運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)九 血糖的測(cè)定與應(yīng)用1實(shí)驗(yàn)?zāi)康蘑?/p>

掌握血糖的測(cè)定方法、原理及應(yīng)用；⑵

了解血糖的正常值及糖飲食對(duì)血糖濃度的調(diào)節(jié)作用。2實(shí)驗(yàn)原理⑴

福林—馬爾露斯（Folin-Malmors）超微量法：在熱堿溶液中的葡萄糖可將高鐵氰化鉀還原為低鐵氰化鉀，后者再與硫酸高鐵鹽作用生成亞鐵氰化鐵（普魯士藍(lán)），與同樣處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，即可求出血糖含量。其反應(yīng)如下：⑵

葡萄糖試劑盒測(cè)定法：血糖濃度是相對(duì)恒定的，這是由于體內(nèi)存在著各種調(diào)節(jié)血糖濃度的生理機(jī)制。飽食和大量食糖后大量葡萄糖進(jìn)入血液，使之血糖濃度增高，糖原的合成速度隨之增大，但血糖濃度不久即恢復(fù)到正常。長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)中血糖也有下降現(xiàn)象，下降程度因人而異。如馬拉松賽跑時(shí)，中途退場(chǎng)者多因血糖下

降而被迫終止比賽，能堅(jiān)持跑到底，成績(jī)優(yōu)異者，血糖不下降或下降很少，所以血糖是評(píng)定運(yùn)動(dòng)耐

力素質(zhì)，監(jiān)控耐力訓(xùn)練的生化指標(biāo)之一。正常值： 3.89-6.11mmol/L

（70-110

mg/dl）單位換算：mg/dl×

0.0555

=

mmol/L3實(shí)驗(yàn)器材與試劑⑴

器材采血針、吸血管、超聲清洗機(jī)、離心管、臺(tái)式離心機(jī)、試管架、水浴箱、可見光分光光度計(jì)、移液管⑵

試劑①

0.03

mol/L

H2SO4②

1%鎢酸鈉③ 堿性鐵溶液：鐵氰化鉀0.8g，無(wú)水碳酸鈉2.0g，加 蒸餾水溶解并至200ml，貯于棕色瓶中。④ 酸性硫酸高鐵銨溶液：稱取硫酸高鐵銨2.0g，溶于50ml蒸餾水中，加入85%磷酸20ml，然后用純凈蒸餾水定容到100ml。⑤葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液

貯存液（10mg/ml）：稱取純無(wú)水葡萄糖1.00g用0.25%苯甲酸溶液溶解，傾入100ml容量瓶，最后用0.25%苯甲酸溶液稀釋至刻度，搖勻，放冰箱保存。

標(biāo)準(zhǔn)糖應(yīng)用液I（0.02mg/ml）：準(zhǔn)確吸取貯存液0.2ml，置于100ml容量瓶中，加入0.25%苯甲酸液至刻度（用于標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定）。

標(biāo)準(zhǔn)糖應(yīng)用液II（0.05mg/ml）：準(zhǔn)確吸取上述貯存液0.5ml，置于100ml容量瓶中，用0.25%苯甲酸液稀釋至刻度（作標(biāo)準(zhǔn)曲線用）。

0.25%苯甲酸溶液：稱取苯甲酸2.5g，加入煮沸的蒸餾水1000ml中，使成飽和溶液，冷卻后，取上清液備用。4實(shí)驗(yàn)方法與步驟⑴ 福林—馬爾露斯（Folin-Malmors）超微量法① 取樣

兩位同學(xué)一組，分別取指尖血20ul，室溫靜置，制備血清；采血后分別食用蔗糖100g及面包100g，30min后同上采血，制備血清。② 血液中葡萄糖的測(cè)定

在離心管中加入0.5ml（0.03mol/L）硫酸，取指尖血0.02ml加入硫酸液中，混勻后加1%鎢酸鈉溶液0.48ml，靜置10min，離心5min（3000r/min），取上清液

0.5ml入測(cè)定管，按表3-9操作測(cè)定。管

號(hào)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液I—0.5—（0.02mg/ml）蒸餾水0.5——堿性鐵溶液11—沸水浴5

min，趁熱加酸性硫酸高鐵銨溶液酸性硫酸高鐵銨溶液111蒸餾水4.54.54.5混勻后比色OD（λ=670nm以空白管調(diào)零）相當(dāng)血糖mg%表3-9單位：（ml）注：180.2指葡萄糖相對(duì)分子質(zhì)量；10：1L等于10dl正常值：80~120mg%，平均106mg%。計(jì)算：⑵

試劑盒測(cè)定法：如：采用浙江東甌生物工程有限公司生產(chǎn)的葡萄糖測(cè)定試劑盒，按其操作步驟略加改進(jìn)。①

基本參數(shù)：方法：終點(diǎn)法；波長(zhǎng)：500nm；比色光徑：0.5cm或1cm；反應(yīng)溫度：37℃；反應(yīng)時(shí)間：10min；標(biāo)本/試劑：1:150。加入物（μl）空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管血清——10標(biāo)準(zhǔn)液—10—試劑150015001500混勻置37℃水浴箱中保溫10min，500nm波長(zhǎng)，以空白管調(diào)零，用小號(hào)比色皿裝盛溶液，測(cè)定各管吸光度。② 按表3-10操作：表3-10

試劑盒操作表③

計(jì)算：⑶標(biāo)準(zhǔn)曲線制法標(biāo)準(zhǔn)曲線就是一系列不同濃度（含量）標(biāo)準(zhǔn)溶液的光密度值對(duì)其相應(yīng)的濃度（含量）作圖，所得的坐標(biāo)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線使測(cè)定工作簡(jiǎn)便，當(dāng)需要測(cè)定大批樣品或多次測(cè)定時(shí)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，可免去標(biāo)準(zhǔn)管和對(duì)每份樣品的計(jì)算，只需作測(cè)得的各樣品光密度數(shù)值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線便可迅速得出該樣品的濃度（或含量）。按表3-11操作，并繪標(biāo)準(zhǔn)曲線。表3-11單位：（ml）管號(hào)012345標(biāo)準(zhǔn)液II00.10.20.30.40.5蒸餾水0.50.40.30.20.10堿性鐵溶液111111沸水浴5min，取出趁熱加酸性硫酸高鐵銨溶液硫酸高鐵銨溶液111111靜置1min后加水蒸餾水4.54.54.54.54.54.5混勻后比色相當(dāng)于血糖(mg%)050100150200250OD（λ=670nm）用光密度作縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度（mg%）作橫坐標(biāo)，將不同濃度的各標(biāo)準(zhǔn)管讀數(shù)分別點(diǎn)在坐標(biāo)紙上（內(nèi)側(cè)），通過各點(diǎn)作一平滑曲線，在曲線上可查得測(cè)定管的血糖含量，如圖3-4。5

注意事項(xiàng)⑴ 標(biāo)準(zhǔn)曲線要通過原點(diǎn)，因?yàn)榭瞻坠躉D=0；⑵ 標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率要適中，與橫、縱軸成45°角為宜，這樣誤差??；⑶ 要保持測(cè)定做標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)條件的一致性（分光光度計(jì)也要一樣）；⑷ 加硫酸高鐵銨溶液后靜置1min