實(shí)驗(yàn)二微生物培養(yǎng)與鑒定

實(shí)驗(yàn)二

微生物的培養(yǎng)與鑒定

(附：實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求)儀器分析實(shí)驗(yàn)(生物分析)1之前我們介紹過傳統(tǒng)的微生物分類鑒定，由于是以形態(tài)、生理生化等特征為依據(jù)，因此實(shí)驗(yàn)過程比較繁瑣，時(shí)間也比較長。微生物的快速鑒定和自動化分析技術(shù)

如何使微生物的鑒定快速、準(zhǔn)確、簡易和自動化，一直是微生物工作者的研究熱點(diǎn)。隨著微電子、計(jì)算機(jī)、分子生物學(xué)、物理、化學(xué)等先進(jìn)技術(shù)向微生物學(xué)的滲透和多學(xué)科的交叉，這方面的技術(shù)在微生物鑒定中被廣泛使用，推動了微生物學(xué)的發(fā)展。21．微量多項(xiàng)試驗(yàn)鑒定系統(tǒng)微量多項(xiàng)試驗(yàn)鑒定系統(tǒng)（細(xì)菌的自動化鑒定）是建立在數(shù)值（編碼）鑒定的基礎(chǔ)上的。常規(guī)(傳統(tǒng))分類鑒定需要測定項(xiàng)目眾多，不能適應(yīng)快速的需求，尤其臨床病原菌的鑒定。因此，應(yīng)運(yùn)而生的出現(xiàn)多種類型成套鑒定系統(tǒng)及編碼鑒定方法。3該方法的基本原理是針對微生物生理生化特征，配制各種培養(yǎng)基、反應(yīng)底物、試劑等，分別微量（約0.1mL）加入各個(gè)分隔室中（或用小圓紙片吸收），冷凍干燥脫水或不干燥脫水，各分隔室在同一塑料條或板上構(gòu)成檢測卡。4試驗(yàn)時(shí)加入待檢測的某一種菌液，培養(yǎng)2-48小時(shí)，觀察鑒定卡上各項(xiàng)反應(yīng)，按判定表判定試驗(yàn)結(jié)果，所得結(jié)果以數(shù)字方式表達(dá)（編碼），并與數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)(手冊或軟盤)對照，或輸入計(jì)算機(jī)后使用相應(yīng)的軟件，從而得出鑒定結(jié)果(包括屬、種的名稱，有的鑒定系統(tǒng)還可給予分類位置)。5目前，已應(yīng)用的快速、簡便的商品化鑒定系統(tǒng)很多，例如法國生物-默里埃(Bio-Merieux)公司的API(analyticproductsInc的簡稱)/ATB，瑞士羅氏公司的Micro-ID、Enterotube系統(tǒng)、Minitek系統(tǒng)，R/B系統(tǒng)、IDS系統(tǒng)以及Spectrum10系統(tǒng)等。國內(nèi)也有不少的編碼鑒定以及商品化的微型鑒定系列。6下面給大家介紹API/ATB系統(tǒng)中的API20E系統(tǒng)。API20E系統(tǒng)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定，可在24小時(shí)內(nèi)鑒定革蘭氏陰性的桿菌108種或項(xiàng)（腸桿菌科、弧菌科、非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌）。腸桿菌科在環(huán)境中及動物產(chǎn)品中非常普遍，其中部份是致病性(沙門氏、耶爾森氏等)7該系統(tǒng)的鑒定卡是一塊有20個(gè)分隔室的塑料條，分隔室由相連通的小管和小杯組成，各小管中含有不同的脫水培養(yǎng)基、試劑或底物等，每一分隔室可進(jìn)行一種生化反應(yīng)，個(gè)別的能進(jìn)行兩種反應(yīng)。

（上圖為陽性反應(yīng)。下圖為陰性反應(yīng)）89API20E需額外補(bǔ)充氧化酶結(jié)果孵育18-24小時(shí)，37oC鑒定可使用閱讀表編碼手冊APILABPLUS軟件10試驗(yàn)過程:按照要求，將菌液加入每一分隔室培養(yǎng)(有的還需要添加試劑)觀察鑒定卡上20個(gè)分隔室中的反應(yīng)變色情況，判定陽性或陰性編碼(每三個(gè)反應(yīng)項(xiàng)目編為1組，共有7組，每組中每個(gè)反應(yīng)項(xiàng)目定為一個(gè)數(shù)值，依次為1、2、4，各組中試驗(yàn)結(jié)果判定為陽性的記為“+”，并寫下其所定的數(shù)值，反應(yīng)為陰性的記為“—”，并寫為0，每組中的數(shù)值相加，便是該組的編碼數(shù)，這樣便形成了7位數(shù)的編碼)查閱API20E系統(tǒng)的檢索表或輸入計(jì)算機(jī)檢索，就能鑒定出該菌是什么菌種或生物型。1112API試劑盒及其配套試劑(API20E)培養(yǎng)盒 保持潮濕環(huán)境石臘油(容量:125ml)

覆蓋在指定小孔上懸浮液(容量:5ml)

用於調(diào)菌液附加試條 加進(jìn)指定的生化孔內(nèi)API20E試條 每個(gè)小孔載有風(fēng)乾的底物PSIpettes

接種管 挑菌落，混勻及接種安培架操作步驟1(API20E)分離單個(gè)菌落挑單個(gè)可疑菌落盡量避免使用高度選擇性培養(yǎng)基調(diào)制菌液懸浮液(容量:5ml)操作步驟2(API20E)將菌液接種到小管或小管及小杯(CIT,VP和GEL)將試條放進(jìn)培養(yǎng)盒內(nèi)將5ml無菌水放進(jìn)培養(yǎng)盒里利用石臘油覆蓋指定的生化孔(有劃線的孔)

ADH

ODC

H2S

URE把培養(yǎng)蓋蓋上（防水份蒸發(fā)）操作步驟3(API20E)把試條放進(jìn)孵育箱內(nèi)，利用指定溫度及時(shí)間

API20E:35-37oC，18-24小時(shí)按操作說明書規(guī)定，將附加試劑