醫(yī)學(xué)微生物學(xué)：第24章 病毒感染的檢查方法與防治原則

病毒感染的檢查方法與防治原則重點(diǎn)及難點(diǎn)標(biāo)本的采集和送檢病毒分離培養(yǎng)方法病毒感染的血清學(xué)診斷方法人工主動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫及其常用制劑第一節(jié)病毒感染的檢查方法標(biāo)本的采集與送檢病毒的分離與鑒定病毒感染的診斷一、標(biāo)本的采集與送檢采集急性期標(biāo)本使用抗生素冷藏保存，快速送檢采集雙份血清二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物接種應(yīng)用：無敏感細(xì)胞培養(yǎng)的病毒優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)：要有飼養(yǎng)條件，費(fèi)用高，有潛伏病毒，對許多人類病毒不敏感動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：對多種病毒敏感，條件易控制，操作簡單，成本較低缺點(diǎn)：無病毒增殖指標(biāo)；有些病毒可致雞胚死亡雞胚接種部位示意圖單層細(xì)胞懸浮細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞生長情況原代細(xì)胞二倍體細(xì)胞傳代細(xì)胞系根據(jù)細(xì)胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)1.原代細(xì)胞primarycells對多種病毒敏感來源困難,獲取成本高可攜帶潛伏病毒2.二倍體細(xì)胞diploidcells對多種病毒敏感不帶病毒，無致癌潛能用于病毒疫苗生產(chǎn)

3.傳代細(xì)胞continuouscell對多種病毒敏感繁殖能力高，傳代時(shí)間長不能用于病毒疫苗生產(chǎn)病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖指征:細(xì)胞病變紅細(xì)胞吸附病毒干擾作用細(xì)胞代謝的改變細(xì)胞病變效應(yīng)cytopathiceffect,CPE

正常細(xì)胞細(xì)胞病變早期細(xì)胞病變晚期

紅細(xì)胞吸附hemadsorption

帶有血凝素的病毒感染細(xì)胞后，能與脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞結(jié)合雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞

風(fēng)疹病毒

人胚腎細(xì)胞CPE(－)?？刹《?/p>

人胚腎細(xì)胞CPE(＋)人胚腎細(xì)胞?？刹《綜PE(-)CPE(+)待檢標(biāo)本風(fēng)疹病毒(-)風(fēng)疹病毒(+)病毒干擾作用viralinterference

某些病毒不引起CPE,但可干擾感染同一細(xì)胞另一病毒增殖，抑制該病毒的CPE。（二）病毒的鑒定形態(tài)學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定分子生物學(xué)鑒定1.形態(tài)學(xué)鑒定光學(xué)顯微鏡巨細(xì)胞病毒包涵體透射電鏡SARS病毒Ab

方法包括Ag

2.血清學(xué)鑒定用已知特異性抗體對病毒進(jìn)行種、型和亞型的鑒定ELISA中和試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

方法包括3.分子生物學(xué)方法鑒定對病毒的蛋白抗原、核算進(jìn)行檢測蛋白印跡技術(shù)核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測序新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測基因測序和生物對比（三）病毒數(shù)量與感染性測定50%組織細(xì)胞感染量紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)空斑形成試驗(yàn)

1.50％組織細(xì)胞感染量

50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50原理：測定50%細(xì)胞出現(xiàn)CPE的最小病毒量以CPE作指標(biāo)，判斷病毒感染性和毒力測定活病毒數(shù)量

++++++++++++++++++--2.紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)redcellagglutinationtest

原理：測定使紅細(xì)胞發(fā)生凝集的最小病毒量測定病毒總量（活病毒+死病毒）凝集效價(jià)：能使紅細(xì)胞呈++凝集的病毒最高稀釋度為凝集效價(jià)，該稀釋度記為一個(gè)血凝單位3.空斑形成試驗(yàn)plaqueformationtest原理：將適量病毒接種單層細(xì)胞，病毒增殖使感染的細(xì)胞脫落，形成肉眼可見的空斑空斑形成單位（plaqueformattingunit，PFU）：由一個(gè)感染病毒增殖所致測定活病毒數(shù)量三、病毒感染的診斷形態(tài)學(xué)檢查病毒成分檢測血清學(xué)診斷（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查光學(xué)顯微鏡檢查（二）病毒成分檢測病毒蛋白抗原檢測EIA、FIA、Wb病毒核酸檢測核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)基因測序技術(shù)（三）血清學(xué)診斷中和試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)?zāi)z免疫擴(kuò)散試驗(yàn)特異性IgM抗體檢測血清學(xué)診斷的用途分離病毒為時(shí)已晚無法分離或難以分離的病毒證實(shí)分離病毒的臨床意義血清流行病學(xué)調(diào)查原理：病毒＋中和抗體病毒失去感染性1.中和試驗(yàn)neutralizingtest檢測血清中抗體的水平鑒定未知病毒對病毒進(jìn)行半定量較少用于臨床診斷，用于人群免疫情況的調(diào)查原理：病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞

不凝集帶血凝素病毒感染輔助診斷鑒定病毒型和亞型2.血凝抑制試驗(yàn)Hemagglutinationinhibitiontest

343.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)Complementfixationtest原理：用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快近期感染指標(biāo)第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防人工主動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫1.人工主動(dòng)免疫滅活疫苗減毒活疫苗亞單位疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗核酸疫苗2.人工被動(dòng)免疫免疫球蛋白血清丙種球蛋白細(xì)胞免疫制劑細(xì)胞因子逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制示意圖第三節(jié)病毒感染的治療第三節(jié)病毒感染的治療抗病毒化制劑干擾素和干擾素誘生劑中草藥新抗生素類治療性疫苗治療性抗體基因治療劑抗病毒化學(xué)制劑核苷類藥物阿昔洛韋、利巴韋林、拉米夫定等非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑奈韋拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素蛋白酶抑制劑塞科納瓦、英迪納瓦、瑞托納瓦其他抗病毒藥物金剛烷胺、甲酸磷霉素41干擾素和干擾素誘生劑干擾素干擾素誘生劑PolyI:C、甘草甜素、蕓芝多糖42以流感病毒為例，試述病毒分離培養(yǎng)的一般程序。病毒感染血清學(xué)診斷常用的方法及原理？病毒感染早期的實(shí)驗(yàn)室快速診斷有哪些方法？病毒分離培養(yǎng)時(shí)對臨床標(biāo)本的采集和送檢有哪些要求？病毒檢測和細(xì)菌檢測有什么區(qū)別？復(fù)習(xí)思考題中英文關(guān)鍵詞紅細(xì)胞吸附hemadsorption血清學(xué)檢測serologicaldiagnosis細(xì)胞病變效應(yīng)

cytopathiceffect,CPE血凝抑制試驗(yàn)

hemagglutinationinhibitiontest50%組織細(xì)胞感染量

50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50

[1]NealNathanson.ViralPathogenesisandImmunity.(secondedition)，北京：科學(xué)出版社，2008。[2]Martín-CarboneroL,PovedaE.HepatitisBVirusandHIVInfection.SeminLive