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第二章

基因工程制藥

DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。回顧：基因工程的基礎(chǔ)知識(shí)一、基因的概念:二、基因工程技術(shù)是將目的基因插入載體，拼接、轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞，構(gòu)建成工程菌(或細(xì)胞），實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的技術(shù)。第二節(jié)基因工程藥物生產(chǎn)的基本過(guò)程

（掌握）⒈目的基因的克隆⒉構(gòu)建DNA重組體⒊DNA重組體轉(zhuǎn)入宿主菌⒋構(gòu)建工程菌⒌工程菌發(fā)酵⒍表達(dá)產(chǎn)物的分離純化⒎產(chǎn)品的檢驗(yàn)等基因工程藥物制藥的主要程序上游階段：

下游階段：一目的基因的獲得

一、反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法就是分離純化目的基因的RNA，再反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后進(jìn)行cDNA克隆表達(dá)。二、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）

RT-PCR是將以RNA為模板的cDNA合成同PCR結(jié)合在一起，該法是mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，在以隨機(jī)引物、oligo(dT)或基因特異性的引物（GSP）起始協(xié)助下，PCR擴(kuò)增，特異性的合成目的cDNA鏈（目的基因）。三、化學(xué)合成法

合成目的基因DNA不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘性末端的DNA雙鏈片段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進(jìn)行退火連接成較長(zhǎng)的DNA片段，再用連接酶連接成完整的基因。

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