臨床生化檢驗應(yīng)用工程技術(shù)人員基礎(chǔ)知識培訓(xùn)

...wd......wd......wd...臨床生化檢驗根基知識培訓(xùn)生化根基知識1.1生化診斷試劑盒為由一定的化學(xué)品或者酶類組成的多成分混合試劑〔Reagent〕，最終以水溶液的方式與待測物發(fā)生一系列化學(xué)或者生化反響，通過生成物或反響物中某物質(zhì)的吸光度變化，測量待檢測物中某種特定物質(zhì)的含量。1.2生化診斷試劑用于檢測樣本，包括：人體血清〔主要〕、血漿及尿液中的各種酶類和代謝產(chǎn)物，用于預(yù)測，診斷以及治療監(jiān)測，協(xié)助臨床醫(yī)生診治疾病提供數(shù)據(jù)參考。1.3按功能分為：肝功、血脂、腎功、心肌、代謝、免疫&風濕、離子&其他。1.4試劑性能評價指標：1試劑外觀2批間差3準確度4精細度5線性〔靈敏度〕6抗干擾能力〔特異性〕7穩(wěn)定性1.5試劑檢測原理〔朗伯比爾定律〕：A=Kbc式中，A為吸光度;K為吸收系數(shù)，是與入射輻射的波長及吸收物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)的常數(shù);b為液層厚度，單位為cm;c為吸收物質(zhì)的濃度。當濃度的單位為mol/L時，K的單位為L/mol·cm，稱為摩爾吸收系數(shù)，通常用ε表示。摩爾吸收系數(shù)ε表示物質(zhì)對某一波長的輻射的吸收特性。ε愈大，表示物質(zhì)對某波長輻射的吸收力愈強，因而分光光度法測定的靈敏度就愈高.1.6理論值與實測值偏差的解釋：實測值偏離了朗伯比爾定律。偏離Lambert-Beer定律的因素：1復(fù)合光對Beer定律的偏離：吸收定律要求入射光為單色光，而分光光度計單色光的純度主要決定于色散元件及光路設(shè)計，即使高精度的儀器，也得不到純單色光，而是波長寬度的復(fù)合光，其結(jié)果導(dǎo)致偏離LambertBeer定律。2雜散光的影響：雜散光(straylight)是進入檢測器待測波長以外的光。主要來源于儀器色散元件外表的散射、單色器內(nèi)壁塵埃等。3狹縫寬度的影響：單色器設(shè)有進、出口狹縫，狹縫愈窄，單色光愈純，吸光度增加，但輻射能減小，對弱吸收帶的測量有一定影響。定性分析時，為提高分辨能力常采用較小的狹縫，而定量分析時，在靈敏度允許的情況下，宜采用較大狹縫。當出、入射狹縫寬度相等時，狹縫寬度引起的誤差最小。4非吸收作用引起的誤差：1.散射效應(yīng)：光吸收定律只適用于均勻的吸收體系，如待測溶液是混濁的，當光通過時，將產(chǎn)生散射效應(yīng)。其結(jié)果使光通過吸收物質(zhì)的光程不固定，散射光的一局部和透射光一起進入檢測器，導(dǎo)致偏離Beer定律。因此，免疫比濁法常用多點校準來做標準曲線。2.熒光效應(yīng)：分子吸收輻射能后產(chǎn)生的激發(fā)態(tài)分子以重新發(fā)射輻射的方式回到基態(tài)而發(fā)射熒光。由于多數(shù)顯色體系熒光效應(yīng)很小，而且熒光發(fā)射是各向同性，只有一局部沿透射光方向進入檢測器，使測量吸光度偏低。一般情況下，熒光效應(yīng)對分光光度法產(chǎn)生的影響較小。目前，多數(shù)光度計設(shè)有兩個樣品室，對有熒光試樣可置于離檢測器較遠的樣品室，或在光路中插入適當?shù)臑V光片以消除熒光效應(yīng)。5測定過程中產(chǎn)生的誤差：化學(xué)反響引起的誤差，人為的誤差等，在此不作詳細解釋。1.7生化測定方法：臨床化學(xué)自動分析儀所涉及的測定方法包括終點測定法、連續(xù)監(jiān)測法、固定時間法等。1.8.1生化分析根本術(shù)語概述：1雙波長：由主波長和副波長構(gòu)成的兩個波長，測定樣品采用雙波長可以消除對實驗的影響。主波長是指測定某物質(zhì)時，生成的產(chǎn)物顏色對光吸收的特有波長。副波長是指測定某物質(zhì)時，為消除其他干擾物質(zhì)在主波長造成測定干擾所設(shè)定的波長。2反響杯空白：在特定波長下，光通過以蒸餾水或空氣為反響體系所測得的吸光度值。3試劑空白：在各特定波長下，光通過以蒸餾水或生理鹽水為樣品和相應(yīng)測定工程試劑構(gòu)成的反響體系時所測得的吸光度值。4樣品空白：在各特定波長下，光通過以生物樣品和相應(yīng)測定工程〔不含有引起反響的一種或多種成分的試劑〕構(gòu)成的反響體系所測得的吸光度值；或由生物樣品和相應(yīng)測定工程試劑構(gòu)成的反響體系產(chǎn)生反響最初時間所測得的吸光度值。5終點法：這是最常用的分析法。因為該法常有標準液，因此又稱比例終點法，是經(jīng)過一定反響時間后，當反響到達平衡(終點)時做到的一點分析法。一般是在一定溫度下，試劑與樣品經(jīng)過一定反響時間，被送入比色系統(tǒng)，然后檢測吸光度的變化，由微機系統(tǒng)處理計算和打印顯示出結(jié)果。其中又分一點終點和兩點終點法。6、連續(xù)監(jiān)測法：也叫速率法，此法通過測定酶所催化的反響速度，間接計算出酶的含量，稱酶活性測定法。在酶促反響過程中，不是任何時期的反響速率都和酶濃度成正比。當酶促反響剛一開場，底物處于過量狀態(tài)，酶與底物開場結(jié)合，生成復(fù)合物(ES)，底物濃度開場下降，此時產(chǎn)物尚未生成。當復(fù)合物(ES)分解，生成產(chǎn)物(P)，酶促反響速度急驟上升，經(jīng)過很短的作用時間后，產(chǎn)物的生成量或底物的減少量與反響時間成線性關(guān)系，反響速度保持恒定不變，這一時期稱為零級反響期。隨酶促反響繼續(xù)進展，底物不斷消耗，酶促反響條件逐漸變化，酶促反響速度逐漸減慢，產(chǎn)物生成或底物減少量的變化曲線遂趨平坦，這一時期稱為一級反響期。此時的反響速率常常不能準確反響酶的含量。因此其測光點一般要求取在反響到達平衡前。7、兩點速率法：兩點速率法也叫固定時間法，對測定及標準采用兩個時間點測定。采用此方法的如肌酐〔苦味酸法〕，目前多數(shù)自動分析儀還是用Jaffe氏反響測肌酐，即肌酐能同堿性苦味酸鹽生成紅橙色化合物，這個反響特異性不高，因為維生素C、丙酣酸、丙酣、葡萄糖、乙酷醋酸、果糖、氨基馬尿酸、蛋白質(zhì)及其他反響產(chǎn)物亦能與堿性苦位酸鹽生成紅色化合物，血清中的這些假肌酐約含25%。但真性肌酐與苦味酸的反響為快反響，假肌酐為慢反響，因此測試時測試時間一般在樣品與堿性苦味酸試劑混合后25秒和1分25秒在500nm處測吸光度變化。兩時間點的吸光度變化之差，則為特異反響肌酐濃度。8普通免疫比濁與膠乳增強免疫比濁法：普通免疫比濁法：是抗原與相應(yīng)的抗體直接結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，在反響液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進展透射比濁測定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測定。該法須做多點校準，再經(jīng)非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。膠乳增強免疫比濁法：是將抗體吸附在大小適中、均勻一致的膠乳顆粒上，制成致敏的膠乳顆粒，當遇到相應(yīng)抗原時，發(fā)生交聯(lián)反響，形成抗原抗體復(fù)合物，膠乳顆粒發(fā)生凝集。單個膠乳顆粒在入射光波長之內(nèi)并不阻礙光線透過，兩個及其兩個以上膠乳顆粒凝聚時則使透過的光減少，其減少的程度與膠乳顆粒凝聚的程度呈正比，即與待測抗原量呈正比，由此可檢測樣本中的特定抗原含量。該法比普通免疫比濁敏感度高，試劑穩(wěn)定，個體免疫復(fù)合物對結(jié)果影響也小，因此結(jié)果穩(wěn)定、可靠，特異性好，準確度高。9參考物的量值溯源性:通過一條具有規(guī)定不確定度的不連續(xù)的比擬鏈,使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準,通常是與國家標準或國際標準聯(lián)系起來的特性。10檢測限：是指檢測系統(tǒng)可檢測出的最低分析物濃度。又稱分析靈敏度。11靈敏度與線性范圍：靈敏度與線性范圍有著嚴密聯(lián)系，這也是跟生化儀的性能有關(guān)。靈敏度與線性范圍的取舍就要根據(jù)其醫(yī)學(xué)決定水平而定。一般儀器能測的光密度值最大在35000。假設(shè)謀工程的醫(yī)學(xué)決定水平在0~100，如果1個單位濃度變化能引起儀器吸光度響應(yīng)量為1000，那么它能測的濃度范圍為0~35，可以看出，雖然其靈敏度很高，但在其檢測范圍沒有到達其醫(yī)學(xué)決定水平，即線性范圍太窄。相反，如果1個單位濃度變化能引起儀器吸光度響應(yīng)量為100，那么它能測的濃度范圍為0~350，這個線性范圍是可以的。因此，靈敏度與線性的評價，要根據(jù)其醫(yī)學(xué)決定水平而定。1.9常用校準方法：終點法或兩點速率法，必須通過使用標準液，建設(shè)一條標準曲線；速率法，采用標準液校正可消除系統(tǒng)誤差，也可直接輸入Factor值。校準類型：空白定標：以水做標準液，消除試劑本身對測試的干擾；〔酶類〕兩點定標：以水作為零點，標準液作為另一點，建設(shè)標準曲線；〔Y=AX+B〕多點定標：兩個以上的標準液建設(shè)一條標準曲線；〔LOGIT-LOG〕1.10參考區(qū)間與醫(yī)學(xué)決定水平：臨床實驗室檢驗結(jié)果對被檢驗者低正常還是異常，有何臨床意義，如何用檢驗結(jié)果協(xié)助臨床醫(yī)生診斷和治療，這就涉及到參考區(qū)間和醫(yī)學(xué)決定水平了。參考區(qū)間大多是采用正態(tài)分布的原理制定，以95%的分布區(qū)間〔x±2s〕即為參考區(qū)間的上、下限，少數(shù)用百分位數(shù)來制定參考區(qū)間。不管采用什么方法，總有少數(shù)正常人的測定值落在異常范圍內(nèi)。因此，假性結(jié)果是防止不了的。當結(jié)果接近上限或下限時，不要輕易下正?；蛴胁〉慕Y(jié)論，要根據(jù)被測者的其他表征綜合判斷或過一段時間復(fù)查后，再做分析。醫(yī)學(xué)決定水平是由Barnett于1968年首先提出的。是指臨床上必須采取措施時的檢測水平。決定性水平是一個閥值，高于該值或低于該值，應(yīng)決定對患者采取適當?shù)闹委煷胧?。醫(yī)學(xué)決定水平可在疾病診斷中起著排除或確認的作用，對某些疾病進展分級或分類，或愈后做出估計，來提醒醫(yī)生在臨床上做出相應(yīng)的處理方式。醫(yī)學(xué)決定水平與參考區(qū)間的區(qū)別在于它不僅對安康人的數(shù)值進展研究，以決定安康人的范圍，同時還對有關(guān)疾病的不同病情的數(shù)據(jù)進展研究，以定出不同的決定性限值，以引導(dǎo)醫(yī)生采取不同的臨床措施。它的應(yīng)用可以抑制只使用參考范圍的缺點，使一個檢驗結(jié)果對病人能起到提供診斷，處理依據(jù)的作用。1.11酶法檢測根本知識：酶是由活細胞產(chǎn)生并能在體內(nèi)起催化作用的，一類特殊蛋白質(zhì)。體內(nèi)幾乎所有的代謝反響都是在不同的酶催化下進展的。酶的催化效率高，對底物有嚴格的選擇性，酶非常不穩(wěn)定，酶濃度的變化是許多疾病的敏感指針，這是建設(shè)和開展診斷酶學(xué)的依據(jù)。用酶作試劑(工具酶)測定非酶物質(zhì)具有效率高、特異及易于實現(xiàn)自動分析的特點，是目前臨床生化檢驗的主流方法。1.11.1酶促反響速度的因素：包括:酶的濃度、底物的濃度、激活劑與抑制劑、pH和溫度等。在研究某一因素對酶促反響速度的影響時，反響系統(tǒng)中其他因素不變。酶促反響中所指速度是初速度，因為這時的反響速度與酶濃度成正比，可以防止產(chǎn)物及其他因素對反響速度的影響。在建設(shè)定量測定酶活性的方法時，需要研究酶促反響的速度及影響此速度的因素，通常稱之為反響動力學(xué)。1.11.2酶活力測定酶的含量很低，除免疫學(xué)方法外，不能直接測定其含量，只能測其催化反響過程中一定時間內(nèi)物質(zhì)變化的量，即酶促反響速率，或稱酶的活力。要保證只有待測酶的量影響反響速率，其他各種影響反響速率的因素都在嚴格控制之下，并保持各測定間的一致性?！惨弧趁复俜错懙倪^程通過測定底物濃度的下降，或測定產(chǎn)物濃度的上升，可以追蹤酶反響過程中底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物的過程。通常多測定產(chǎn)物的形成，因為測定產(chǎn)物從零或者從低濃度的增加，比測定高濃度底物的下降更可靠。典型的酶反響過程曲線分為幾個時期。緊隨著加人血清或底物啟動反響后，在出現(xiàn)明顯的變化前為延遲期;此期從幾秒到幾分鐘。隨后是底物和產(chǎn)物變化與時間成直線的時期，形成產(chǎn)物的速率恒定，此時期的速率為"反響初速度"。此期底物也下降，但實際上反響速度與底物濃無關(guān)，對底物濃度而言，酶促反響實際上是零級反響。反響曲線的直線期時間長短相差懸殊。緊跟著是反響速率持續(xù)下降，進入速度依賴于底物濃度的一級反響期。在這一期中，底物濃度下降，逆反響增加，抑制性產(chǎn)物蓄積，乃至酶本身進展性的滅活等因素也起作用。最后，當?shù)孜锲鸨M或到達平衡時，反響停頓。在零級反響期中，測定一定時間內(nèi)形成產(chǎn)物的量，是以此期中速率維持恒定為條件。否則表觀的反響速率將不正比于酶濃度。也就是選擇的監(jiān)測點必須在反響速率恒定區(qū)〔零級反響期〕。在正常測定中，為了能縮短延遲期和延長線性期，不僅要適量的底物濃度，還要在試劑中參加某些激活劑和其他的輔助因子。以改善反響進程曲線。(二)固定時間法和連續(xù)監(jiān)測法在我國臨床實驗室中，目前測定酶活性的方法，已從手工操作的固定時間法及兩點測定法過渡到連續(xù)監(jiān)測法。固定時間法在反響過程中測定一點的吸光度;兩點測定法是在反響開場及反響經(jīng)一定時間后，分別測兩點的吸光度，根據(jù)兩點間吸光度的差值，推算酶的活力。固定時間法和兩點測定法都是在酶和底物孵育一段時間后測定總的變化。兩點測定法也應(yīng)屬于酶動力學(xué)測定方法，但"動力學(xué)測定法"這一術(shù)語，習慣上僅指多點測定的動力學(xué)方法，即所謂速率法或連續(xù)監(jiān)測法，不管用手工法或自動法。固定時間法和兩點測定法可能會有幾種誤差:酶活力非常高的樣品，由于底物消耗速度快，反響很快呈現(xiàn)緩慢或停頓；有一些反響類型延遲期長；某些標本的反響曲線可能是非線性的；活力高的標本，超出了限定的活力測定范圍，假設(shè)稀釋標本可能會引起催化活力不成比例的變化。由于光度計及方法學(xué)的改進，可以縮短孵育時間，增加酶活力測定范圍，縮短延遲期，增加線性期，使固定時間法仍發(fā)揮重要作用；尤其在中小醫(yī)院實險室中更有實用價值，甚至一局部生化分析儀也采用了固定時間法。1.11.3酶法分析酶法分析即酶作為分析試劑，有利于提高測定結(jié)果的特異性;不需要先將測定的物質(zhì)別離和提純;可以直接分析血清這樣復(fù)雜的濡合物。具有絕對特異性的酶，即只作用于某一種物質(zhì)的酶，特別適合分析用。尿酸氧化酶、尿素酶、葡萄糖氧化酶特異性高。但實際上不能都如此。因此，必須了解酶對底物的特異性，從而預(yù)料可能發(fā)生的干擾反響并設(shè)法糾正。在以酶作分析試劑測定某-物質(zhì)時，也可用偶聯(lián)反響;而且偶聯(lián)反響的特異性可以增加反響全過程的特異性。如用己糖激酶(HK)法測葡萄糖，HK也作用于果糖產(chǎn)生相應(yīng)的6-磷酸醋;但偶聯(lián)的指示反響是G6PD，它特異地催化葡萄糖-6-磷酸的反響，用此酶測定己糖激酶催化反響的產(chǎn)物，明顯地提高了偶聯(lián)系統(tǒng)的特異性。傳統(tǒng)的酶法分析非酶物質(zhì)方法以酶作試劑進展分析的方法有兩種。廣泛應(yīng)用的第一種方法，是使反響進展到完全，使全部底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物，稱"終點"法。這是最理想的分析類型。但是，在非理想的平衡時，底物遠未完全轉(zhuǎn)變。此時需增加酶或非酶的反響，以轉(zhuǎn)變或捕獲第一個反響的產(chǎn)物，使反響在所要求的方向上進展到完全。如用乳酸脫氫酶測定乳酸中，形成的丙酣酸，通過參加硫酸阱形成腺而捕獲丙酣酸，使反響到達完全。第二種方法是動力學(xué)法，即間隔一定的時間測定底物的變化量(=速率)。由酶促反響進程曲線，開場為高底物濃度由酶催化的反響，首先服從零級反響，然后隨著底物濃度減低，進入一級反響期。對于任何一級反響，反響開場后在一給定時間t的底物濃度(S)為:(S)=(So)*e-kt(So)是最初的底物濃度，e是自然對數(shù)的底，K是速率常數(shù)。在t1到t2的固定時間間隔中，底物濃度的變化量△(S)與(So)的相互關(guān)系為:(So)=-△(S)/(e-kt-e-kt2)也即在一固定時間間隔中，底物濃度的變化量正比于底物的初濃度。這是一級反響的通性。對于酶的反響，當(S)《Km時，米氏方程簡化為:V=(Kmax/Km)*(S)K為一級速度常數(shù)。在反響過程中的兩個固定時間，測量與底物濃度性質(zhì)相關(guān)的(如光吸收)的方法為"兩點"動力學(xué)法。從理論上講，這是用酶法測定底物的最準確的方法；但方法學(xué)上比平衡法要求高，所有影響反響速率的因素如pH、溫度及酶量必須在兩點分析中保持恒定，并準確定時。必須用標準液進展校正。為保證一級反響條件，底物濃度必須低至小于O.2xKm。酶對底物的Km要高，以便測出較寬范圍的底物濃度。為增加試劑酶的表現(xiàn)Km值，可引進競爭性抑制劑。此外，被測非酶物質(zhì)作為酶促反響激活劑者，則用連續(xù)監(jiān)測法，如無機離子鉀和鈣的酶法測定。酶循環(huán)法分析非酶物質(zhì)酶循環(huán)法(enzymaticeyeingmethod)，是利用酶的底物特異性放大靶物質(zhì)(被測物)以提高靈敏度的測定方法。只循環(huán)靶物質(zhì)，減少了樣品存在的其他物質(zhì)對測定的干擾，因此不需要對樣品進展預(yù)處理或?qū)Π形镔|(zhì)進展提取，而且不需要特殊設(shè)備，是一種很有前途的測定技術(shù)。利用酶循環(huán)法測定的工程主要是總膽汁酸〔TBA〕。生化儀器根基知識2.1檢驗科常見全自動生化分析儀：日立：7100、7170、7080、7180、7600，奧林巴斯：AU400、AU640、AU2700、AU5400貝克曼：CX3、4、5、7、9、LX20、DXC800,AU480，AU680，AU5800東芝：TBA-40、TBA-120雅培：2000、C8000、AEROSET拜爾(西門子)：ADVIA1200、ADVIA1650、ADVIA24002.2下面簡單介紹幾個常用品牌的相關(guān)儀器性能日立：現(xiàn)在各醫(yī)院所用日立儀器的型號主要為7180、7600，除7080為31個測光點外，其余都為34點。以下為7180儀器主要性能介紹：分析速度：800個測定/小時〔最大〕，約4.5秒加樣一次可分析工程：86項〔帶ISE的話，最大可達89項〕，計算工程8項樣本量：1.5~35.0μl，0.1μl可調(diào)；試劑量：20~270μl，1μl可調(diào)；總反響體積：120~300μl；測光時必須滿足該條件；光源燈：保質(zhì)期750小時；比色杯：20只×8組共160只，依據(jù)杯空白值進展更換；測光系統(tǒng)：采用凹面蝕刻光柵的后分光、雙波長測定方式；12個波長：340、405、450、480、505、546、570、600、660、700、750、800nm穩(wěn)定性高且可有效補償樣本混濁、溶血、黃疸及電源電壓變動引發(fā)的干擾測定過程：全反響監(jiān)測，10分鐘測定34次吸光度值。15分鐘測定53次吸光度值依據(jù)實驗要求選擇相應(yīng)測光點的吸光度值計算結(jié)果樣本容器：樣本針有液面探測裝置，可使用原始采血管離出血清后直接上機測定試劑：同一工程最多可參加四步試劑，兩試劑艙位置各45個，溫度5~15℃。奧林巴斯：AU400、AU640、AU2700、AU5400奧林巴斯生化儀已經(jīng)被貝克曼收購，除AU400、AU640、AU2700、AU5400外，還有一款A(yù)U680，其操作界面為貝克曼公司設(shè)計，但主要性能跟以往的AU640根本保持一致。測光點為27個，R2試劑在10~11點參加。以下為AU400/600/640等型號設(shè)參數(shù)需了解的儀器性能：Samplevol〔樣品量〕：2~50,可以按0.5ul為單位增減。Reagent1vol〔第一試劑量〕：25-300,可以按1ul為單位增減。Dilvol(稀釋液-吐水量)：一般用濃縮試劑時才用。Reagent2vol〔第二試劑量〕：25-300，可以按1為單位增減。Dilvol(稀釋液-吐水量)：一般用濃縮試劑時才用。第二試劑是固定的10-11點之間參加的。測定波長共有13種：340,380,410,450,520,540,570,600,660,700,750,800nm。Method〔方法學(xué)〕共六種：End,Rate,Fixed;End1,Rate1,Fixed1。前三種與后三種的差異為：前三種是以試劑為空白的，后三種是以比色杯為空白的。Reaction〔反響方向〕：-，+。End與Fixed法不起作用，但是Rate法一定要輸正確。Linearity〔線性〕：Fst，Lst，Rate法才輸入，一般國產(chǎn)試劑30%；進口試劑：15%。No-Lag-Time：Rate法才輸入，在讀點期內(nèi)，如果反響太快，超過線性〔Linearity限〕儀器會自動用線性比擬好的那一段來計算。試劑空白OD限：Fst指的是0點，Lst指的是27點。只對Rate法有用，一般向下的反響，輸0.9—2.5，向上的反響-2.0—0.8。以下列圖顯示屏幕上的根本顯示模型貝克曼：CX3、4、5、7、9、LX20、DXC800，貝克曼儀器是作為急診用的優(yōu)先選擇儀器，其有較高的準確度，精細度和穩(wěn)定性，抗穿插污染也是一流的，但不適合常規(guī)大量樣本的檢測，其試劑消耗量也是現(xiàn)有儀器中比擬大的。貝克曼儀器波長數(shù)為10個，340,380,410,470,520,560,600,650,670,700nm。監(jiān)測時間不是以周期〔點〕計，而是以秒來計，每8S測一次吸光度。加樣時間為第0s,第二次灌注時間為-180s，或9~738s。貝克曼儀器必須用兩個波長測定，否則儀器不運行，在設(shè)參數(shù)時必須符合這一規(guī)律。拜爾〔西門子〕：ADVIA2400，測試速度2400Test/小時，比色法1800Test/小時，電解質(zhì)600測試/小時。其中有波長：340/410/451/478/505/545/571/596/658/694/751/805/845/884nm14個。測試方法：終點法〔EPA〕、速率法〔RRA〕、兩點速率法〔2PA〕及多點均相免疫分析。微量取樣技術(shù)：所有的樣本按1:5比例進展預(yù)稀釋處理〔30ul樣品+120ul生理鹽水〕一般可作15個工程分析。微量技術(shù)加試劑保證每測試平均試劑體積為80ul-120ul，理論上1mL的試劑能做12.5個測試，最低也能做到8個測試。表達了其最大優(yōu)點就是省試劑。不同型號的生化儀每毫升試劑測試數(shù)是不一樣的，以下是各品牌的理論測試數(shù)：7170：180-380ul5.5T/ml7060：250-500ul4T/mlAU400:150-350ul6.6T/mlBECKMAN:200-330ul5T/mlTBA-40:120-360ul8.3T/mlTBA-120:80-360ul12.5T/mlADVIA2400：80-120ul12.5T/ml進口儀器4-5人份/毫升；國產(chǎn)儀器3-4人份/毫升各生化工程的臨床意義及其檢測原理：3.1肝功能測定工程3.1.1血清總膽汁酸TBA：膽汁酸是由膽固醇在肝臟中分解代謝所生成的，肝膽、腸、門靜脈都參與膽汁酸的自主循環(huán)過程。膽汁酸主要存在于肝腸循環(huán)系統(tǒng)并通過再循環(huán)起一定的保護作用。只有一少局部膽汁酸進入外周循環(huán)。促進膽汁酸肝腸循環(huán)的動力是肝細胞的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)棗吸收膽汁酸并將其分泌入膽汁，經(jīng)膽囊誘導(dǎo)的膽囊收縮，小腸的推進蠕動，回腸粘膜的主動運輸從血液經(jīng)門靜脈流入。血清中膽汁酸的水平是反映肝臟損傷的重要指征，一旦肝細胞發(fā)生病變，血中膽汁酸濃度極易升高。急性肝炎、慢活肝、肝硬化、肝癌，TBA結(jié)果明顯升高。與ALT比擬，急性肝炎、慢性活肝ALT、TBA都較敏感，但肝硬化、肝癌兩種結(jié)果差異明顯：TBA陽性率高達95%，而ALT陽性率僅為20%。因此，TBA測定用于監(jiān)測慢性肝病價值很大。其測定方法簡單，是一項很具實用價值的肝功能診斷指標。檢驗原理:血清中的膽汁酸〔3α-羥類固醇〕會被3α-羥類固醇脫氫酶〔3α-HSD〕及β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD+)特異性地氧化，生成3-酮類固醇，同時Thio-NAD+被復(fù)原成β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸復(fù)原型(Thio-NADH)。新生成的3-酮類固醇在3α-羥類固醇脫氫酶〔3α-HSD〕及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸復(fù)原型(NADH)存在下，復(fù)原成膽汁酸，同時NADH氧化成β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型〔NAD+〕。通過酶的循環(huán)反響，微量膽汁酸的量被放大。在405nm處測定Thio-NADH吸光度的變化值，可求得血清中膽汁酸的含量。3.1.2谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT/GPT：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，又稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶，主要存在于組織細胞中，正常狀況下只有極少量釋放入血液中，所以此酶在血清中活性很低。當組織發(fā)生病變時，組織細胞中ALT就大量釋放于血液，使血清中該酶的活性升高。血清中ALT主要來源于肝臟，各種肝炎活動期、肝癌、肝硬化和阻塞性黃疸時ALT的活性顯著增高，心肌堵塞時ALT的活性僅有輕度增高。檢驗原理:本法為IFCC推薦的測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的動力學(xué)方法，在ALT速率法測定中酶偶聯(lián)反響為：L-丙氨酸+2-酮戊二酸ALT丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+LDHL-乳酸+NAD+在340nm波長下檢測NADH的氧化速率，吸光度的下降速率與ALT活性成正比。3.1.3谷草轉(zhuǎn)氨酶AST/GOT：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，又稱谷草轉(zhuǎn)氨酶，此酶在組織中分布很廣，如心肌、橫紋肌、肝臟，其中心肌含量最高。心肌梗死后6-12小時開場增高，16-48小時達最高值，3-6天恢復(fù)正常。肝炎時，AST和ALT一樣明顯升高，急性期由于ALT去除率較慢，往往ALT大于AST活力?；謴?fù)時也是ALT較慢，AST/ALT比值小于1。如轉(zhuǎn)氨酶升高，且比值大于1常說明有慢性肝炎的可能，肝硬化則比值明顯升高。因此，AST活性的增高意味著心肌或肝細胞損害的發(fā)生。檢驗原理:本法為IFCC推薦的測定天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的動力學(xué)方法，在AST速率法測定中酶偶聯(lián)反響為：L-天門冬氨酸+α-酮戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+H+MDHL-蘋果酸+NAD+3.1.4γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶γ-GT：γ-GT主要用于診斷肝膽疾病。γ-GT明顯增高見于原發(fā)/繼發(fā)性肝癌、阻塞性黃疸、膽汁性肝硬化、胰頭癌、肝外膽道癌等。輕度或中度增高見于傳染性肝炎、肝硬化、胰腺炎以及嗜酒和長期服用某些藥物〔如苯巴比妥)者，在解釋酶活性增高的原因時應(yīng)全面考慮。檢驗原理:L-r-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺+雙甘氨肽γ-GTL-r-谷氨酰雙甘氨肽+5-氨基-2硝基苯甲酸3.1.5堿性磷酸酶ALP：骨骼系統(tǒng)疾患如纖維骨炎、變形性骨炎、成骨不全癥、骨質(zhì)軟化癥、佝僂病、轉(zhuǎn)移性骨瘤和骨折愈合期等可使ALP活性增高。肝膽疾患如阻塞性黃疸、急性或慢性黃疸型肝炎、肝癌和肝膿腫等，以及甲狀腺功能亢進、妊娠后期等均可使ALP活性增高。而重癥慢性腎炎、兒童甲狀腺功能不全、貧血、惡病質(zhì)等則使ALP活性下降。檢驗原理:IFCC推薦的標準化測定方法，其原理是以磷酸對硝基苯酚(4—NPP)為底物，2氨基—2—甲基—1—丙酮(AMP)為磷酸?；氖荏w物質(zhì)，增進酶促反響速率。4—NPP在堿性溶液中為無色，在ALP催化下，4—NPP分裂出磷酸基團，生起游離的對硝基苯酚(4—NP)，后者在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式構(gòu)造，呈現(xiàn)較深的黃色。在波長405nm處監(jiān)測吸光度增高速率，計算ALP活性單位。3.1.6白蛋白ALB：血清白蛋白在肝臟合成。在營養(yǎng)不良的病人中可看到很低水平的血漿白蛋白。另外，血液稀釋或由于營養(yǎng)不良，肝臟疾病使合成白蛋白能力下降，或由于腎病綜合癥、蛋白喪失性腸道疾病等均可導(dǎo)致低白蛋白。高白蛋白血癥則常見于脫水或血液濃縮。檢驗原理:在pH=4.2的酸性條件下，白蛋白作為一種陽離子，結(jié)合陰離子染料溴甲酚綠(BCG)，生成藍綠色復(fù)合物，在波長630nm處有吸收峰。其吸光度與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標準比擬，可求得血清中白蛋白的含量。3.1.7總蛋白TP：血液中水分增加，營養(yǎng)不良和消耗增加，肝臟疾病以及腎病綜合癥等均可導(dǎo)致總蛋白水平下降。脫水癥及免疫球蛋白增加的疾病則可使血清總蛋白水平增高。檢驗原理:在堿性溶液中，血清蛋白與二價銅離子反響生成紫色絡(luò)合物(雙縮脲反響〕，顏色深淺與總蛋白的濃度成正比例關(guān)系。3.1.8總膽紅素TBIL/直接膽紅素DBIL：膽紅素與重氮化對氨基苯磺酸〔DSA〕反響生成一種紅色偶氮染料，在546nm波長處染料的吸光度與樣本中膽紅素的濃度成正比。水溶性膽紅素葡萄糖醛酸直接與重氮化對氨基苯磺酸反響，而白蛋白結(jié)合的間接膽紅素只有在促進劑作用下才能反響，總膽紅素=直接膽紅素+間接膽紅素。檢驗原理:膽紅素與重氮化對氨基苯磺酸〔DSA〕反響生成一種紅色偶氮染料，在546nm波長處染料的吸光度與樣本中膽紅素的濃度成正比。水溶性膽紅素葡萄糖醛酸直接與重氮化對氨基苯磺酸反響，而白蛋白結(jié)合的間接膽紅素只有在促進劑作用下才能反響，總膽紅素=直接膽紅素+間接膽紅素。3.1.9α-L巖藻糖苷酶AFU：AFU是溶酶體酶，其作用是分解巖藻糖甘油結(jié)合物。血清α-L-巖藻糖苷酶〔AFU)是肝細胞肝癌診斷的一個新標記物。在甲胎蛋白〔AFP)陰性的原發(fā)性肝癌病例中，大約有70％～85％出現(xiàn)AFU陽性結(jié)果，而且小細胞肝癌病人血清AFU的陽性率高于AFP。同時測定AFU與AFP，可使原發(fā)性肝癌的陽性檢出率從單獨測定AFP的70％左右提高到90%～94％。因此，檢測血清AFU活性，對肝癌的早期診斷和肝癌高發(fā)人群的篩查均有重要意義。檢驗原理:2-氯-4-硝基苯酚-α-L-巖藻吡喃糖苷在酶的水解作用下生成2-氯-4-硝基苯酚和α-L-巖藻糖，可用速率法監(jiān)測2-氯-4-硝基苯酚，405nm波長處的吸光率的上升速率。反響速率與α-L-巖藻糖苷酶的含量成正比，可計算出樣本中α-L-巖藻糖苷酶的活力。3.1.105’-核苷酸酶5’-NT：5’-NT是一種特殊的水解酶。能特異性的將次黃嘌呤核苷酸水解為次黃苷和磷酸，此酶廣泛分布在人體和動物的組織中，5’-NT經(jīng)肝細胞膜進入膽汁，隨之進入血清中，是檢測肝膽疾病的重要指標。肝內(nèi)外膽管阻塞，肝癌和伴隨循環(huán)轉(zhuǎn)移的乳房切除術(shù)后的病人此酶升高明顯。診斷肝膽疾病和肝癌，5’-NT較其他酶類更敏感。檢驗原理：次黃嘌呤核苷酸+H2O5’-NT次黃苷+磷酸次黃苷+磷酸核苷酸磷酸化酶次黃嘌呤+核酸-1-磷酸次黃嘌呤+2H2O+2O2黃嘌呤氧化酶尿酸+2H2O22H2O2+EHSPT+4-AAPOP4H2O+紅色醌類3.1.11腺苷脫氨酶ADA：ADA活性是反映肝損傷的敏感指標，可作為肝功能常規(guī)檢查工程之一，與ALT或GGT(γ-GT)等組成肝酶譜，能較全面地反映肝臟病的酶學(xué)改變。血清中ADA活性的測定可①用于判斷急性肝損傷及殘留病變；②協(xié)助診斷慢性肝病；③有助于肝纖維化的診斷④有助于黃疸的鑒別：ADA在良惡性難辨的滲出液鑒別診斷上有重要價值。結(jié)核性胸腹水ADA活性顯著增高，癌性胸腹水不增高。⑤此外，腦脊液ADA檢測可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷和鑒別診斷的重要指標，結(jié)核性腦膜炎ADA活性顯著增高，病毒性腦炎不增高，顱內(nèi)腫瘤及中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病稍增高。ADA檢驗原理:ADA腺苷+H20次黃苷+NH3PNPXOD次黃苷+Pi次黃嘌呤+1－磷酸核苷PNPXODPOD次黃嘌呤+H20+2O2尿酸+2H2O2POD2H2O2+4-AA+EHSPT4H2O+醌(550nm)ADA酶解腺苷產(chǎn)生次黃苷，再應(yīng)用嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)酶解次黃苷產(chǎn)生次黃嘌呤，然后通過黃嘌呤氧化酶(XOD)的作用，生成H2O2，再在過氧化物酶(POD)作用下生成醌色素。通過測量550nm處吸光度上升的速度，計算ADA的活性大小。3.1.12膽堿酯酶CHE：膽堿酯酶可用于有機磷殺蟲劑和戰(zhàn)爭劑急慢性中毒的診斷。在病情嚴重的肝炎患者中，約有五分之四的病人膽堿酯酶降低至正常的60%，危重病人可降至正常的10%以內(nèi)，甚至完全缺乏。另外，慢性活動型肝炎、肝硬化均可導(dǎo)致膽堿酯酶活力下降。檢驗原理:膽堿酯酶催化水解丁酰硫代膽堿酯酶形成膽堿酯酶和丁酸鹽。黃色三價鐵氰化鉀轉(zhuǎn)化為無色二價亞鐵氰化鉀，吸光度降低程度與樣本中膽堿酯酶活性成正比關(guān)系。3.2血脂類測定工程3.2.1甘油三酯TG：甘油三酯升高：是冠心病的誘因之一。可引起冠狀動脈粥樣硬化、心肌堵塞、糖尿病、原發(fā)性高血脂癥、肥胖癥、急性胰腺炎、膽道梗阻、極度貧血等。甘油三酯降低：有嚴重營養(yǎng)不良，脂肪消化吸收障礙，甲亢等。檢驗原理:甘油三酯經(jīng)酯酶水解被測定，生成的過氧化氫，4-氨基安替比林和4-氯酚在過氧化物酶催化下生成醌亞胺。有色物質(zhì)造成吸光度的改變與甘油三酯的濃度成正比。3.2.2膽固醇TCHO:長期的高膽固醇、高飽和脂肪和高熱量飲食，遺傳因素、缺少運動、腦力勞動、精神緊張等可使膽固醇升高；遺傳因素、甲亢、營養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病等可使膽固醇降低。檢驗原理:膽固醇經(jīng)酶水解和氧化被測定。在酚和過氧化物酶存在情況下，過氧化氫和4-氨基安替比林形成有顏色的醌類物質(zhì)。3.2.3高密度脂蛋白膽固醇HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇被視為防止冠心病的一種保護性脂類成分，與低密度脂蛋白膽固醇一起對冠心病的危險因素進展評價。檢驗原理:乳糜微粒，極低密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇通過與抗人β-脂蛋白抗體反響被特異性消除和破壞，在過氧化氫酶作用下水解。剩余的高密度脂蛋白膽固醇在參加特異性的外表活化劑后經(jīng)膽固醇脂酶(CE)及膽固醇氧化酶(COD)等特異的酶促反響被測定。通過對藍色結(jié)合物吸光度的測量對應(yīng)得出HDL的濃度。這種方法要比其它檢測方法更加特異。3.2.4低密度脂蛋白膽固醇LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)被認為是導(dǎo)致冠心病(CHD〕的脂質(zhì)成份,與高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C〕同時檢測，用于冠心病的診斷和風險評估。檢驗原理:本檢測中第一步反響通過酶反響特異性去除乳糜微粒、極低密度脂蛋白和高密度脂蛋白膽固醇，保護LDL不與酶進展反響。第一步：HDL、VLDL、CM+H2O+O2外表活性劑膽甾烯酮+脂肪酸+H2O22H2O2過氧化物酶2H2O+O2第二步：通過酶反響和特殊的外表活性劑測定剩下的低密度脂蛋白膽固醇。通過對藍色結(jié)合物吸光度的測量，得出LDL的濃度。LDL-C+H2O+O2外表活性劑膽甾烯酮+脂肪酸+H2O2H2O2+色原過氧化物酶有顏色的醌類物質(zhì)+H2O3.2.5載脂蛋白A1APOA1：載脂蛋白的測定是評價心血管疾病危險因素的指標，對于發(fā)現(xiàn)和診斷載脂蛋白異常，研究載脂蛋白在脂類代謝和動脈粥樣硬化的發(fā)生有重要意義。ApoAⅠ(和ApoAⅡ一起)占HDL蛋白的80%-90%，因此，血清中ApoAⅠ可以代表HDL水平，與HDL-C呈明顯正相關(guān)。ApoAⅠ降低主要見于高脂血癥、冠心病、腦血管病、ApoAⅠ缺乏癥、家族性低α脂蛋白血癥、魚眼病等。檢驗原理:當樣品與緩沖液和抗體混合，樣品中的載脂蛋白A1與試劑中的抗人載脂蛋白A1抗體特異性結(jié)合,形成濁度增加，通過測定濁度的透光率判斷樣品中的載脂蛋白A1含量。3.2.6載脂蛋白BAPOB：載脂蛋白的測定是評價心血管病危險因素的指標，對于發(fā)現(xiàn)和診斷載脂蛋白異常，研究載脂蛋白在脂代謝和動脈粥樣硬化的發(fā)生有重要意義。ApoB是LDL的主要蛋白質(zhì)，因此，血清中ApoB主要代表LDL水平，與LDL－C成顯著正相關(guān)。高ApoB是冠心病的危險因素，也是較好的動脈粥樣硬化標志物。銀屑病患者ApoB也可升高。檢驗原理:當樣品與緩沖液和抗體混合，樣品中的載脂蛋白B與試劑中的抗人載脂蛋白B抗體特異性結(jié)合,形成濁度增加，通過測定濁度的透光率判斷樣品中的載脂蛋白B含量。3.2.7脂蛋白aLP〔a〕：是含有單獨的載脂蛋白(a)的脂蛋白，脂質(zhì)組成構(gòu)造與LDL極其相似，密度位于低密度脂蛋白和高密度脂蛋白之間。1963年Berg發(fā)現(xiàn)Lp(a)時，因其病理意義不明，未被引起重視。1987年Mclean發(fā)現(xiàn)Lp(a)的一級構(gòu)造與纖溶酶原局部一樣，作為動脈粥樣硬化的獨立因子越來越受到人們的重視。LP〔a〕水平的差異是由遺傳因素決定的，受生活方式影響并不大。血清中高濃度的LP〔a〕可用為動脈粥樣硬化和冠心病危險的一種有意義的指標。流行病學(xué)研究說明血清膽固醇正常，而血清脂蛋白〔a〕水平超過30mg/dl的人患冠心病的危險增加2倍。如果LDL和LP〔a〕水平同時升高其危險性增加8倍。檢驗原理：當樣品與緩沖液和抗體混合，樣品中的脂蛋白〔a〕與試劑中的抗人脂蛋白〔a〕抗體特異性結(jié)合,生成不溶性的沉淀物，引起濁度的增加，通過測定濁度的透光率判斷樣品中的脂蛋白〔a〕含量。3.3腎功能測定工程3.3.1尿素UREA：血清尿素升高：正常生理狀況下的高蛋白飲食。病理狀況下的原因之一是由于尿素排泄減少，如腎功能損害引起的腎小球濾過率降低，結(jié)石、腫瘤、前列腺肥大引起的尿道或輸尿管阻塞使尿量排出減少，低血壓或腎血流減少所致的尿形成減少。病理狀況下另一原因是蛋白分解代謝的增加、可見于長期發(fā)燒、腎上腺皮質(zhì)類固醇分泌的增加、使用皮質(zhì)激素類藥物、胃或十二指腸出血。檢驗原理:本法為測定尿素的酶學(xué)方法，反響式如下：尿素+2H2O脲酶2NH4++CO2α-酮戊二酸+NH4++NADHGLDHL-谷氨酸+NAD++H2O尿素和水在脲酶作用下生成氨和二氧化碳。產(chǎn)生的氨與α-酮戊二酸鹽和NADH在谷氨酸脫氫酸〔GLDH〕催化下形成谷氨酸鹽和NAD+。其吸光度降低速率與尿素濃度成比例。3.3.2尿酸UA〔雙試劑〕:血清中尿酸增高常見于痛風。另外核酸代謝增加的白血病多發(fā)性骨髓瘤、紅細胞增多癥等患者血清中尿酸亦常見增高；其次腎功能降低、鉛中毒、酒精中毒、腫瘤化療、放射治療后和妊娠毒血癥等均可使血清尿酸增高。血清尿酸的減少可見于服用可的松、雙香豆素、丙磺舒等藥物以后。檢驗原理:尿酸酶水解尿酸，產(chǎn)生的H2O2在過氧化物酶的催化下與3，5一二氯-2-羥基苯磺酸(DCHBS)和4-氨基安替比林(4-AAP)反響，形成一種紫紅色醌亞胺。3.3.3肌酐CRE〔苦味酸〕:肌肉中的磷酸肌酸變成肌酸后，再經(jīng)過脫水生成肌酐,肌酐與肌肉組織有密切的關(guān)系，肌酐的生成量可作為判斷肌肉疾病的有用指標。另外，尿中肌酐的排泄量與肌肉總量成一定比例，不受飲食和尿量的影響，經(jīng)腎小球濾過后也不被腎小管重吸收，因此可用來檢測腎小球功能。腎臟疾病初期，一般血清肌酐濃度不升高。直至腎臟實質(zhì)性損害，如腎功能不全、尿毒癥和腎功能障礙引起血清肌酐濃度升高。檢驗原理:肌酐在堿性溶液中與苦味酸形成一種桔紅色絡(luò)合物。該絡(luò)合物的吸光度與樣品中肌酐濃度成正比。3.3.4肌酐CRE〔酶法〕:肌肉中的磷酸肌酸變成肌酸后，再經(jīng)過脫水生成肌酐,肌酐與肌肉組織有密切的關(guān)系，肌酐的生成量可作為判斷肌肉疾病的有用指標。另外，尿中肌酐的排泄量與肌肉總量成一定比例，不受飲食和尿量的影響，經(jīng)腎小球濾過后也不被腎小管重吸收，因此可用來檢測腎小球功能。腎臟疾病初期，一般血清肌酐濃度不升高。直至腎臟實質(zhì)性損害，如腎功能不全、尿毒癥和腎功能障礙才引起血清肌酐濃度升高。檢驗原理:反響分兩步，在第一步，存在于標本中的內(nèi)源性肌酸被分解生成水，不對本反響產(chǎn)生影響。樣本中的肌酐在各種酶的作用下生成紅色的醌色素，根據(jù)比色法測定醌色素的量，從而計算出肌酐的含量。3.3.5胱抑素CCYS-C:腎小球濾過率〔GFR〕是檢測腎功能的最直接的指標，在腎病早期就出現(xiàn)GFR的降低。準確的腎小球濾過率的檢測能夠反映腎病的進程，指導(dǎo)用藥從而防止腎臟功能的損傷。目前，常用肌酐去除率的方法來評價腎小球濾過率。血清中的肌酐中度特異，但是靈敏度低，只有當GFR下降到50％或更低時才有顯著升高。并且肌酐的升高受肌肉重量，體外表積，飲食攝入影響很大，也就是說和年齡，性別，身高都會影響肌酐量。胱抑素C〔Cys-C〕是一種小分子量的胱氨酸蛋白酶抑制劑。所有的有核細胞都能穩(wěn)定地產(chǎn)生Cys-C。Cys-C幾乎完全被腎小球濾過，然后由腎小管重吸收，并且腎小管不分泌，也不通過腎小管排泄。Cys-C不受炎癥反響、性別、肌肉以及年齡變化的影響。所以Cys-C是一個非常穩(wěn)定的反映腎小球濾過率的指標檢驗原理:樣本中的Cys-C與超敏化的抗Cys-C抗體膠乳顆粒試劑反響，形成免疫復(fù)合物，在570nm波長處檢測其吸光度的變化，其變化程度與樣本中的Cys-C含量成正比。3.3.6β2-微球蛋白β2-MG:?2微球蛋白是一種幾乎在所有體細胞的細胞膜上部都存在的低分子量〔11000道爾頓〕蛋白質(zhì)，游離的?2-微球蛋白是細胞裂解的產(chǎn)物。它是由腎小球分泌的，然后被腎小管細胞吸收和分解。腎小管功能異常時，血清中BMG、尿液中的BMG濃度升高。細胞破碎后，濃度顯著升高，如在急性白血病中血清中的BMG濃度升高。3.3.7尿微量白蛋白MALB:微量白蛋白尿是糖尿病腎病最早的臨床表現(xiàn)，是心血管發(fā)病率和死亡顯著增高的一個標志。早期檢測微量白蛋白尿能夠使個體化的積極治療及早實施。新近發(fā)表的幾項臨床試驗已經(jīng)顯示早期發(fā)現(xiàn)微量白蛋白尿并盡早治療，可以預(yù)防或延緩糖尿病腎病進展至終末期腎病的效果。檢驗原理：白蛋白與試劑中抗人白蛋白抗體在緩沖液中快速形成抗原抗體復(fù)合物，使反響液出現(xiàn)濁度。當反響液中保持抗體過剩時，形成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加，反響液的濁度亦隨之增加，與校準品對照，即可算出未知白蛋白的含量。3.3.9視黃醇結(jié)合蛋白RBP:視黃醇結(jié)合蛋白是反映機體營養(yǎng)狀態(tài)的一個靈敏指標，特別是蛋白質(zhì)-熱卡營養(yǎng)不良。內(nèi)臟的蛋白質(zhì)是作為蛋白質(zhì)-能量營養(yǎng)不良傳統(tǒng)的實驗室指標，而根據(jù)營養(yǎng)狀態(tài)視黃醇結(jié)合蛋白RBP能做出更快反響。RBP主要在肝臟合成，因此血清中RBP的降低和增加和肝臟疾病有關(guān)，并受肝臟疾病的出現(xiàn)和嚴重程度的影響。在肝病，肝硬化及急、慢性肝炎的血清RBP水平均顯著降低。RBP可作為腎小管損傷的早期診斷指標。視黃醇結(jié)合蛋白RBP在尿中穩(wěn)定性強，不易分解，不受pH和血壓干擾。在腎近曲小管損傷時，其尿排量明顯增加，故尿中RBP排量增加可作為腎近曲小管損傷的標志物。當腎臟濾過功能降低時，血中RBP因貯積而顯示濃度升高。血液或尿液中的RBP濃度可以作為一種理想的腎功能指標應(yīng)用于臨床。檢驗原理:以膠乳增強免疫比濁法為測定原理，樣品中的視黃醇結(jié)合蛋白和被乳狀液粒吸附的抗體引起抗原抗體反響，形成免疫復(fù)合物，在570nm波長處檢測其濁度的變化，其變化程度與樣本中的視黃醇結(jié)合蛋白成正比。3.4心肌類測定工程3.4.1肌酸激酶CK:各種類型進展性肌萎縮時，血清CK活性均可升高。神經(jīng)因素引起的肌萎縮如脊髓灰白質(zhì)炎時活性正常，皮肌炎時CK活性可有輕度或中度增高。急性心肌堵塞后3-8小時就開場增高，可高達正常上限的10-12倍，病毒性心肌炎時也明顯升高，對診斷及預(yù)后有參考價值。檢驗原理:磷酸肌酸+ADPCK肌酸+ATPATP+葡萄糖HK6-磷酸葡萄糖+ADP葡萄糖-6-磷酸葡萄糖+NADP+G-6-P-DH6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+G-6-P-DH：6-磷酸葡萄糖脫氫酶CK：肌酸激酶HK：己糖激酶3.4.2肌酸激酶同功酶CK-MB:在急性心肌堵塞3～8小時升高，9～30小時到達峰值，48-72小時恢復(fù)正常。CK－MB主要用于診斷急性心肌堵塞。但CK-MB對心肌并非完全特異，外科手術(shù)和骨骼疾病時也會升高。檢驗原理:本法為測定CK-MB活性的免疫抑制酶動力學(xué)方法。在抗CK-M單體抗體存在的條件下，標本中全部CK-MM活性和50%的CK-MB活性被抑制，而CK-MB和CK-BB中B亞基的活性則不受影響。由于循環(huán)中CK-BB活性可忽略不計，將CK-B活性測定值乘以2倍即得CK-MB活性。磷酸肌酸+ADPCK肌酸+ATPATP+葡萄糖HK6-磷酸葡萄糖+ADP葡萄糖-6-磷酸葡萄糖+NADP+G-6-P-DH6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+3.4.3a-羥丁酸脫氫酶a-HBDH:α-羥丁酸脫氫酶的活性定義為：當用α-酮丁酸作為底物時所獲得的乳酸脫氫酶的活性。LDH-1較其他同工酶對α-酮丁酸有更大的親合力，因此當用α-酮丁酸作為底物時，含LDH-1多的組織如血清、心肌、紅血球等就具有較高的活性，即α-HBDH活性高；而肝、骨胳肌等具有較低的活性，即α-HBDH活性低。常用α-HBDH來測量血清中LDH-1的活性。α-HBDH與LDH、GOT、CK、CK-MB一起構(gòu)成了心肌酶譜。檢驗原理:采用德國臨床化學(xué)協(xié)會(DGKC)推薦的方法改進而成。樣本中的α-羥丁酸脫氫酶催化-氧代丁酸生成-羥丁酸，同時，復(fù)原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸被氧化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，從而引起340nm處吸光度的下降，此種變化與樣本中的-羥丁酸脫氫酶活性成正比。3.4.4乳酸脫氫酶LDH:乳酸脫氫酶增高主要見于心肌堵塞、肝炎、肺堵塞、某些惡性腫瘤、白血病等。某些腫瘤轉(zhuǎn)移所致的胸腹水中乳酸脫氫酶活力往往升高。檢驗原理:采用德國臨床化學(xué)協(xié)會〔DGKC〕推薦的方法改進而成。樣本中的乳酸脫氫酶催化乳酸生成丙酮酸，同時，氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸被復(fù)原為復(fù)原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，從而引起340nm處吸光度的上升，此種變化與樣本中的乳酸脫氫酶活性成正比。3.4.5乳酸脫氫酶同工酶LDH1:乳酸脫氫酶增高主要見于心肌堵塞、肝炎、肺堵塞、某些惡性腫瘤、白血病等。某些腫瘤轉(zhuǎn)移所致的胸腹水中乳酸脫氫酶活力往往升高。檢驗原理:采用德國臨床化學(xué)協(xié)會〔DGKC〕推薦的方法改進而成。樣本中的乳酸脫氫酶催化乳酸生成丙酮酸，同時，氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸被復(fù)原為復(fù)原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，從而引起340nm處吸光度的上升，此種變化與樣本中的乳酸脫氫酶活性成正比。3.4.6同型半胱氨酸HCY:同型半胱氨酸(HCY〕是蛋氨酸代謝產(chǎn)生的一種含硫氨基酸，80%的HCY在血中通過二硫鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合，只有很少一局部游離同型半胱氨酸參加循環(huán)。Hcy水平與心血管疾病密切相關(guān)。是心血管疾病發(fā)病的一個重要危險因子。血液中增高的HCY因為刺激血管壁引起動脈血管的損傷，導(dǎo)致炎癥和管壁的斑塊形成，最終引起心臟血流受阻。高同型半胱氨酸尿癥患者，由于嚴重遺傳缺陷影響Hcy代謝，造成高Hcy血癥輕微的遺傳缺陷或B族維生素營養(yǎng)缺乏會伴隨中度或輕度的Hcy升高，也會增加心臟病的危險。Hcy升高還可引起神經(jīng)管畸形及先天性畸形等出生缺陷類疾病。檢驗原理:基于小分子捕獲技術(shù)SMT的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶,Hcy被轉(zhuǎn)化為游離型后，通過與共價底物反響，循環(huán)放大，同時產(chǎn)生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉(zhuǎn)化為NAD,樣本中的Hcy濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率成正比.3.4.7高敏C反響蛋白hs-CRP:C-反響蛋白〔CRP〕是組織損傷或發(fā)炎刺激時肝細胞合成的最敏感的急性時相反響蛋白之一。外傷、炎癥、囊腫和組織再生等，都會令血清中的CRP在24?—28小時內(nèi)升高，可達正常值的2000倍。它對心肌損傷不具有專一性。雖然傳統(tǒng)意義上CRP的升高主要用于監(jiān)測和查明發(fā)炎的程度，但是幾項研究已經(jīng)報到了CRP低濃度的升高，〔Hs-CRP〕在預(yù)測心血管外周動脈血管性疾病的危險性上有重大的意義。它的濃度高于10mg/L時，意味著有明顯的發(fā)炎產(chǎn)生。臨床不應(yīng)該僅僅從單一結(jié)果下結(jié)論，而是綜合臨床和其它實驗數(shù)據(jù)來判斷。檢驗原理：人血清中高敏c反響蛋白Hs-CRP與其相應(yīng)抗體在液相中相遇，立即形成抗原-抗體復(fù)合物，并形成一定濁度。與通過同樣處理的校準血清比擬，定量檢測出樣品中高敏c反響蛋白的含量。3.4.8肌鈣蛋白lcTnl:肌鈣蛋白I是一種由肌鈣蛋白-原肌球蛋白有序構(gòu)成的復(fù)合抑制蛋白，它增強鈣離子對橫紋肌動蛋白ATP酶的活性的敏感性，由此調(diào)節(jié)橫紋肌動和肌球蛋白的相互作用。隨著對心肌肌鈣蛋白(cTn)深入研究，無論是對心肌的特異性還是診斷敏感性，CK-MB的地位都受到了嚴重挑戰(zhàn).cTn被認為是目前最好確實定標志物，正逐步取代CK-MB成為AMI的診斷“金標準〞。檢驗原理：將特異性抗體結(jié)合于膠乳顆粒外表，樣本與膠乳試劑在緩沖液中混合，樣本中的肌鈣蛋白Ⅰ與膠乳顆粒外表的抗體結(jié)合，使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯(lián)，在600nm附近測量溶液濁度的增加，其增加的程度與樣本中的肌鈣蛋白Ⅰ含量相關(guān)。3.4.9肌紅蛋白Mb:測定血清肌紅蛋白可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標。肌紅蛋白增高：見于急性心肌梗死早期、急性肌損傷、肌營養(yǎng)不良、肌萎縮、多發(fā)性肌炎、急性或慢性腎功能衰竭、嚴重充血性心力衰竭和長期休克等。在心肌梗死后1.5h即可增高，但1～2d內(nèi)即恢復(fù)正常。檢驗原理：本方法是一種膠乳自動增強免疫比濁法。將特異抗體結(jié)合于膠乳顆粒外表，標本與膠乳顆粒在緩沖液中混合，標本中的Mb與膠乳顆粒外表的抗體結(jié)合，使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯(lián)，在600nm附近測量溶液濁度增加，其增加的程度與標本中的Mb含量相關(guān)。3.5糖代謝類測定工程3.5.1葡萄糖GLU〔OX〕:生理性血糖增高:一般發(fā)生在餐后1-2小時，注射葡萄糖后，情緒緊張時，腎上腺素分泌增多或注射該藥后。病理性高血糖：常見于糖尿病患者；升血糖的激素分泌增加，如垂體前葉功能亢進、腎上腺皮質(zhì)功能亢進、甲狀腺功能亢進、嗜鉻細胞瘤、胰島α細胞瘤等；顱內(nèi)壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內(nèi)出血、腦膜炎等；有脫水引起的血糖濃縮，如嘔吐，腹瀉、高熱等。生理性血糖降低：見于饑餓和劇烈運動后，口服降糖藥物后；病理性低血糖則見于胰島β細胞瘤引起的胰島素分泌過多癥；升血糖的激素分泌減少，血糖損失過多。檢驗原理:葡萄糖經(jīng)葡萄糖氧化酶氧化，形成的過氧化氫在過氧化物酶催化下與酚和4-氨基安替(4-AAP)比林生成紅色的醌亞胺。葡萄糖GLU〔HK〕檢驗原理:葡萄糖經(jīng)己糖激酶(HK)作用轉(zhuǎn)化成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)，然后再經(jīng)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-P-DH)作用在ATP和NAD參與下，轉(zhuǎn)化成6-磷酸葡萄糖酸(6-P-GA)和NADH，其吸光度增加與樣品中葡萄糖濃度成正比。葡萄糖+ATPHKG-6-P+ADPG-6-P+NAD+G-6-P-DH6-P-GA+NADH+H+3.5.2糖化血紅蛋白HbA1c:紅細胞的平均壽命為120天，在這期間糖化血紅蛋白持續(xù)不斷的形成。由于紅血球中的糖化血紅蛋白含量反映過去4至6周血中葡萄糖的平均含量，并且在紅血球的整個壽命中是穩(wěn)定的，所以糖化血紅蛋白的測量對糖尿病人的長期監(jiān)護提供非常有價值的診斷依據(jù)。檢驗原理:HbA1c檢測通過溶解破壞全血樣本釋放大量蛋白酶。此過程中釋放出氨基酸，包含從血紅蛋白β鏈中的甘油纈氨酸。甘油纈氨酸作為FVO酶的底物,通過應(yīng)用過氧化物酶催化反響特異性測量相配色團的濃度。3.5.3β-羥丁酸D3-H：正常人血液中β-羥丁酸含量極少，這是人體利用脂肪氧化供能的正?，F(xiàn)象。但在某些生理情況(饑餓、禁食)或病理情況下(如糖尿病)，糖的來源或氧化供能障礙，脂發(fā)動增強，脂肪酸就成了人體的主要供能物質(zhì)。脂肪酸分解代謝產(chǎn)生酮體(β-羥丁酸含量最多，約占78%，乙酰乙酸約占20%，丙酮約占2%量超過肝外組織利用的能力，二者之間失去平衡，血中β-羥丁酸濃度就會過高，導(dǎo)致酮血癥和酮尿癥。乙酰乙酸和β-羥丁酸都是酸性物質(zhì)，因此酮體在體內(nèi)大量堆積還會引起代謝性酸中毒。檢驗原理：本實驗采用酶動力學(xué)法來測定血液或血清中的D-3-羥丁酸。在D-3-羥丁酸脫氫酶的催化作用下，D-3-羥丁酸被氧化，生成乙酰乙酸，同時NAD+被復(fù)原為NADH，NADH在340nm處有最大吸收峰，其吸光度值與D-3-羥丁酸的濃度呈正相關(guān)。3.5.5果糖胺FMN：果糖胺代表一組糖基化了的血液與組織蛋白質(zhì)。由蛋白質(zhì)的非酶糖化反響而形成的糖化蛋白被稱為果糖胺，其形成的量取決于血糖濃度。依血糖水平而形成的果糖胺在1-3周內(nèi)發(fā)生代謝變化，這與大多數(shù)血清蛋白質(zhì)的代謝周期一樣，因此果糖胺的濃度反映了在這一段時間內(nèi)持續(xù)變化著的血糖濃度的均值，測定果糖胺濃度對于糖尿病來說，是一個理想而快速的血糖監(jiān)測指標。檢驗原理:標本中參加試劑R1(NBT試劑/緩沖液),該比色方法基于在堿性條件下以烯醇形式存在的果糖胺復(fù)原為甲醛。在此過程中形成的顏色與濃度成正比。3.6胰腺功能3.6.1α-淀粉酶α-AMY：血清淀粉酶測定主要用于診斷急性胰腺炎，在急性發(fā)作期，AMY活性明顯升高。尿淀粉酶在發(fā)病后12-24小時也會升高。其他急性疾病，如潰瘍病穿孔、急性腹膜炎、腸梗性胰腺炎、胰腺腫瘤以及流行腮腺炎、唾液腺化膿或腺管堵塞時，血清淀粉酶也會有所升高。而對于各種肝臟疾病、肝炎、肝硬化、肝膿腫、肝癌及膽囊炎等，則淀粉酶活性下降。檢驗原理:α-淀粉酶檢測中使用一種新的底物2－氯－4－硝基苯－麥芽丙糖苷〔CNPG3〕。該底物直接與淀粉酶反響而不需輔酶，從底物中釋放出2－氯－4－硝基苯〔CNP〕。405nm波長下監(jiān)測吸光度的變化。吸光度變化速率與樣本中淀粉酶活性成正比。3.6.2胰淀粉酶P-AMY：血清中胰淀粉酶測定主要用于診斷急性胰腺炎。在急性發(fā)作期淀粉酶活性顯著增高。尿中胰淀粉酶在發(fā)病后12-24小時也會升高。而對于各種肝臟疾病，如肝炎、肝硬化、肝癌及膽囊炎等，則淀粉酶活力下降。檢驗原理：胰淀粉酶胰淀粉酶PNPG7+5H2OPNPG3+PNPG2αα-葡萄糖苷酶PNPG3+PNPG2+H2OPNP+Glucose3.7營養(yǎng)3.7.1前白蛋白PA：血清前白蛋白是血清蛋白質(zhì)，其主要生理功能是運輸甲狀腺素和維生素A，并具有胸腺激素活性，可通過促進淋巴細胞的成熟來增加機體的免疫力。肝癌，肝硬化，慢性活動性肝炎，堵塞性黃疸患者PA均顯著降低，使早期肝功能損傷的指標。營養(yǎng)不良和急性感染的病人PA也可降低。檢驗原理：當樣品與緩沖液和抗體混合，樣品中的前白蛋白與試劑中的抗人前白蛋白抗體特異性結(jié)合,生成不溶性的沉淀物，引起濁度的增加，通過測定濁度的透光率判斷樣品中的前白蛋白含量。3.8凝血3.8.1D-二聚體DD：D-二聚體是纖維蛋白單體經(jīng)活化因子ＸIII交聯(lián)后，再經(jīng)纖溶酶水解所產(chǎn)生的一種特異性降解產(chǎn)物，是一個特異性的纖溶過程標記物。D-二聚體來源于纖溶酶溶解的交聯(lián)纖維蛋白凝塊。纖溶蛋白降解產(chǎn)物中，唯D-二聚體交聯(lián)碎片可反映血栓形成后的溶栓活性。因此,理論上，D-二聚體的定量檢測可定量反映藥物的溶栓效果、及可用于診斷、篩選新形成的血栓。心肌梗死、腦梗死、肺栓塞、靜脈血栓形成、手術(shù)、腫瘤、彌漫性血管內(nèi)凝血、感染及組織壞死等均可導(dǎo)致D-二聚體升高。檢驗原理：試劑中包含膠乳顆粒與抗D-二聚體的單克隆抗體結(jié)合。膠乳顆粒在600nm產(chǎn)生吸收，當和樣本中的D-二聚體發(fā)生凝集，在600nm吸光度上升，吸光度上升決定于D-二聚體的濃度。根據(jù)標準曲線可以檢測出樣本中D-二聚體含量。3.10免疫&風濕類測定工程3.10.1免疫球蛋白AIGA：意義：免疫球蛋白A的測定是一種表征免疫缺乏癥和骨髓瘤的重要手段。它在免疫系統(tǒng)的急性和慢性感染方面也占據(jù)重要地位。IgA占血清中總免疫球蛋白10%到15%，IgA的單體構(gòu)造形式類似于IgG。有10%的IgA是以IgA2多聚體形式存在，IgA2具有抵抗IgA1病原體細菌的破壞作用。分泌型IgA功能比擬重要，通常存在于淚液、汗液、唾液、乳汁及支氣管分泌物中。IgA的增加見于急性甲型肝炎、慢性攻擊性肝炎、肝后性或隱性肝硬化、主動性酒精肝、慢性感染、風濕性關(guān)節(jié)炎、多重皮膚病、混合性關(guān)聯(lián)組織疾病等。IgA降低常見于獲得性先天免疫缺陷癥、腸道疾病的蛋白質(zhì)流失及皮膚燒傷。檢驗原理:當樣品與緩沖液和抗體混合，樣品中的免疫球蛋白A試劑中的抗人免疫球蛋白A抗體特異性結(jié)合,生成不溶性的沉淀物，引起濁度的增加，通過測定濁度的透光率判斷樣品中的免疫球蛋白A含量。3.10.2免疫球蛋白GIGG：IgG是在人體血清中占主導(dǎo)地位的免疫球蛋白，它占到總Ig的70-75%，具有吞噬作用，能有效地激活補體活化途徑，從而中和毒素，移除致病抗原