Agilent-1260-HPLC-工作原理及簡(jiǎn)單操作

Agilent1260HPLC工作原理及簡(jiǎn)單操作

10-12-2021Agilent1260HPLC工作原理及簡(jiǎn)單操作培訓(xùn)目的：

1.了解HPLC各模塊的原理；

2.掌握HPLC各模塊日常維護(hù)的要點(diǎn)；

3.掌握開(kāi)機(jī)，關(guān)機(jī)。Agilent1260HPLC工作原理及簡(jiǎn)單操作內(nèi)容：一、HPLC各模塊的原理及維護(hù)；二、開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作；

三、討論；四、評(píng)估。一、HPLC各模塊工作原理及維護(hù)HPLC：高效液相色譜儀〔HighPerformancesLiquidChromatography〕。

由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾個(gè)局部組成。工作時(shí)儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)樣品進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱〔固定相〕內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)屢次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差異，被別離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。關(guān)于溶劑HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)所有溶劑應(yīng)為HPLC級(jí)，水應(yīng)為二次超純水；所有溶劑應(yīng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾。過(guò)濾水應(yīng)使用水相濾膜，過(guò)濾有機(jī)相應(yīng)使用有機(jī)相濾膜，不能混用。每一次濾膜只能用一次，不能重復(fù)使用；如果沒(méi)有在線(xiàn)脫氣機(jī)，所有溶劑應(yīng)經(jīng)過(guò)超聲脫氣；水易滋生藻類(lèi)，防止直接照射，過(guò)濾水最好使用不要超過(guò)兩天；如果條件允許可向溶劑中參加的疊氮化鈉；注意溶劑的相容性，防止使用不相容的溶劑；防止使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或有機(jī)氯等腐蝕性溶劑；在溶劑瓶中的溶劑過(guò)濾頭可能會(huì)堵塞，必要時(shí)小心拿下用強(qiáng)酸〔35%硝酸〕浸泡時(shí)，用水沖洗，但不要使用超聲處理。關(guān)于在線(xiàn)真空脫氣機(jī)在線(xiàn)真空脫氣機(jī)的管路容量為12ml，壓力范圍為110Torr-190Torr。為保證脫氣機(jī)的良好使用性能，在下述情況下需要用注射器抽洗脫氣機(jī)管路，每個(gè)通道使用不低于30ml的異丙醇。1，新的脫氣機(jī)或新的管路；2，更換了溶劑，尤其是緩沖鹽與有機(jī)相之間、兩個(gè)不相容流動(dòng)相之間的互換時(shí)；3，輸液泵關(guān)閉了一段時(shí)間，或使用揮發(fā)性溶劑混合物。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)更換過(guò)濾白頭在清洗閥中的過(guò)濾白頭需要更換，在清洗狀態(tài)下，設(shè)置流量為5ml/min，此時(shí)系統(tǒng)壓力如果超過(guò)10bar，那么需更換過(guò)濾白頭。更換步驟：1，關(guān)閉泵電源；2，用扳手去掉通往進(jìn)樣器上的毛細(xì)管，拔掉廢液管；3，用專(zhuān)用扳手小心把清洗閥卸下來(lái)；4，輕輕去掉聚四氟乙烯密封墊和金密封墊，將過(guò)濾白頭拿出；5，更換新的過(guò)濾白頭，裝上聚四氟乙烯密封墊和金密封墊；6，裝上清洗閥；7，連接管路。過(guò)濾白頭聚四氟乙烯密封墊金密封墊清洗閥PurgeValveHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)更換過(guò)濾白頭1，去掉毛細(xì)管，廢液管2，卸掉清洗閥3，更換過(guò)濾白頭4，更換白頭，裝好清洗閥HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)泵的本卷須知1，溶劑的過(guò)濾、脫氣；2，防止使用腐蝕性溶劑；3，在滿(mǎn)足分析的前提下，盡可能使用較低的流速—較低的系統(tǒng)壓力。4，更換過(guò)濾白頭；5，考慮溶劑的相容性；6，盡可能使用新鮮的水；7，使用0.01M以上濃度的緩沖溶液要選配柱塞清洗組件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶劑比方環(huán)己烷時(shí)，建議使用聚乙烯密封墊，部件號(hào)為0905-1420，在0—200Bar下使用聚乙烯密封墊比標(biāo)準(zhǔn)密封墊更耐磨損。四元泵：四元泵多通道比例閥MCGV使用時(shí)注意，緩沖溶液要放在A、D通道，以防止鹽顆粒析出。建議A通道：水；B、C通道：有機(jī)溶劑；D通道：緩沖溶液。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)樣品準(zhǔn)備樣品完全溶解在流動(dòng)相中樣品沒(méi)有完全溶解過(guò)濾樣品，確保樣品中不含固體顆粒用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱的溶劑溶解樣品進(jìn)樣量盡量小關(guān)于進(jìn)樣器HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于進(jìn)樣器準(zhǔn)備位置調(diào)用樣品瓶吸樣品進(jìn)樣和運(yùn)行位置標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣過(guò)程...HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)自動(dòng)進(jìn)樣器樣品要干凈、經(jīng)過(guò)過(guò)濾。洗針：把樣品殘留降低到最小限度，可降低進(jìn)樣的記憶效應(yīng)，洗針瓶最好不要加瓶墊。屢次吸液

用于進(jìn)樣量大于100ul

HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于恒溫柱箱控制范圍：最高80oC，低溫低于室溫10oC。預(yù)熱塊體積左面為3ul，右面為6ul，除非有特殊要求，左右溫度應(yīng)保持一致。一定要關(guān)閉前面板。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于原理HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于色譜柱保護(hù)過(guò)濾所有的溶劑和樣品使用保護(hù)柱儀器在使用完畢，要沖洗整個(gè)系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中的緩沖液。

柱子在不使用時(shí)，兩端密封保存在適當(dāng)?shù)娜軇┲斜４嬷幼⒁馍V柱的pH值使用范圍不要高壓沖洗柱子不要高溫下過(guò)長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)檢測(cè)器—DADDAD(DiodeArrayDetector)二極管陣列檢測(cè)器，是以光電二極管陣列作為檢測(cè)元件的UV-VIS檢測(cè)器.DAD的光源—氘燈有一定的半衰期，一般為1000小時(shí)左右，所以在沒(méi)有樣品分析任務(wù)時(shí)要關(guān)閉氘燈，以延長(zhǎng)氘燈的使用壽命,但是也不要頻繁的開(kāi)關(guān),這樣也會(huì)影響壽命。同時(shí)，翻開(kāi)燈需要預(yù)熱10min左右，燈使用時(shí)間越長(zhǎng)，預(yù)熱的時(shí)間也要越長(zhǎng)。流動(dòng)池污染后，會(huì)造成靈敏度下降、噪聲加大，應(yīng)防止臟的樣品進(jìn)入流動(dòng)池。定期使用異丙醇沖洗系統(tǒng)對(duì)保持流動(dòng)池性能有一定好處。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)檢測(cè)器—DADHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)檢測(cè)器—FLDHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)FLD(FluorescenceDetector)熒光檢測(cè)器：是利用某些溶質(zhì)在受到紫外光激發(fā)后，能發(fā)射可見(jiàn)光〔熒光〕的性質(zhì)來(lái)檢測(cè)的。FLD是一款具有高度靈敏度和高度選擇性的檢測(cè)器。其激發(fā)光源是氙燈，此燈不需要預(yù)熱。其流通池和DAD的一樣，也要定期用異丙醇沖洗，以保證性能。檢測(cè)器—RIDHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)二、開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作SealwashComputerPowerChemstationPurgeSCPCP開(kāi)機(jī)操作：1，翻開(kāi)計(jì)算機(jī)。2，翻開(kāi)LC各模塊的電源，等待儀器自檢完畢，1-2min。3，雙擊桌面上“Instrument1Online〞圖標(biāo)，進(jìn)入化學(xué)工作站,在工作站翻開(kāi)各工作模塊。4，翻開(kāi)SealWash清洗液開(kāi)關(guān)，清洗10min。5，翻開(kāi)清洗閥，排除系統(tǒng)中的氣泡，平衡差不多30min.6,擰上清洗閥，將流量設(shè)為所需流速，平衡30min即可以打樣。關(guān)機(jī)操作：1，如果使用了緩沖溶液流動(dòng)相應(yīng)先用水沖洗系統(tǒng)30min。2，用純有機(jī)相沖洗系統(tǒng)30min。3，在工作站上關(guān)閉各個(gè)模塊。4，退出工作站，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。5，關(guān)閉LC各個(gè)模塊的電源。二、開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作指示燈狀態(tài)每個(gè)部件接通電源后LED燈顯示綠色關(guān)機(jī)poweroff準(zhǔn)備進(jìn)樣poweron沒(méi)準(zhǔn)備好NotReady運(yùn)行Run故障Error駐留ResidentBlink儀器LED狀態(tài)顯示電源開(kāi)關(guān)顯示黑Black黑Black黃Yellow綠Green紅Red黃閃爍Yellowblinking6種LED儀器狀態(tài)：開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)翻開(kāi)清洗閥，清洗閥翻開(kāi)時(shí)，液體從廢液管中流出，為清洗狀態(tài)。更換溶劑后，翻開(kāi)清洗閥，設(shè)置流量5ml/min，沖洗5-10min.順時(shí)針旋緊清洗閥為關(guān)閉狀態(tài),此時(shí)流動(dòng)相由毛細(xì)管流向進(jìn)樣器.逆時(shí)針?lè)_(kāi)清洗閥順時(shí)針關(guān)閉清洗閥毛細(xì)管出口,流向進(jìn)樣器廢液管,清洗閥翻開(kāi)時(shí)溶劑由此流向廢液瓶.開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作清洗閥PurgeValve每次用過(guò)儀器后必須做!整臺(tái)液相色譜儀的維護(hù)1.在使用過(guò)含鹽緩沖液后必須清水沖洗泵15分鐘，此時(shí)必須翻開(kāi)排放閥，不能使廢液進(jìn)入色譜柱。2.關(guān)上排放閥，用90%+10%的水、甲醇溶液沖洗整個(gè)系統(tǒng)，時(shí)間為15～20分鐘，流量1ml/min。本步