第五章 食用菌菌種生產(chǎn)

第五章食用菌菌種生產(chǎn)

第一節(jié)菌種概述

第二節(jié)菌種生產(chǎn)設(shè)備

第三節(jié)菌種培養(yǎng)基

第四節(jié)接種

第五節(jié)菌種培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定

第六節(jié)菌種保藏與復(fù)壯第一節(jié)菌種概述一、菌種概念二、菌種類型三、菌種生產(chǎn)程序一、菌種概念菌種擔(dān)孢子或子囊孢子野生擴(kuò)大繁殖后的純次生菌絲體栽培來歷野生菌馴化

原菌株改良

生物技術(shù)創(chuàng)新優(yōu)良

菌株擴(kuò)大

繁殖用于

生產(chǎn)實行純培養(yǎng)

不含任何雜菌基本

要求二、菌種類型一級菌種一級菌種一級菌種級別按保藏用種實驗用種

生產(chǎn)用種目的狀態(tài)：固體菌種、液體菌種（一）目的不同的菌種1、保藏用種：指用于中、長期保持菌種的生活力和原有性狀的菌種。2、實驗用種：供實驗室進(jìn)行科學(xué)試驗、研究的菌種。3、生產(chǎn)用種（商業(yè)菌種）：供食用菌大面積栽培使用的菌種。（二）級別不同的菌種1、一級種（母種）從大自然中用分離法首次得到的

純次生菌絲體概念概況培養(yǎng)環(huán)境試管、斜面培養(yǎng)基用途再生母種擴(kuò)大原種

保藏用種菌絲弱而少、不可直接栽培特點2、二級種（原種）將母種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲較多而壯、適應(yīng)性較強(qiáng)特點用途擴(kuò)大栽培種或直接出菇大口瓶、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基3、三級種（栽培種）將原種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲多而壯、適應(yīng)性強(qiáng)特點用途栽培生產(chǎn)菌種袋、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基不可再擴(kuò)食用菌生產(chǎn)總過程母種栽培種栽培原種子實體（三）狀態(tài)不同的菌種

用固體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種1、固體

菌種概念特點設(shè)備、工藝簡單

菌齡長而不一

發(fā)酵率較低用液體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種2、液體

菌種概念特點設(shè)備、工藝較復(fù)雜

菌齡短而一致

發(fā)酵率高

易老化和自溶生長勢的區(qū)別液體菌種固體菌種三、菌種生產(chǎn)程序四大步驟制培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)接種制種程序第二節(jié)主要生產(chǎn)設(shè)備一、制培養(yǎng)基設(shè)備二、滅菌設(shè)備三、接種設(shè)備四、培養(yǎng)設(shè)備五、保藏設(shè)備六、菌種廠布局一、制培養(yǎng)基設(shè)備

（一）原料處理設(shè)備切片粉碎兩用機(jī)切片粉碎兩用機(jī)鍘草機(jī)粉碎機(jī)拌料機(jī)裝袋機(jī)（二）培養(yǎng)基分裝設(shè)備裝瓶機(jī)挖瓶機(jī)菌種袋頸圈菌種瓶二、滅菌設(shè)備高

壓

鍋外鍋：裝水

內(nèi)鍋：裝物（有壁管）鍋蓋安全閥

排氣閥

壓力表常壓滅菌常壓密閉性好要

求1.

接

種

箱用

法

清潔、放物品→

消毒噴霧

熏蒸

紫外燈特

點簡易、利移動

對人體低害

效果好、工效低

三、接種設(shè)備

（一）接種環(huán)境觀察窗紫外燈操作孔接種箱

2.接種室緩沖間：2~3m2

接種間：5~6m2面積7~9m2高2.2~2.5m要求6個面平滑

兩門錯開、平拉式

頂裝紫外燈清潔→物品放緩沖間→消毒

→移物至接種間→噴消毒液

→10min后接種→消毒液清潔使用使一定工作區(qū)達(dá)到相對無菌、無塵狀態(tài)的電器3.超凈工作臺雙人單人要求:前端為導(dǎo)熱性好的金屬材料槍匙鉤鏟鑷耙針環(huán)接種4.接種工具固

體

菌

種

接

種

槍液體菌種接種槍四、菌種培養(yǎng)沒備1.培養(yǎng)箱

培養(yǎng)少量菌種的恒溫電器（20~40℃）2.培養(yǎng)室要求光線暗

密閉好、通風(fēng)性強(qiáng)

能升溫、降溫有培養(yǎng)架貯藏室遠(yuǎn)離污染源低溫（4~8℃）干燥、通風(fēng)、遮光

用前要嚴(yán)格消毒殺蟲地面常撒石灰粉保藏原種、栽培種：五、菌種保藏設(shè)備

保藏母種：冰箱（4℃）左右六、液體發(fā)酵設(shè)備七、菌種廠的布局

根據(jù)菌種生產(chǎn)流程合理設(shè)置倉庫配料室滅菌室接種室培養(yǎng)室辦公室栽培棚門口曬料場第三節(jié)菌種培養(yǎng)基一、概述

（一）概念及要求

（二）培養(yǎng)基的類型二、各級菌種的培養(yǎng)基

（一）母種培養(yǎng)基

（二)原種、栽培種培養(yǎng)基三、培養(yǎng)基的滅菌一、培養(yǎng)基的概述（一）概念及要求概念人工配制的適于菌種生長的營養(yǎng)基質(zhì)要

求營養(yǎng)種類、比例、水分、pH適宜；

保持無菌狀態(tài)。（二）培養(yǎng)基的類型

l、按營養(yǎng)物質(zhì)種類分類①天然培養(yǎng)基常用的生物材料有馬鈴薯、胡蘿卜、蠶蛹粉、豆芽汁、花生餅粉、玉米粉、酵母等。②合成培養(yǎng)基是指用已知成分和數(shù)量的化合物配制而成的培養(yǎng)基。③半合成培養(yǎng)基利用天然物質(zhì)作為碳、氮源及維生素的來源另加一些無機(jī)鹽類配制而成。2、按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類①液體培養(yǎng)基不加瓊脂，多用于生理生化方面研究,培養(yǎng)液體菌種等。②固體培養(yǎng)基凝固劑的量,瓊脂冬季為1.5%--2.0%,夏季2.2%--2.3%。③半固體培養(yǎng)基含有較少量瓊脂(0.2%--0.5%)的培養(yǎng)基,使培養(yǎng)基未達(dá)到固態(tài)而呈粘稠狀態(tài)。粉狀條狀屬天然植物多糖

融點96℃以上

凝點40℃以下

冷水中不溶

透明度好、粘著力強(qiáng)

不被微生物分解利用特性二、各級菌種的培養(yǎng)基（一）母種培養(yǎng)基1、通用配方PDA馬鈴薯200g、葡萄糖20g

瓊脂15~20g、水1000m1①營養(yǎng)液制作a準(zhǔn)備工作2、制作方法

b稱量、材料預(yù)處理按配方準(zhǔn)確稱量各營養(yǎng)物質(zhì)。將馬鈴薯去皮、挖掉芽眼后稱量200g，切成1cm見方的小塊。瓊脂剪碎后用水浸泡。c熬煮將切好的馬鈴薯塊加適量水后放入電飯鍋中，煮至酥而不爛。d過濾、加可溶藥物用雙層沙布過濾，取濾汁，放在電飯鍋中加入糖。e熬瓊脂、定容在沸騰狀態(tài)下加入瓊脂，直到瓊脂完全溶化為止，定容至1000ml。②營養(yǎng)液分裝a用注射器分裝b分裝標(biāo)準(zhǔn):分裝量為試管長度的1/4—1/5。注意培養(yǎng)基不能沾污試管口。c塞棉塞棉塞松緊適度，1/3在管外，2/3在管內(nèi)。d扎捆7-10支試管捆在一起，棉塞上包好防水紙，直立放入高壓滅菌鍋中。

③滅菌處理在1.0—1.5kg/cm2壓力下維持20--30min。④擺斜面滅菌結(jié)束后鍋蓋開1/5的小縫，用余熱烘干報紙和棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的1/2。

（二）原種、栽培種培養(yǎng)基制作1、常見原種配方①木屑培養(yǎng)基配方細(xì)木屑80%，麩皮12%，玉米面1%，黃豆粉2%，過磷酸鈣1.5%，紅糖0.5%，尿素0.4%，硫酸鎂0.1%，石灰1%，石膏2%，料：水=1：1.0-1.2。此配方適合香菇、黑木耳、平菇原種生長，菌絲粗壯潔白。②玉米芯培養(yǎng)基配方玉米芯80%，麩皮14%，糖0.5%，過磷酸鈣1%，石灰2%，尿素0.5%，玉米面2%，料：水=1：1.4-1.5。此配方適合于培養(yǎng)平菇原種，菌絲生長速度快，且菌絲粗狀。③玉米芯、木屑混合培養(yǎng)基配方玉米芯42%，木屑20%，豆秸20%，麩皮10%，過磷酸鈣1.5%，石灰2%，石膏1%，糖0.5%，玉米面3%，料：水1=1：1.4-1.5。此配方適合于培養(yǎng)平菇原種。生長健壯，也可培養(yǎng)金針菇，滑子蘑原種。④軟質(zhì)木屑配方椴木屑75%（木線廠下腳料，顆粒較大），麩皮15%，玉米面5%，石膏1.5%，石灰1%，糖0.5%，過磷酸鈣1.5%，尿素0.5%，料，水=1：1.2左右。適用于金針菇，滑子蘑等分解基質(zhì)能力較弱的品種使用。⑤麥粒、木屑培養(yǎng)基配方新鮮、優(yōu)質(zhì)小麥80%，闊葉樹木屑20%，木屑：水=1：1左右，拌木屑用煮小麥水，或在此基礎(chǔ)上，加入總量0.5%的過磷酸鈣，0.5%的蔗糖,1%的石灰，在麥粒煮好后連同木屑拌入。⑥玉米粒培養(yǎng)基配方優(yōu)質(zhì)新鮮玉米100%，或后期加入0.5%過磷酸鈣，0.5%的糖,1%的石灰。玉米粒培養(yǎng)基制作的原種，具備麥粒原種的優(yōu)點，后勁更足，接種擴(kuò)繁量更大。2、原種培養(yǎng)基的制作方法谷粒培養(yǎng)基制作①按配方稱量各營養(yǎng)物質(zhì)配方一：優(yōu)質(zhì)新鮮小麥65%，木屑15%，棉籽殼15%，麩皮5%，石膏1%，過磷酸鈣0.5%，糖0.5%，尿素0.5%②谷粒浸泡吸水冬季浸泡24-48小時，夏季加1%石灰（以防變酸）浸泡24小時，隔夜換水。③煮沸、瀝干撈出泡好后，漂洗干凈（去雜），煮至飽脹無白心，切忌煮開花，瀝干水分后撈出。④拌料用煮小麥水拌木屑、棉籽殼、麩皮，最后再一起與麥粒拌勻。⑤裝瓶a.裝料量應(yīng)為1/3或1/2罐頭瓶，便于培養(yǎng)時搖動基料促進(jìn)絲均勻生長。b.擦凈并封瓶口封口塑料袋采用規(guī)格為13cm×13cm×0.004cm高壓聚丙稀袋，二層，里層在中央剪一3cm寬菱形口。至少二個皮套。⑥裝鍋滅菌高壓滅菌于126℃左右維持2小時；常壓滅菌于100℃維持10-12小時，夏季時間可酌情延長。⑦出鍋、冷卻冷卻至30℃以下待接種。木屑、玉米芯料培養(yǎng)基制作方法①按配方稱料。②拌料：干混（將石膏和不溶于水的主料和輔料混勻）；濕混（將石灰和溶于水的輔料制成母液，加入所需水量稀釋后拌料）。

③裝瓶：悶1-2個小時（夏季時間不宜過長）待料充分吸足水后裝瓶，裝料至瓶肩，上緊下松，壓平料面，擦凈瓶口，打1.5cm粗接種孔至瓶底封口。④滅菌：同谷料培養(yǎng)基制作⑤出鍋、冷卻：同谷粒培養(yǎng)基制作(三)栽培種制作制作方法基本同于原種制作。需要注意的是栽培種培養(yǎng)基制作一般選用豐富的培養(yǎng)料，而且含水量要較原種加大，更利于菌種快速吃料。容器可以用500ml罐頭瓶，也可以用（17-18）X（30-35）X（0.04-0.05）cm低壓聚乙烯袋。栽培種的裝袋三、培養(yǎng)基的滅菌（一）母種培養(yǎng)基的滅菌

無菌檢驗

約30℃條件下→空白培養(yǎng)2~3天滅菌與擺斜面擺斜面1kg/cm2(103kpa、121℃）20~30min母基滅菌與擺斜面（二）原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌高壓滅菌1.5kg/cm2（152kpa、128.1℃）滅菌1~2h

常壓滅菌100℃滅菌10h左右→再悶12h要求攻頭、控中、保尾四、液體菌種制作技術(shù)（一）液體菌種制作的原理食用菌液體菌種制作是在發(fā)酵罐中，采用液體培養(yǎng)基通入無菌空氣并加以攪拌，增加培養(yǎng)基中溶氧含量，提供食用菌菌體呼吸代謝所需要的氧氣，并控制適宜的外界條件，獲得大量的菌絲體或代謝產(chǎn)物。

（二）液體菌種制作的特點1.原料來源廣泛2.菌絲體生長快速3.生產(chǎn)周期短食用菌深層發(fā)酵一般僅需2-7d就可獲得大量的菌絲體，而固體培養(yǎng)則需30-60d。4.工廠化生產(chǎn)、無季節(jié)性食用菌深層發(fā)酵是在發(fā)酵罐內(nèi)、控制最佳條件來培菌體的，不受季節(jié)性限制。（三）液體菌種制作的用途1、生產(chǎn)液體菌種食用菌經(jīng)深層發(fā)酵2-7d的幼嫩菌絲體，可以用來作為食用菌栽培用的原種和栽培種。2、制備藥物或提取生化制品許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作為提取藥物成分或生化制品的材料。3、制作食品或畜禽飼料

（四）、液體菌種制作的主要設(shè)備1.搖床往復(fù)式播床：振蕩方式為來回振蕩旋轉(zhuǎn)式搖床：振蕩方式為旋轉(zhuǎn)2.種子罐和發(fā)酵罐許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作為提取藥物成分或生化制品的材料。3.空氣凈化設(shè)備4.培養(yǎng)基連續(xù)滅菌設(shè)備

包括配料罐、連消塔、維持塔、噴淋冷卻器等。5．供氣設(shè)備

主要是蒸氣鍋爐及附屬設(shè)備第四節(jié)菌種的接種一、無菌操作二、母種的接種

(一）分離法

1.組織分離

2.孢子分離

（二）轉(zhuǎn)管法三、原種、栽培種的接種菌種分離將有價值的子實體的局部組織、孢子或基內(nèi)菌絲移接到斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操作稱為菌種分離。菌種分離可以分為孢子分離、組織分離和基內(nèi)菌絲分離三種。概念：菌種移至新培養(yǎng)基上的過程

關(guān)鍵：無菌操作接種在嚴(yán)格消毒滅菌條件下進(jìn)行的操作概念一、無菌操作接種環(huán)境消毒滅菌酒精棉球消毒雙手開啟的管口、瓶口靠近燈焰拔出的棉塞勿觸及任何地方動作快，接種時間勿太長要點必備母種轉(zhuǎn)管無菌操作程序：

1.將接種用品及原始母種放入接種箱內(nèi)。2.用菇保1號、氣霧消毒盒（2g/m3）或甲醛進(jìn)行熏蒸，時間要在30分鐘以上。3.手、臺面、接種工具、試管用酒精棉球擦試消毒。4.點燃酒精燈，火焰灼燒接種鎬至燒紅后冷卻，凡能伸進(jìn)試管的桿部均過火滅菌。5．左手大拇指和其他四指并攏握住菌種管和待接試管，斜面向上，并保持水平。

6．右手小指、無名指及手掌拔掉棉塞，用火焰灼燒試管口并不斷攪動。7．先棄去前端1cm處，然后用接種鎬快速移取黃豆粒大小的菌種入待接試管斜面培養(yǎng)基中央。

8．灼燒試管口，并將棉塞在火焰上迅速過一下然后塞上。9．用接種鎬挑持住母種管，另一只手換待接管，重復(fù)上述操作。10．收拾臺面。11.貼標(biāo)簽特點簡便，易成功保持原菌種性狀重復(fù)多易退化不適于耳類1.組織分離：采用食用菌子實體或菌核、菌索的任何一部分組織培養(yǎng)成純菌絲體的方法。組織PDA次生菌絲培養(yǎng)（一）分離法根據(jù)分離材料的不同，組織分離法可分為子實體分離法、菌核分離法以及菌索分離法。（1）子實體分離法采用子實體的任何部分如菌蓋、菌柄、菌褶、菌肉進(jìn)行組織培養(yǎng)，從而形成純菌絲體的方法。a傘菌組織分離法①種菇的選擇：頭潮菇、外觀典型、大小適中、菌肉肥厚、顏色正常、尚未散孢，無病蟲害、長至七八分熟的優(yōu)質(zhì)單朵菇做種菇。②種菇消毒：切取菇體基部，用75%的酒精溶液浸泡0.5-1min，再用無菌水沖洗2-3次。③切塊接種：縱剖（撕）菇體，尖頭鑷取柄蓋交界處綠豆粒大的組織放入新斜面中部④培養(yǎng)純化：適溫下培養(yǎng)2-4天，可看到組織塊上長出白色絨毛狀菌絲體，移接到新的培養(yǎng)基上再經(jīng)過5-7天適溫培養(yǎng)，長滿試管后即為純菌絲體。⑤出菇試驗：將分離得到的試管種擴(kuò)大繁殖，并移接培養(yǎng)成原種、栽培種,做出菇試驗,選出出菇好、產(chǎn)量高、質(zhì)量好的，即可作栽培生產(chǎn)用種。b膠質(zhì)菌類組織分離法：①一種方法是將耳片反復(fù)用無菌水沖洗，切成0.5cm，小塊移入培養(yǎng)基，于28℃下進(jìn)行培養(yǎng)；②另一種方法是剖取尚未展開耳片的耳基團(tuán)內(nèi)的組織塊進(jìn)行分離。（2）菌核分離法：一些藥用菌如茯苓、豬苓、雷丸都有菌核。進(jìn)行組織分離時，采用含漿汁多的菌核。在無菌的條件之下，將菌核剖開，于菌核的附近，剖取蠶豆大小的菌核組織塊移入斜面培養(yǎng)基上，在26-30℃下培養(yǎng)。（3）菌索分離法：從菌索中分離培養(yǎng)得到純菌絲體的方法。.菌索分離2、木腐菌基內(nèi)菌絲分離①把分離用菇木的部分或全部的表面在火焰上輕燎。②取小刀在火焰上滅菌，對準(zhǔn)菇木上菇柄（耳基）的著生位置切成兩半。③確定欲分離菌絲在菇木上的位置，再次用火焰滅菌過的小刀，在欲分離部位刻劃數(shù)個井字。④用火焰滅過菌的接種鉤，鉤取一小塊木屑（綠豆大小或更?。┮平佑谛泵媾囵B(yǎng)基。⑤接種后將試管置于25—27℃下培養(yǎng)，促使其恢復(fù)。近風(fēng)干的種木內(nèi)菌絲常處于休眠狀態(tài)。接種后，種木吸濕，菌絲逐漸恢復(fù)生長。如果短期時間內(nèi)分離物未曾發(fā)，則可保留至4周后，再斷定分離是否成功。3.孢子分離(有性繁殖）

孢子分離主要是指利用子實體上產(chǎn)生的成熟有性孢子分離培養(yǎng)獲得純菌種的方法。分為多孢分離與單孢分離兩種。孢子

特點菌齡小

生命力強(qiáng)

變異率高孢子

分離法難度較大單孢分離多孢分離較簡易多孢分離概念使許多孢子在同一培養(yǎng)基上，

萌發(fā)后自由交配成次生菌絲的方法步驟種菇消毒采收孢子接種孢子整菇插種法

鉤懸法孢子印法單孢分離

的菌落1.種菇

消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦0.25%新潔爾滅浸2~3min

無菌紗布吸干表面水分無2.采收孢子整菇

插種法種菇插在孢子收集器中

使孢子散落于培養(yǎng)皿內(nèi)的方法用

前

滅

菌25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料

培養(yǎng)皿蓋嚴(yán)鉤懸法生產(chǎn)上采集木耳、銀耳的孢子常采用此法。25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料孢子印法

取成熟的傘菌或膠質(zhì)的子實體，經(jīng)表面消毒，切去菌柄，菌褶向下，放置于滅過菌的有色紙上（紅、黑、藍(lán)、白），用通氣鐘罩上，靜置一天（20-24℃），孢子落在紙上，形成孢子印，再從中挑取少量孢子轉(zhuǎn)入試管培養(yǎng)基上培養(yǎng)?？罩墟咦硬蹲椒?傘菌的孢子大量彈射時，子實體周圍可以看到“孢子云”，可以在其漂去的上方倒放瓊脂平板，使孢子附在其上，再蓋上蓋，用塑料膠水紙封好培養(yǎng)，整個過程要快。褶上涂抹法:取成熟傘菌，切去菌柄基部，帶入接種箱內(nèi)，先表面消毒，用接種針插入兩片菌褶之間，輕輕抹過表面，然后用劃線法涂抹于試管培養(yǎng)基上。帖褶法:取一小塊成熟的菌褶或菌蓋，用熔化的瓊脂或膠水、糨糊之類，帖附在試管斜面的正上方試管壁上或培養(yǎng)皿皿蓋上，經(jīng)6-12小時，待孢子落下后，立即把試管或培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)到另一消毒過的空白試管或培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)。單孢分離:從收集到的多孢子中將單個孢子分離出來，分別培養(yǎng)，作為育種的材料。1.涂抹法：用已沾濕無菌水的接種針，從孢子印上沾取孢子，在無菌條件下，插入盛用無菌水的小試管內(nèi)振蕩稀釋成適宜濃度的孢子懸濁液。隨后無菌條件下劃線培養(yǎng)。2.梯度稀釋點樣法:用同樣的方法制成濃度較高的孢子懸濁液。同時取滅菌過的空試管數(shù)根，排序編號。按無菌操作規(guī)程獲得一系列的不同濃度梯度的孢子懸浮液。再用毛細(xì)管在各個梯度孢子液中取樣培養(yǎng)，單孢萌發(fā)后菌絲便長入小培養(yǎng)基塊中，再將其轉(zhuǎn)移到試管斜面上培養(yǎng)獲得單孢培養(yǎng)物。接種孢子用接種環(huán)

蘸孢子液或孢子粉

涂布于平板上（二）轉(zhuǎn)管法注意種塊勿太大原老種塊勿再接入傳代次數(shù)勿太多將母種移入新的過程概念過程接種環(huán)取綠豆粒大母種

移入新斜面中部轉(zhuǎn)管三、原種、栽培種的接種接原種用接種耙取蠶豆大母種

放于瓶中料面上接栽培種用接種匙（鑷、鏟）取棗大原種放于袋的兩端或瓶中料面上注意表面老菌絲及

老種塊勿接入栽培種接種第五節(jié)菌種培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定一、菌種培養(yǎng)（一）培養(yǎng)條件

（二）技術(shù)環(huán)節(jié)二、菌種質(zhì)量鑒定（一）母種質(zhì)量鑒定

（二）原種和栽培種質(zhì)量鑒定(一)培養(yǎng)條件場所清潔空氣清新光線暗空氣濕度

60%~70%溫度約25℃一、菌種培養(yǎng)（二）技術(shù)環(huán)節(jié)1.母種

培養(yǎng)及時挑揀污染管分離的母種要純化→出菇試驗→使用控制菌齡（即將長滿斜面）培養(yǎng)時間5~10天母種培養(yǎng)返回本節(jié)

2.原種

栽培種

的培養(yǎng)培養(yǎng)時間：約30天勿堆放過擠,不宜多次翻倒及時挑揀污染瓶（袋）栽培種的菌袋缺氧時可刺孔增氧控制菌齡（菌絲長滿后7~10天使用）刺孔點

二、菌種質(zhì)量的鑒定形態(tài)特征、生理特性、

栽培性狀、經(jīng)濟(jì)效益等鑒定

項目

菌種鑒定主要包括兩個方面的內(nèi)容：一方面要鑒定未知的菌種，從而避免菌種混亂帶來得損失；另一方面鑒定已知菌種質(zhì)量的好壞，從而選出優(yōu)良品種，奪得食用菌的豐產(chǎn)。、

一般從菌種的純度、長勢、顏色、菌齡、均勻度和出菇快慢等6個方面進(jìn)行鑒定。（一）母種質(zhì)量的鑒定一般分離培養(yǎng)以及引進(jìn)的母種，都應(yīng)嚴(yán)格控制轉(zhuǎn)管的次數(shù)，最多不要超過5次。同時要考慮其菌齡，隨著培養(yǎng)時間的延長，菌齡越來越大，生活力隨之降低，菌種老化。母種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)菌絲白、整齊、粗壯、有彈性、萌發(fā)快等1.外觀好差絲干燥、收縮、自溶

產(chǎn)生紅褐色液體等退化母種好母種2.鑒定耐干濕性試驗接入母種→正常生長原種

培養(yǎng)基

含水量＜50%＞70%耐高溫性試驗仍正常生長適溫培養(yǎng)7天

30~35℃鍛煉24h

再適溫培養(yǎng)出菇試驗栽培出菇快

產(chǎn)量高

品質(zhì)好

抗逆性強(qiáng)外觀肉眼鑒定

肉眼觀察包裝是否合乎要求，棉塞有無松動，試管有無破損，有無病蟲害等。外表菌絲潔白、粗壯、富有彈性、則生命力強(qiáng)。如有淡茶褐色的菌膜及子實體，，只要接種時去除就可以用，若菌絲已干燥、收縮或菌絲體自溶產(chǎn)生大量紅褐色液體，則表明生活力下降，不能作為菌種。菌絲生長速率測定

將所獲的菌種，轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)皿中央,待菌絲生長蔓延時,用直徑0.5cm的打孔器,經(jīng)滅菌后打取邊緣菌絲,連同培養(yǎng)基重新接入PDA培養(yǎng)皿中央進(jìn)行培養(yǎng),每隔24小時,測定菌落直徑,直至菌落覆蓋全皿為止,從而計算出菌絲平均生長速度。顯微鏡檢查

在載玻片上滴一滴蒸餾水，然后挑取少許菌絲置水滴上，讓菌絲體充分展開，蓋好玻片，在顯微鏡下觀察。蘑菇菌絲體應(yīng)粗壯，菌絲節(jié)較長，呈分枝狀，說明是正常菌種，如果菌絲節(jié)很短，分枝很濃密，菌絲較纖細(xì)，生長緩慢，一般為不正常菌種。

液體培養(yǎng)鑒定

配制2％糖水溶液，經(jīng)常規(guī)滅菌消毒，挑取黃豆粒大的菌塊，放入100毫升上述溶液中，置于25-28℃溫度下培養(yǎng)3-7天后，若液面出現(xiàn)氣泡，產(chǎn)生“油皮”，發(fā)生渾濁現(xiàn)象，說明菌種本身有雜菌；如果苗塊下沉，或遲遲才長出很薄的菌絲層，則說明菌種生活力弱；如若液面四周的菌絲生長快，且濃白呈棉絮狀，則表明菌種生命力強(qiáng)。菌種純度測定

隨機(jī)抽取經(jīng)初步檢測的菌種，挑取菌種不同部位菌絲連同培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，每瓶菌種轉(zhuǎn)接30-50點，25℃培養(yǎng)，觀察菌種萌發(fā)時有無雜菌和異常生長狀況出現(xiàn)。

吃料能力鑒定

將試管母種接入新鮮配制的裝在試管中的糞草培養(yǎng)基中，置24℃下進(jìn)行培養(yǎng),5天后觀察菌絲生長情況,如果菌種塊能很快萌發(fā),并迅速向培養(yǎng)料中生長伸展,則說明該品種的吃料能力強(qiáng);如果菌種萌發(fā)后生長緩慢,遲遲不向四周和料層深處伸展,則表明該品種對培養(yǎng)料的適應(yīng)能力差,是劣質(zhì)菌種。

菌種病毒病的檢測

（二）原種、栽培種質(zhì)量的鑒定好的原種和栽培種的標(biāo)準(zhǔn)：1、母種的轉(zhuǎn)管次數(shù)用轉(zhuǎn)管次數(shù)4-5次以內(nèi)的母種生產(chǎn)的原種和栽培種。2、菌齡一般適用菌的原種和栽培種，在20℃左右可保存3個月，超過上述菌齡的菌種就已經(jīng)老化，不應(yīng)用于生產(chǎn)。3、原種和栽培種的外觀要求（1）菌絲生長健壯，絨狀菌絲多，生長整齊。（2）菌絲已長滿培養(yǎng)基，銀耳的菌種還要求在