實(shí)驗(yàn)三-細(xì)胞的活體染色

實(shí)驗(yàn)四細(xì)胞活體染色技術(shù)講解者：張學(xué)嬌學(xué)號(hào)：01011034日期：2012/10/26基本介紹實(shí)驗(yàn)?zāi)康母拍顚?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)用品實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)

活體染色是指一個(gè)獲得自動(dòng)物或植物的細(xì)胞活組織被染色。至于體外活體染色是指也獲得動(dòng)物或植物分離出來(lái)的一部分細(xì)胞活一部分組織被一種活體染色劑染色而不影響細(xì)胞活組織的生命。體內(nèi)活體染色與體外活體染色的主要區(qū)別：體內(nèi)活體染色是在有機(jī)體內(nèi)部，因此，體內(nèi)活體染色是在還原的環(huán)境中進(jìn)行的，至于體外活體染色是在空氣中，在氧化的環(huán)境中進(jìn)行的。所以一種真正的活體染色劑就是在一種生物的活細(xì)胞的某種構(gòu)造上面的染料，但對(duì)于細(xì)胞、對(duì)于組織和對(duì)于生命本身不發(fā)生任何有害的作用?；窘榻B：l、學(xué)習(xí)細(xì)胞活體染色的方法。2、觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒

體，液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

活體染色是利用某些無(wú)毒或毒性較小的染色劑，在不影響細(xì)胞生命活動(dòng)的情況下顯示細(xì)胞的天然構(gòu)造，更具真實(shí)性?；钚匀旧址譃轶w內(nèi)活體染色和體外活體染色?；铙w染色概念：

一般的生物材料不能穿透細(xì)胞膜，只有當(dāng)細(xì)胞被固定后，細(xì)胞膜被破壞，染料才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。但是，有一些染料（稱“活體染料”）卻能進(jìn)入活細(xì)胞，它們是一些無(wú)毒或毒性很小的染色劑，能使細(xì)胞中某些特定結(jié)構(gòu)著色?；铙w染料基本上不影響或很少影響細(xì)胞的生命活動(dòng)?；铙w染料多為堿性染料，如中性紅、次甲基藍(lán)、臺(tái)昐藍(lán)、詹納斯綠B(JanusgreenB)、亮焦油紫等，它們解離后帶正電，其中有的染料與胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)有專一性接合。例如，中性紅染液泡系，詹納斯綠B染線粒體。基本原理：(一)材料：黃豆根尖、洋蔥、小鼠。(二)器械：顯微鏡、鑷子、刀片、’剪刀、解剖針、表面皿、載玻片、蓋玻片、吸管、收水紙等。實(shí)驗(yàn)用品：l、Ringer氏液NaCl0．90g

KCl0．42gCaCl20．25g

2、1／3000中性紅溶液先配制l％的中性紅Ringer氏源液，因中性紅難溶解，需稍加熱，(30℃一40℃)使之溶解，過(guò)濾，將濾液裝入棕色瓶中暗處保存，臨用前取少許源液用Ringer氏液稀釋成1／3000的中性紅溶液。3、1／5000詹納斯綠B先配制1％詹納絲綠B溶Ringer氏溶液，方法同上。4、臺(tái)盼藍(lán)染色液將l克臺(tái)盼藍(lán)溶于100毫升生理鹽水中5、香柏油、二甲苯、蒸餾水等。(三)試劑：

實(shí)驗(yàn)方法：(一)液泡系的中性紅活體染色l、用雙面刀片將黃豆芽根尖(約l一2cm2)處小心縱切斷面，一定要薄且均勻。2、在載玻片中央滴加中性紅染料。使材料在其中染色5一10分鐘。3、吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，蓋片、鏡檢、注意液泡系染成什么顏色，其形態(tài)、大小如何、分布位置。(二)線料體的活體染色l、用植物細(xì)胞觀察線粒體的活體染色(1)用鑷子撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊(約lcm2)，放在載玻片上用1/5000詹納斯綠B染色約30分鐘。(2)吸出染液，滴加Ringer氏液，蓋片、鏡檢，注意觀察線粒體分布及所呈形狀。

(1)取鼠肝邊緣較薄的肝組織一小塊，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。(2)將肝組織洗凈后吸去血液，加入1／5000詹納斯綠B染液染色30分鐘，注意不可將組織塊完全淹沒(méi)。(3)染色后撕開(kāi)組織塊，這樣溶液中就會(huì)有一些細(xì)胞或細(xì)胞群。(4)用吸管吸取溶液，放在載玻片的Ringer氏液中。墊兩根短頭發(fā)，加蓋玻片，即可鏡檢。(5)用油鏡觀察活染色的線粒體標(biāo)本，要不斷地來(lái)回轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦螺旋，使蓋玻片上下慢慢移動(dòng)。使材料總是得到氧氣，線粒體的染色才顯得非常清楚。2、用動(dòng)物細(xì)胞觀察線粒體的活體染色。

3、人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察（1）取清潔載玻片放在37℃恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴1／5000詹納斯綠B溶液。(2)用牙簽取口腔上皮細(xì)胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色10一15分鐘(注意不能干燥)，蓋上蓋片，吸去多余的溶液，即可鏡檢。

（三）臺(tái)盼藍(lán)染色鏊別死活細(xì)胞。抽取小鼠腹腔水細(xì)胞涂于潔凈載玻片上，滴加l％臺(tái)盼藍(lán)1滴，蓋上蓋玻片于顯微鏡下觀察。