實驗三-細胞的活體染色

實驗四細胞活體染色技術講解者：張學嬌學號：01011034日期：2012/10/26基本介紹實驗目的概念實驗原理實驗用品實驗方法注意事項

活體染色是指一個獲得自動物或植物的細胞活組織被染色。至于體外活體染色是指也獲得動物或植物分離出來的一部分細胞活一部分組織被一種活體染色劑染色而不影響細胞活組織的生命。體內(nèi)活體染色與體外活體染色的主要區(qū)別：體內(nèi)活體染色是在有機體內(nèi)部，因此，體內(nèi)活體染色是在還原的環(huán)境中進行的，至于體外活體染色是在空氣中，在氧化的環(huán)境中進行的。所以一種真正的活體染色劑就是在一種生物的活細胞的某種構造上面的染料，但對于細胞、對于組織和對于生命本身不發(fā)生任何有害的作用?；窘榻B：l、學習細胞活體染色的方法。2、觀察動、植物活細胞內(nèi)線粒

體，液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。實驗目的：

活體染色是利用某些無毒或毒性較小的染色劑，在不影響細胞生命活動的情況下顯示細胞的天然構造，更具真實性?；钚匀旧址譃轶w內(nèi)活體染色和體外活體染色。活體染色概念：

一般的生物材料不能穿透細胞膜，只有當細胞被固定后，細胞膜被破壞，染料才能進入細胞內(nèi)部。但是，有一些染料（稱“活體染料”）卻能進入活細胞，它們是一些無毒或毒性很小的染色劑，能使細胞中某些特定結構著色?；铙w染料基本上不影響或很少影響細胞的生命活動?；铙w染料多為堿性染料，如中性紅、次甲基藍、臺昐藍、詹納斯綠B(JanusgreenB)、亮焦油紫等，它們解離后帶正電，其中有的染料與胞內(nèi)某些結構有專一性接合。例如，中性紅染液泡系，詹納斯綠B染線粒體?；驹恚?一)材料：黃豆根尖、洋蔥、小鼠。(二)器械：顯微鏡、鑷子、刀片、’剪刀、解剖針、表面皿、載玻片、蓋玻片、吸管、收水紙等。實驗用品：l、Ringer氏液NaCl0．90g

KCl0．42gCaCl20．25g

2、1／3000中性紅溶液先配制l％的中性紅Ringer氏源液，因中性紅難溶解，需稍加熱，(30℃一40℃)使之溶解，過濾，將濾液裝入棕色瓶中暗處保存，臨用前取少許源液用Ringer氏液稀釋成1／3000的中性紅溶液。3、1／5000詹納斯綠B先配制1％詹納絲綠B溶Ringer氏溶液，方法同上。4、臺盼藍染色液將l克臺盼藍溶于100毫升生理鹽水中5、香柏油、二甲苯、蒸餾水等。(三)試劑：

實驗方法：(一)液泡系的中性紅活體染色l、用雙面刀片將黃豆芽根尖(約l一2cm2)處小心縱切斷面，一定要薄且均勻。2、在載玻片中央滴加中性紅染料。使材料在其中染色5一10分鐘。3、吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，蓋片、鏡檢、注意液泡系染成什么顏色，其形態(tài)、大小如何、分布位置。(二)線料體的活體染色l、用植物細胞觀察線粒體的活體染色(1)用鑷子撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊(約lcm2)，放在載玻片上用1/5000詹納斯綠B染色約30分鐘。(2)吸出染液，滴加Ringer氏液，蓋片、鏡檢，注意觀察線粒體分布及所呈形狀。

(1)取鼠肝邊緣較薄的肝組織一小塊，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。(2)將肝組織洗凈后吸去血液，加入1／5000詹納斯綠B染液染色30分鐘，注意不可將組織塊完全淹沒。(3)染色后撕開組織塊，這樣溶液中就會有一些細胞或細胞群。(4)用吸管吸取溶液，放在載玻片的Ringer氏液中。墊兩根短頭發(fā)，加蓋玻片，即可鏡檢。(5)用油鏡觀察活染色的線粒體標本，要不斷地來回轉(zhuǎn)動細調(diào)焦螺旋，使蓋玻片上下慢慢移動。使材料總是得到氧氣，線粒體的染色才顯得非常清楚。2、用動物細胞觀察線粒體的活體染色。

3、人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色觀察（1）取清潔載玻片放在37℃恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴1／5000詹納斯綠B溶液。(2)用牙簽取口腔上皮細胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色10一15分鐘(注意不能干燥)，蓋上蓋片，吸去多余的溶液，即可鏡檢。

（三）臺盼藍染色鏊別死活細胞。抽取小鼠腹腔水細胞涂于潔凈載玻片上，滴加l％臺盼藍1滴，蓋上蓋玻片于顯微鏡下觀察。