(gòu)中具五元脂環(huán)氮原子，堿性較強(qiáng)，易與酸成鹽。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)莨菪烷生物堿是從茄科職務(wù)如顛茄、莨菪和白曼陀羅等中提取的具有M受體阻斷作用的生物堿。這類生物堿都是由莨菪醇與不同的有機(jī)酸所成的脂。硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿主要理化性質(zhì)水解性阿托品和東莨菪堿分子結(jié)構(gòu)中具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。例如阿托品可水解生成莨菪醇Ⅰ和莨菪酸Ⅱ。堿性阿托品和東莨菪堿分子結(jié)構(gòu)中的五元脂環(huán)上有叔胺碳原子，因此具有較強(qiáng)的堿性，易與酸成鹽。旋光性氫溴酸東莨菪堿分子結(jié)構(gòu)中含有不對稱碳原子，呈左旋體。阿托品中也含有不對稱碳原子，但為外消旋體，無旋光性。利用此性質(zhì)可區(qū)別阿托品和東莨菪堿。鑒別試驗(yàn)托烷生物堿類的Vitali鑒別反應(yīng)原理：阿托品、莨菪堿等莨菪烷類生物堿結(jié)構(gòu)中的酯鍵水解后生成莨菪酸，經(jīng)發(fā)煙硝酸加熱處理轉(zhuǎn)變?yōu)槿趸苌铮ǘ囡@黃色），再與氫氧化鉀的醇溶液和固體氫氧化鉀作用脫羧，轉(zhuǎn)變成具有共軛結(jié)構(gòu)的陰離子而顯深紫色。與硫酸—重鉻酸鉀的反應(yīng)本類藥物水解后，生成的莨菪酸可與硫酸—重鉻酸鉀在加熱的條件先發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛，而逸出類似于苦杏仁的臭味。與生物堿顯色劑或沉淀劑的反應(yīng)生物堿在酸性水溶液中可與重金屬鹽類或大分子酸類等沉淀試劑反應(yīng)，生成難溶性的鹽、復(fù)鹽或配合物沉淀。阿托品＋氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿＋氯化汞醇試液→白色復(fù)鹽沉淀光譜法鑒別法：UV、IR色譜法：TLC、HPLC、GC、PC（二維紙色譜法）硫酸鹽和溴化物的反應(yīng)為改善莨菪烷類生物堿藥物的水溶性和穩(wěn)定性，他們大都制成硫酸鹽或氫溴酸鹽。有關(guān)物質(zhì)與檢查氫溴酸東莨菪堿的有關(guān)物質(zhì)與檢查酸度：通過其5%水溶液的pH應(yīng)為4.0-5.5來控制本品的酸性雜質(zhì)。易氧化物：雜質(zhì)阿撲東莨菪堿、其他含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì)可使高錳酸鉀溶液褪色。其他生物堿：利用阿撲阿托品、顛茄堿堿性較弱，加氨試液被游離析出，使發(fā)生渾濁而檢出。硫酸阿托品中的有關(guān)物質(zhì)與檢查莨菪堿——利用阿托品無旋光性，莨菪堿為左旋體，旋光法檢測有關(guān)物質(zhì)——HPLC法第四節(jié)含量測定一、酸性染料比色法酸性染料比色法是針對生物堿藥物在一定的pH條件下可與某些酸性染料結(jié)合顯色，而進(jìn)行分光光度法測定藥物含量的方法?；驹碓谶m當(dāng)?shù)膒H介質(zhì)中，測定有機(jī)相吸收度，按對照品法計(jì)算含量。酸性染料：溴甲酚綠、溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)。影響因素水相最佳pH的選擇：pH過低，抑制了酸性染料的解離；影響離子對的形成；pH過高，有機(jī)堿藥物呈游離狀態(tài)，使離子對的濃度也很低。酸性染料及其濃度：選用的繞繚應(yīng)該不僅能夠與有機(jī)堿性藥物定量的結(jié)合，而且生成的離子對要在有機(jī)相中有較大的溶解度，同時(shí)要求生成的離子對在其最大吸收波長處有較高的吸光度；染料在有機(jī)相中則要不溶，或很少溶解。有機(jī)溶劑的選擇：對離子對溶解度大，即與離子對形成氫鍵的能力強(qiáng)，不與或極少與水相混溶。水分的影響：影響結(jié)果，脫水劑或?yàn)V紙除去水分。酸性染料中的有色雜質(zhì)：有機(jī)溶劑萃取除去。二、非水溶液滴定法硫酸在冰醋酸非水介質(zhì)中只能發(fā)生一級電離，生成HSO4-，即只提供一個(gè)H+。所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中只能滴定至硫酸氫鹽，可用高氯酸滴定液直接滴定。硫酸阿托品與高氯酸反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量摩爾比為1:1。維生素類藥物的分析維生素，主要用于機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)，體內(nèi)不能自行合成，須從食物中攝取。維生素Ａ的分析維生素（vitamin）Ａ：維生素A1（視黃醇）、去氫維生素A（維生素A2）和去水維生素（維生素A3）等。維生素A1的活性最高，維生素A2生物活性是維生素A1的30%-40%，維生素A3是維生素A1的0.4%，故通常所說的維生素A系指維生素A1。維生素A是一種不飽和脂肪醇，在自然界中主要來自于鮫類無毒海魚肝臟中提取的脂肪油（通稱為魚肝油）。在魚肝油中維生素A多以各種酯類混合物的形式存在，其中主要為醋酸酯和棕櫚酸酯。ChP2015收載的維生素A是指人工合成的維生素A醋酸酯結(jié)晶加精制植物油制成的油溶液。脂溶性：vitA、D2、D3、E、K1水溶性：vitB（族）（B1、B2、B6、B12），vitC、葉酸，煙酸、煙酸胺結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)維生素A的結(jié)構(gòu)為一個(gè)具有共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烯。天然維生素A主要是全反式維生素A。R的不同則決定了維生素A的醇式或酯式狀態(tài)。魚肝油中尚含有去氫維生素Ａ（維生素A2）和去水維生素A（維生素A3），其先交均低于維生素A；鯨醇系維生素Ａ醇的二聚體，無生物活性。這些物質(zhì)也有紫外吸收，并能與顯色劑產(chǎn)生相近顏色。性質(zhì)溶解性：維生素A與三氯甲烷、乙醚、環(huán)己烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。不穩(wěn)定性：維生素A中含有多個(gè)不飽和鍵，易被空氣中的氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，特別在加熱和金屬離子存在時(shí)更易被氧化變質(zhì)，生成無生物活性的環(huán)氧化合物、維生素A醛或維生素A酸。因此維生素A及其制劑除需密封在涼暗處保存外，還需充氮?dú)饣蚣尤牒线m的抗氧劑以提高藥物的穩(wěn)定性。紫外吸收特性：維生素A分子中具有共軛多烯醇的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在325-328nm范圍內(nèi)有最大吸收，可用于鑒別和含量測定。與三氯化銻呈色：維生素A在三氯甲烷中能與三氯化銻作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色?？梢源诉M(jìn)行鑒別或用比色法測定含量。鑒別試驗(yàn)三氯化銻反應(yīng)（Carr-Price反應(yīng)）原理：維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇三氯甲烷溶液中即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。注意事項(xiàng)：反應(yīng)需在無水、無醇條件下進(jìn)行，因?yàn)樗梢詴r(shí)三氯化銻水解成氯化氧銻，而乙醇可以和碳正離子作用使其正電荷消失。紫外光譜法薄層色譜法含量測定紫外-可見分光光度法（三點(diǎn)校正法）三點(diǎn)校正法的建立：維生素A原料中?；煊衅渌s質(zhì)。為了得到準(zhǔn)確的測定結(jié)構(gòu)，消除維生素A物質(zhì)的無關(guān)吸收所引起的誤差，故采用“三點(diǎn)校正法”測定，即在3個(gè)波長處測定吸光度后，在規(guī)定條件下以校正公式進(jìn)行校正，在進(jìn)行計(jì)算，這樣可消除無關(guān)吸收的干擾，求得維生素A的真實(shí)含量。測定原理：（1）雜質(zhì)的無關(guān)吸收在310-340nm波長范圍內(nèi)幾乎呈一條直線，且隨波長的增大吸光度下降。物質(zhì)對光的吸收呈加和性的原理。即在某一樣品的吸收曲線上，各波長處的吸光度是維生素A與雜質(zhì)的吸光度的代數(shù)和，因而吸收曲線也是兩者吸收的疊加。波長選擇：三點(diǎn)波長的選擇原則為一點(diǎn)選擇在維生素A的最大吸收波長處（即λ1），其他兩點(diǎn)在λ1的兩側(cè)各選一點(diǎn)（λ2和λ3）。等波長差法：使λ3－λ1=λ1－λ2。ChP2015規(guī)定，測定維生素A醋酸酯時(shí)，λ1=328nm，λ2=316nm，λ3=340nm，△λ=12nm等吸收比法：使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1。ChP2015規(guī)定，測定維生素A醇時(shí)，λ1=325nm，λ2=310nm，λ3=334nm。雜質(zhì)的吸收：對維生素A測定有影響的雜質(zhì)主要包括以下幾種。維生素A2（即3-去氫維生素A）和維生素A3（即去水維生素）：維生素A2在345-350你們波長范圍內(nèi)有吸收。維生素A的氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸。維生素A在光照條件下產(chǎn)生逆-阿反應(yīng)二聚，生成無活性的聚合物：鯨醇。維生素A的異構(gòu)體及其他。測定方法合成的維生素A和天然魚肝油中的維生素A均為酯式維生素A。（1）直接測定法：適用于純度高的維生素A醋酸酯的測定1）計(jì)算①C為混合樣品的濃度式中的A值有兩種可能，一是直接采用328nm波長下測得的吸光度，即A328；二是采用吸光度校正公式計(jì)算出的校正值，即A328（校正），校正式：A328（校正）=3.52（2A328－A316－A340）②求效價(jià)（IU/g）：效價(jià)系指每1g供試品中所含的維生素A的國際單位數(shù)（IU/g），即IU/g=E1%1cm（328nm）×1900③求維生素A醋酸酯占標(biāo)示量的百分含量。標(biāo)示量%=A×D×1900×`w/（W×100×l×標(biāo)示量）×100%A：直接測得的A328或校正后的A328（校正）；D：供試品的稀釋倍數(shù)；1900為維生素A醋酸酯在環(huán)己烷溶液中直接測定的換算因子；`w為軟膠囊的平均內(nèi)容物重量；W為稱取的內(nèi)容物重量（即供試品取用量）；l為比色池厚度（cm）；標(biāo)示量為處方中規(guī)定的每粒軟膠囊中含有的維生素A醋酸酯的國際單位數(shù)。2）換算因子：定義為單位E1%1cm數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)。即換算因子=效價(jià)（IU/g）/E1%1cm（λmax）維生素A的含量用生物效價(jià)即國際單位（IU/g）來表示。維生素A的國際單位規(guī)定如下：1IU=0.344μg全反式維生素A醋酸酯1IU=0.300μg全反式維生素A醇因此，每1g全反式維生素A醋酸酯相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為2907000IU每1g全反式維生素A醇相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為3330000IU維生素A的E1%1cm值：維生素A醋酸酯：1530；維生素A醇：1820故全反式維生素A醋酸酯換算因子=1900；全反式維生素A醇換算因子=1830A值的選擇①計(jì)算吸光度比值（即Ai/A328）：分別與ChP2015規(guī)定的吸光度比值相減，即得到5個(gè)差值，判斷每個(gè)差值是否超過規(guī)定的±0.02②判斷法如果最大吸收波長在326-329nm，分別計(jì)算5個(gè)波長下吸光度比值的差值，均不超過表中規(guī)定的±0.02時(shí)，則不用校正公式計(jì)算吸光度，而是直接用328nm波長處測得的吸光度A328求E1%1cm。如果最大吸收波長在326-329nm，分別計(jì)算5個(gè)波長下吸光度比值的差值，如超過表中規(guī)定的±0.02時(shí)，這時(shí)應(yīng)按以下方法判斷：若（A328（校正）－A328）/A328×100%所得的數(shù)值相差不超過±3.0%，則不用校正，仍以未校正的吸光度計(jì)算含量，即用A328求E1%1cm。若（A328（校正）－A328）/A328×100%所得的數(shù)值相差在-15%～-3%，則以校正吸光度計(jì)算含量，即用A328（校正）求E1%1cm；若（A328（校正）－A328）/A328×100%所得的數(shù)值<-15%或>+3%，則不能用本法測定，應(yīng)采用皂化法測定含量。如果最大吸收波長不在326-329nm，應(yīng)采用皂化法測定含量。（2）皂化法：適用于維生素A醇的測定高效液相色譜法正向HPLC；硅膠為填充劑。三氯化銻法原理：維生素A與三氯化銻的無水三氯甲烷溶液中作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色，在618-620nm波長處有最大吸收，符合Beer定律。注意事項(xiàng)：（1）本法產(chǎn)生的藍(lán)色不穩(wěn)定，要求操作迅速，一般規(guī)定加入三氯化銻后應(yīng)在5-10S內(nèi)滴定完。（2）反應(yīng)介質(zhì)需無水。（3）與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差≤1℃（4）此并非維生素A的專屬性反應(yīng)。（5）三氯化銻試劑有強(qiáng)腐蝕性第二節(jié)維生素B1的分析本品具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消化的正常功能，主要用于治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎和胃腸道疾病。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)維生素B1（亦稱鹽酸硫胺）是氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基鏈接而成的季銨類化合物，噻唑環(huán)上的季銨及嘧啶環(huán)上的氨基為兩個(gè)堿性基團(tuán)，可與酸成鹽。結(jié)構(gòu)式：性質(zhì)溶解性：在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。水溶液呈酸性。硫色素反應(yīng)：噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，再與嘧啶環(huán)上的氨基結(jié)合，經(jīng)鐵氰化鉀等氧化劑氧化成具有熒光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈藍(lán)色熒光。紫外吸收特性與生物堿沉淀試劑反應(yīng)：分子中的嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)可與某些生物堿沉淀試劑（如碘化汞鉀、三硝基酚、碘溶液和硅鎢酸等）反應(yīng)生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測定。氯化物的特性：維生素B1為鹽酸鹽，其水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)鑒別試驗(yàn)硫色素?zé)晒夥磻?yīng)（維生素B1的專屬性鑒別反應(yīng)）維生素B1在堿性溶液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，硫色素溶于正丁醇（或異丁醇）中顯藍(lán)色熒光。沉淀反應(yīng)維生素B1結(jié)構(gòu)中具有嘧啶環(huán)和氨基，顯生物堿的特征氯化物反應(yīng)水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)硫元素反應(yīng)維生素B1與NaOH共熱，分解產(chǎn)生硫化鈉，可與硝酸鉛反應(yīng)生成黑色沉淀，可供鑒別。紅外分光光度法要求與對照圖譜一致含量測定非水溶液滴定法原理：維生素B1分子中含有2個(gè)堿性的已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán)，在非水溶液中均可與高氯酸作用，以電位滴定法指示終點(diǎn)。具有2個(gè)堿性基團(tuán)，故維生素B1與高氯酸的摩爾比為1:2紫外分光光度法硫色素?zé)晒夥ňS生素B1在堿性溶液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，用異丁醇提取后，在紫外燈（激發(fā)波長λex365nm）照射下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光（發(fā)射波長λex435nm），通過與對照品的熒光強(qiáng)度比較，即可測得供試品的含量。特點(diǎn)：（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產(chǎn)物不干擾，適用于體液分析第三節(jié)維生素C的分析結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)維生素C的分子結(jié)構(gòu)中具有烯二醇結(jié)構(gòu)，具有內(nèi)酯環(huán)，且有兩個(gè)手性碳原子（C4、C5），不僅是維生素C的性質(zhì)即為活潑，且具有旋光性。結(jié)構(gòu)式：性質(zhì)溶解性：在水中易溶，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶酸性：分子結(jié)構(gòu)中有烯二醇基，所以水溶液呈酸性，尤其是C3位的—OH由于受共軛效應(yīng)的影響，酸性較強(qiáng)；C2位的—OH由于行程分子內(nèi)氫鍵，酸性極弱。故維生素C一般表現(xiàn)為一元酸，可與碳酸鈉作用生成鈉鹽。旋光性：有兩個(gè)手性碳原子，故有四個(gè)對映異構(gòu)體。其中L（+）-維生素C的活性最強(qiáng)。還原性：烯二醇基具有極強(qiáng)的還原性，易被氧化為二酮基而生成去氫維生素C，加氫又可還原為維生素C。在堿性溶液或強(qiáng)酸性溶液中能進(jìn)一步水解為二酮古洛糖酸而失去活性，此反應(yīng)為不可逆反應(yīng)，水解性：和碳酸鈉作用可生成單鈉鹽，不致發(fā)生水解。在強(qiáng)堿中，內(nèi)酯環(huán)水解生成銅酸鹽。糖類的性質(zhì)：維生素C的化學(xué)結(jié)構(gòu)與糖類類似，具有糖類的性質(zhì)與反應(yīng)。紫外吸收特性：具有共軛雙鍵。在中性或堿性條件下，紅移至265nm處。鑒別試驗(yàn)與硝酸銀反應(yīng)（銀鏡反應(yīng)）原理：分子中有烯二醇基，具有強(qiáng)的還原性，可被硝酸銀氧化為去氫維生素C，同時(shí)產(chǎn)生黑色的金屬銀沉淀。與二氯靛酚鈉反應(yīng)（氧化還原反應(yīng)）2,6-二氯靛酚為一染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中為玫瑰紅色、在堿性介質(zhì)中為藍(lán)色，與維生素C作用后生成還原型的無色的酚亞胺與其他抗氧劑反應(yīng)維生素C（抗壞血酸）還可被亞甲藍(lán)、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅試液、磷鉬酸等氧化劑氧化為去氫維生素C，同時(shí)維生素C可使其試劑褪色，產(chǎn)生沉淀或呈現(xiàn)顏色。薄層色譜法糖類的反應(yīng)（Molisch反應(yīng)）維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧生成戊糖，再失水，轉(zhuǎn)化為糠醛，加入吡咯，加熱至50℃產(chǎn)生藍(lán)色。（六）紫外光譜法雜質(zhì)檢查VitC、VitC片、VitC注射液：溶液的澄清度與顏色檢查VitC：鐵、銅離子的檢查VitC、VitC注射液：草酸的檢查（草酸與鈣等金屬離子作用易形成沉淀）含量測定碘量法原理：維生素C在醋酸酸性條件下可被碘定量氧化，根據(jù)消耗的碘滴定液的體積，即可計(jì)算維生素C的含量。注意事項(xiàng)：（1）酸性環(huán)境：稀醋酸減慢被氧化速度新沸冷H2O：趕走水中O2立即滴定：減少O2的干擾淀粉指示液在滴定開始時(shí)就加入二氯靛酚滴定法原理：2,6-二氯靛酚為一染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中為玫瑰紅色、在堿性介質(zhì)中為藍(lán)色，與維生素C作用后生成還原型的無色的酚亞胺。維生素C在酸性溶液中可用二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)液滴定至溶液顯玫瑰紅色為終點(diǎn)，無需另加指示劑。（專屬性比碘量法高）注意事項(xiàng)：（1）并非維生素C的專一反應(yīng)。需快速滴定，減少其他干擾物質(zhì)的影響。剩余比色滴定：二氯靛酚鈉滴定液不穩(wěn)定，需臨用新配并標(biāo)定。（三）高效液相色譜法第四節(jié)維生素D的分析維生素D是一類抗佝僂病維生素的總稱。目前已知的維生素D類物質(zhì)至少有十種之多，它們都是甾醇的衍生物。結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)維生素D2，又名骨化醇或麥角骨化醇；維生素D3，又名膽骨化醇。性質(zhì)性狀：均為無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭，無味；遇光或空氣均易變質(zhì)。溶解性：維生素D2－在氯仿中極易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶；維生素D3－在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中極易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。不穩(wěn)定性：維生素D2、D3因含有多個(gè)烯鍵，所以極不穩(wěn)定，遇光或空氣及其他氧化劑均發(fā)生氧化而變質(zhì)，使效價(jià)降低，毒性增強(qiáng)。本品對酸也不穩(wěn)定。旋光性：維生素D2具有6個(gè)手性碳原子；維生素D3有5個(gè)手性碳原子顯色反應(yīng)：本品的氯仿溶液，加醋酐與硫酸，初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙?，最后變?yōu)榫G色。本反應(yīng)為甾類化合物的共有反應(yīng)。紫外吸收特性鑒別試驗(yàn)顯色反應(yīng)與醋酐-濃硫酸反應(yīng)取維生素D2或D3約0.5mg，加氯仿5ml溶解后，加醋酐0.3ml與硫酸0.1ml，振搖，維生素D2初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙?，最后成綠色。維生素D3初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙⑺{(lán)綠色，最后變?yōu)榫G色。與三氯化銻反應(yīng)取本品適量（約1000IU），加1,2-二氯乙烷1ml溶解，加三氯