血流感染的早期診斷與病原菌識(shí)別課件

血流感染的早期診斷與病原菌識(shí)別1血流感染的早期診斷與病原菌識(shí)別101020304

血流感染的定義、診斷及流行病學(xué)

早期診斷與病原菌識(shí)別的方法-血培養(yǎng)相關(guān)問題早期診斷與病原菌識(shí)別-感染標(biāo)志物相關(guān)問題

早期診斷與病原菌識(shí)別-分子生物學(xué)檢測(cè)相關(guān)問題目錄

201020304血流感染的定義、診斷及流行病學(xué)早期診斷與血流感染定義（BSI）敗血癥（septicemia）：病原菌及其毒素侵入血流所引起的臨床綜合征，是一種嚴(yán)重的全身感染性疾病，病原菌主要是細(xì)菌，也可為真菌、分枝桿菌等。菌血癥（bacteremia）：細(xì)菌在血流中短暫出現(xiàn)的現(xiàn)象，一般無明顯毒血癥狀，在國(guó)外文獻(xiàn)中常與敗血癥通用。血流感染（bloodstreaminfection,BSI）：敗血癥和菌血癥目前統(tǒng)稱為血流感染。3血流感染定義（BSI）敗血癥（septicemia）：病原菌血流感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)（2001年衛(wèi)生部頒布）4血流感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)（2001年衛(wèi)生部頒布）4血流感染診斷標(biāo)準(zhǔn)（1996美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心）

血培養(yǎng)1次或1次以上陽性,陽性病原體與其他感染部位無關(guān)。患者至少有以下1項(xiàng)癥狀或體征:發(fā)熱(38℃)、寒戰(zhàn)或低血壓,

同時(shí)至少滿足以下任意1項(xiàng):①若血培養(yǎng)為常見的皮膚寄植菌需有不同時(shí)間2次或2次以上的血培養(yǎng)陽性。②若血培養(yǎng)為上述常見皮膚寄植菌,血培養(yǎng)僅1次陽性則需同時(shí)有靜脈導(dǎo)管培養(yǎng)為陽性的同一病原菌且已開始正確的抗微生物治療。③血抗原測(cè)定陽性,且癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室結(jié)果不能用其他部位的感染來解釋5血流感染診斷標(biāo)準(zhǔn)（1996美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心）血培養(yǎng)血流感染流行病學(xué)資料全球：1800萬病例美國(guó)：確診病例130萬歐洲和日本：確診病例190萬每年治療費(fèi)用：167億美金－美國(guó)67億美金－歐洲導(dǎo)致死亡病種排名第十位每年導(dǎo)致大約40萬人死亡敗血癥在10年間增加了139％非心內(nèi)ICU病區(qū)最常見的死亡病因在130萬病例中，有78萬例發(fā)生在ICU病區(qū)CritCareMed2001;29:1303-106血流感染流行病學(xué)資料導(dǎo)致死亡病種排名第十位CritCa國(guó)內(nèi)血流感染的病死率結(jié)論：普通住院患者BSI的病死率為20.7%，燒傷、血液病腫瘤以及ICU患者病死率更高，而新生兒病房、肝病及糖尿病患者則相對(duì)較低。醫(yī)院BSI病死率為26.8%，明顯高于社區(qū)BSI的病死率。近幾十年來，BSI住院病死率呈下降趨勢(shì)。7國(guó)內(nèi)血流感染的病死率結(jié)論：普通住院患者BSI的病死率為20.病死率臨床表現(xiàn)血培養(yǎng)治療問題

血流感染病情兇險(xiǎn)，死亡率高達(dá)26-41%

陽性率低，培養(yǎng)結(jié)果所需時(shí)間長(zhǎng)（2-5天）

臨床表現(xiàn)缺乏特異性，診斷困難

不恰當(dāng)?shù)慕?jīng)驗(yàn)性治療易導(dǎo)致細(xì)菌耐藥及醫(yī)療資源浪費(fèi)

血流感染早期診斷治療存在的問題8病死率臨床表現(xiàn)血培養(yǎng)治療問題血流感染病情兇險(xiǎn)，死亡率

早期診斷與病原菌識(shí)別的主要方法

快速檢測(cè)方法，包括原位分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)、基因芯片、質(zhì)譜技術(shù)等

針對(duì)免疫和炎癥反應(yīng)的指標(biāo);包括TNF-a、PCT、IL-6、CRP、乳酸及內(nèi)毒素等，特異性差

血培養(yǎng)分子生物學(xué)檢測(cè)感染標(biāo)志物檢測(cè)血流感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但陽性率低，檢測(cè)周期長(zhǎng)（3-7天）9

早期診斷與病原菌識(shí)別的主要方法

快速檢測(cè)方法，包血流感染的血培養(yǎng)方法臨床細(xì)菌/真菌檢測(cè)常用的方法生化表型全自動(dòng)微生物鑒定/藥敏分析系統(tǒng)10血流感染的血培養(yǎng)方法臨床細(xì)菌/真菌檢測(cè)常用的方法生化表型全自血培養(yǎng)研究對(duì)2004年1月-2005年12月入住RobertWoodJohnson大學(xué)附屬醫(yī)院及Duke大學(xué)醫(yī)療中心且血培養(yǎng)陽性的成人患者進(jìn)行回顧性分析，患者在24h內(nèi)均接受≥3次血培養(yǎng)研究旨在評(píng)估血培養(yǎng)次數(shù)與陽性率的相關(guān)性LeeAetal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY.2007;45(11):3546–354811血培養(yǎng)研究對(duì)2004年1月-2005年12月入住Rober單一病原體感染：多次血培養(yǎng)可提高陽性率24小時(shí)血培養(yǎng)次數(shù)≥3次或4次的患者，前兩次血培養(yǎng)的陽性率<90%；而前4次血培養(yǎng)的陽性率>99%陽性率LeeAetal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY.2007;45(11):3546–354812單一病原體感染：多次血培養(yǎng)可提高陽性率24小時(shí)血培養(yǎng)次數(shù)≥3混合感染：多次血培養(yǎng)可提高陽性率研究期間，共發(fā)生58例由多種病原體導(dǎo)致的血流感染，該類患者前三次血培養(yǎng)的陽性率為100%陽性率N=58例LeeAetal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY.2007;45(11):3546–354813混合感染：多次血培養(yǎng)可提高陽性率研究期間，共發(fā)生58例由多種病原體血培養(yǎng)的陽性率與采血體積相關(guān)導(dǎo)致血流感染的G-菌、G+菌、厭氧菌及真菌，其血培養(yǎng)的陽性率均與采血體積相關(guān)陽性率標(biāo)準(zhǔn)體積：采血量為7-10ml,平均8.7ml;低體積：采血量<3.5ml;平均2.7mlMermelLAetal.AnnInternMed.1993;119:270-272.14病原體血培養(yǎng)的陽性率與采血體積相關(guān)導(dǎo)致血流感染的G-菌、G+CLSI指南對(duì)血培養(yǎng)次數(shù)及采血體積的推薦CLSI指南推薦：菌血癥的患者行4次血培養(yǎng)，且每次采血量為10ml，可獲得90-95%的陽性檢出率當(dāng)血培養(yǎng)次數(shù)增加到6次時(shí)，陽性率可增加至95-99%TownsMLetal.JMicrobiolImmunolInfect2010;43(4):347–34915CLSI指南對(duì)血培養(yǎng)次數(shù)及采血體積的推薦CLSI指南推薦：T血培養(yǎng)的報(bào)陽時(shí)間價(jià)值結(jié)論：結(jié)合血培養(yǎng)陽性報(bào)警時(shí)間結(jié)合臨床其他指標(biāo)，對(duì)于早期判斷檢出菌為病原菌或污染菌具有一定的參考價(jià)值。16血培養(yǎng)的報(bào)陽時(shí)間價(jià)值結(jié)論：結(jié)合血培養(yǎng)陽性報(bào)警時(shí)間結(jié)合臨床其他感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值降鈣素原主要是在甲狀腺旁細(xì)胞內(nèi)分泌的無激素活性的降鈣素前肽物質(zhì)，發(fā)生全身感染及炎性反應(yīng)時(shí)，細(xì)菌毒素和炎性細(xì)胞因子的誘導(dǎo)刺激下，ＰＣＴ分泌迅速升高，但在病毒感染時(shí)水平很低，血清ＰＣＴ水平高低反映疾病嚴(yán)重狀態(tài)，是判斷預(yù)后的良好指標(biāo)。細(xì)胞因子參與機(jī)體的抗炎、抗感染及免疫調(diào)節(jié)作用，尤其在抗感染及嚴(yán)重感染方面起著重要作用，細(xì)胞黏附分子（ＣＡＭ）參與機(jī)體免疫反應(yīng)、炎性反應(yīng)等一系列生理病理過程.包括IL-6、IL-8、TNF-a、VCAM-1等

革蘭陰性菌進(jìn)入血液釋放內(nèi)毒素可引起內(nèi)毒素血癥，CRP是重要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白之一，主要由IL-6分泌，血流感染時(shí)明顯增高，敏感性高，

降鈣素原PCT細(xì)胞因子及黏附因子

內(nèi)毒素及CRP（1-3）β-Ｄ葡聚糖

普遍存在于各種真菌中，是真菌細(xì)胞壁的主要結(jié)構(gòu)之一，真菌感染時(shí)明顯增高，檢測(cè)敏感、快速。

17感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值降鈣素原主要是在甲狀腺旁細(xì)胞內(nèi)分泌的無激降鈣素原診斷價(jià)值選擇2011-2014年4家醫(yī)院的4279例感染患者，進(jìn)行降鈣素原、SIRS評(píng)分及乳酸水平監(jiān)測(cè)和血培養(yǎng)檢查，并對(duì)535例血培養(yǎng)陽性的血流感染患者進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)分析，評(píng)價(jià)降鈣素原對(duì)血流感染的診斷價(jià)值18降鈣素原診斷價(jià)值選擇2011-2014年4家醫(yī)院的4279例降鈣素原診斷價(jià)值

血流感染標(biāo)本細(xì)菌的分布情況

血流感染時(shí)多因素分析19降鈣素原診斷價(jià)值血流感染標(biāo)本細(xì)菌的分布情況

降鈣素原診斷價(jià)值

結(jié)論：PCT為血流感染的獨(dú)立影響因素，即使在血乳酸正?；騍IRS評(píng)分陰性時(shí)，PCT增高應(yīng)查找可能發(fā)生的血流感染20

降鈣素原診斷價(jià)值

結(jié)論：PCT為血流感染的獨(dú)立影響因不同感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值-1結(jié)論：PCT、CRP及IL-6聯(lián)合檢測(cè)較單項(xiàng)檢測(cè)診斷價(jià)值更高，且能在1天內(nèi)報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，有助于細(xì)菌性BSI的早期診斷和治療，可為臨床醫(yī)師提供快速、可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)21不同感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值-1結(jié)論：PCT、CRP及IL-6

不同感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值-2

回顧性分析重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)確診為膿毒癥且血培養(yǎng)陽性的132例患者的臨床資料，根據(jù)血培養(yǎng)結(jié)果將膿毒癥患者分為革蘭陰性(G-)桿菌血流感染組(98例)和革蘭陽性(G+)球菌血流感染組(34例)，比較兩組患者6h內(nèi)的炎癥因子，如白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞比例(N)、CRP、PCT、內(nèi)毒素水平等的差異及其之間的相關(guān)性；繪制各炎癥因子對(duì)血流感染所致膿毒癥診斷的受試者工作特征曲線(ROC曲線)，根據(jù)曲線下面積(AUC)來評(píng)價(jià)其對(duì)血流感染所致膿毒癥的診斷價(jià)值，根據(jù)最佳診斷臨界值評(píng)估各數(shù)值對(duì)血流感染診斷的敏感性和特異性22

不同感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值-2

回顧性分析重癥監(jiān)護(hù)病

不同感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值-2

結(jié)果顯示G-菌BSI患者的血漿PCT、內(nèi)毒素及血清CRP水平均明顯高于G+菌BSI患者；ROC曲線分析顯示，血漿PCT診斷G-菌BSI患者的AUC為0.825，當(dāng)PCT>2.455微克/L,診斷G-菌BSI的敏感度為71.4%，特異度96.2%。在G+菌血流感染所致膿毒癥患者，PCT的AUC為0.619，最佳診斷臨界值>1.585微克/L,敏感度41.2％、特異度82．診斷細(xì)菌性BSI時(shí)，血漿PCT的敏感性和特異性較血清CRP、血漿內(nèi)毒素明顯增高結(jié)論：G-菌血流感染所致膿毒癥患者PCT、CRP、內(nèi)毒素水平高于G+菌血流感染者，三者聯(lián)合檢測(cè)有望成為早期判斷血流感染所致膿毒癥及其病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)。23

不同感染標(biāo)志物的診斷價(jià)值-2

結(jié)果顯示結(jié)論：G-菌血流感染分子生物學(xué)指標(biāo)監(jiān)測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）熒光原位雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)質(zhì)譜技術(shù)24分子生物學(xué)指標(biāo)監(jiān)測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）熒光原位雜交技術(shù)基因一、熒光原位雜交技術(shù)（FISH）核酸雜交技術(shù)

核酸雜交是指具有一定互補(bǔ)序列的2條核酸單鏈在液相或固相體系中按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則形成同源或異源雙鏈分子的過程。核酸雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的2條條單鏈之間進(jìn)行。其中，熒光原位雜交技術(shù)（FISH）應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室鑒定工作已有10余年，其檢測(cè)的敏感性和特異性可達(dá)到96-100%25一、熒光原位雜交技術(shù)（FISH）核酸雜交技術(shù)

核酸雜交是指具血培養(yǎng)陽性－PNAFISH

核酸熒光原位雜交血培養(yǎng)陽性肉湯革蘭染色PNAFISH革蘭陰性菌：商品化試劑盒eco/kpn/paeEfa/其它腸球Sau/scnCal/cgl/其它念珠菌報(bào)道Salmonellaspp.90minPNAFISH完成ApplEnvironMicrobiol.2010;76:4476

J.Clin.Microbiol.2013,51(4):1301JClinMicrobiol.2009;47:24726血培養(yǎng)陽性－PNAFISH

核酸熒光原位雜交血培養(yǎng)陽性肉湯熒光原位雜交技術(shù)-細(xì)菌早期識(shí)別新的熒光原位雜交技術(shù)對(duì)血培養(yǎng)陽性快速病原體識(shí)別結(jié)果顯示：152例患者血培養(yǎng)陽性的個(gè)標(biāo)本中，F(xiàn)ISH鑒定細(xì)菌生長(zhǎng)的陽性例標(biāo)本數(shù)145個(gè)。在病原菌鑒別中138例準(zhǔn)確，7例錯(cuò)誤，微生物識(shí)別準(zhǔn)確率95.2%,可信區(qū)間95%。在需氧菌和厭氧菌的鑒別沒有差異。對(duì)血培養(yǎng)陽性病原菌鑒別時(shí)間為30分鐘，上機(jī)時(shí)間僅需10分鐘。結(jié)論：熒光原位雜交技術(shù)對(duì)于血流感染的快速診斷和病原菌精確識(shí)別具有重要的臨床意義27熒光原位雜交技術(shù)-細(xì)菌早期識(shí)別新的熒光原位雜交技術(shù)對(duì)血培養(yǎng)陽熒光原位雜交技術(shù)-真菌早期識(shí)別對(duì)照性研究通過對(duì)疑似侵襲性真菌感染患者血培養(yǎng)和腦脊液中病原體的檢測(cè)，以評(píng)價(jià)FISH技術(shù)的診斷價(jià)值。28熒光原位雜交技術(shù)-真菌早期識(shí)別對(duì)照性研究28

熒光原位雜交技術(shù)-真菌早期識(shí)別

在112份腦脊液標(biāo)本中，F(xiàn)ISH檢測(cè)真菌的陽性率稍高于傳統(tǒng)墨汁染色顯微鏡檢測(cè)值（48/46），且陽性結(jié)果敏感性和特異性均為100%。對(duì)血標(biāo)本中病原菌的鑒別能力傳統(tǒng)方法、PCR-RFLP及FISH沒有差異（14/30）血培養(yǎng)確定微生物生長(zhǎng)后進(jìn)行病原菌識(shí)別的平均時(shí)間有明顯差異，傳統(tǒng)顯微鏡識(shí)別、PCR-RFLP及FISH分別為6天、12小時(shí)和5小時(shí)結(jié)論：熒光原位雜交技術(shù)在侵襲性真菌感染的病原菌識(shí)別方面具有重要價(jià)值29

熒光原位雜交技術(shù)-真菌早期識(shí)別

在112份腦脊液標(biāo)本中，F(xiàn)二、基因芯片技術(shù)基因芯片(genechip)

基因芯片也稱DNA微陣列，可分固相基因芯片和液相基因芯片?；蛐酒瑱z測(cè)基本原理是將已知的核酸片段固定在一定的固相支持物表面制成核酸探針，利用堿基互補(bǔ)原理，使其與待測(cè)DNA標(biāo)本進(jìn)行雜交反應(yīng)，從而獲得需要的生物學(xué)信息。液相基因芯片是近年來發(fā)展出的一種新的芯片技術(shù)，與固相芯片相比，液相芯片在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)、反應(yīng)速度、檢測(cè)敏感性、穩(wěn)定性以及自動(dòng)化程度方面都有較大的優(yōu)越性商品化基因芯片血流感染病原體檢測(cè)均應(yīng)用于陽性血培養(yǎng)物（血培養(yǎng)陽性病原菌鑒定）30二、基因芯片技術(shù)基因芯片(genechip)

基因芯片也稱結(jié)果：標(biāo)本病原菌識(shí)別率為86%（1807/2017），敏感率為94.7%（95%CI），特異性為98.8%。而對(duì)MRSA的特異性為100%。病原菌檢測(cè)時(shí)間僅需18小時(shí)結(jié)論：基因芯片技術(shù)對(duì)細(xì)菌種類進(jìn)行最終鑒定具有較傳統(tǒng)血培養(yǎng)敏感性高、特異性強(qiáng)及時(shí)間更短的特點(diǎn)。有利于臨床膿毒癥快速診斷和早期治療?；蛐酒夹g(shù)對(duì)血培養(yǎng)陽性標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌種類準(zhǔn)確、快速鑒定的一項(xiàng)觀察性研究對(duì)英國(guó)和芬蘭兩個(gè)醫(yī)學(xué)中心3318例疑似膿毒癥患者的2107份血培養(yǎng)陽性標(biāo)本用新型的PCR擴(kuò)增和基因芯片技術(shù)檢測(cè)鑒定血標(biāo)本中病原菌，并與常規(guī)的細(xì)菌培養(yǎng)方法對(duì)照31結(jié)果：標(biāo)本病原菌識(shí)別率為86%（1807/2017），敏感率三、質(zhì)譜技術(shù)質(zhì)譜(massspectrometry,MS)技術(shù)，尤其是基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜

(MALDI-TOFMS)，具有簡(jiǎn)便、快速及特異地分析微生物大分子標(biāo)記物質(zhì)譜圖，從而實(shí)現(xiàn)臨床微生物檢驗(yàn)中細(xì)菌、真菌及病毒在屬、種、株水平上的鑒定。MS在菌血癥、尿路感染、毒素檢測(cè)及耐藥監(jiān)測(cè)方面顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)，有望成為臨床微生物實(shí)驗(yàn)室感染性疾病常用診斷方法

弗朗西斯·阿斯頓于1919年制成的第一臺(tái)質(zhì)譜分析儀，1922年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)32三、質(zhì)譜技術(shù)質(zhì)譜(massspectrometry,MS)MALDI-TOFMS操作步驟33MALDI-TOFMS操作步驟33MALDI-TOFMS快速鑒定陽性血培養(yǎng)使用菌落、陽性血培養(yǎng)肉湯鑒定快速：20分鐘(從報(bào)警到鑒定出結(jié)果）MALDI-TOFMS(Bruker)+BACTEC(BD):正確鑒定：193/213陰性菌（包括厭氧菌）(90.61%)，284/319陽性菌(89.02%)80.9%復(fù)數(shù)菌正確鑒定出一種，7株緩癥鏈球菌鑒定為spnMALDI-TOFMS(Bruker)+BacT/ALERT(bioMérieux):388個(gè)陽性瓶，種正確率91%（包括念珠、厭氧菌）15瓶復(fù)數(shù)菌：使用通用庫多鑒定出一種，革蘭染色后使用陰性或陽性庫分析，6瓶鑒定出第二種菌ClinMicrobiolInfect2010;16:1631

JClinMicrobiol2010;48:154234MALDI-TOFMS快速鑒定陽性血培養(yǎng)使用菌落、陽性血培MALDI-TOFMSVITEKMS(bioMérieux)以16s為金標(biāo)準(zhǔn)，980株臨床分離株，ID正確率腸桿菌科97.7%非發(fā)酵菌92%葡萄球菌屬94.3%鏈球菌屬84.8%HACEK84%酵母菌85.2%J

ClinMicrobiol.2010;48:90035MALDI-TOFMSVITEKMS(bioMérieu四、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）核酸擴(kuò)增及DNA序列分析

PCR是一種體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。目前,PCR已成為分子生物學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域的經(jīng)典試驗(yàn)方法。PCR在血流感染微生物檢測(cè)和鑒定中的應(yīng)用體現(xiàn)在3個(gè)方面：一是對(duì)純的病原菌鑒定；二是對(duì)血培養(yǎng)陽性培養(yǎng)物快速鑒定；三是對(duì)臨床標(biāo)本中難以培養(yǎng)病原菌進(jìn)行檢測(cè)和鑒定?？赏ㄟ^2種方式檢測(cè)和鑒定病原微生物，一是使用特異引物擴(kuò)增檢測(cè)病原微生物目標(biāo)基因；二是使用通用引物擴(kuò)增檢測(cè)細(xì)菌16SrRNA和真菌ITS及5.8S、26SrRNA等基因D1/D2序列，同時(shí)進(jìn)行測(cè)序分析

KaryB.MullisTheNobelPrizeinChemistry199336四、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）核酸擴(kuò)增及DNA序列分析

PCR是陽性血培養(yǎng)－基于PCR的檢測(cè)PCR特異性檢測(cè)病原特異性PCR特定耐藥基因檢測(cè)：葡萄球菌mecA,腸球菌van細(xì)菌載量：肺炎鏈球菌自溶毒A基因lytA拷貝數(shù)廣譜檢測(cè)：PCR擴(kuò)增特定靶位多態(tài)性分析測(cè)序后續(xù)基因檢測(cè)種特異性real-timePCRExpertOpin.Med.Diagn.2012,6(3):209.CurrOpinInfectDis.

2011,24(2):13737陽性血培養(yǎng)－基于PCR的檢測(cè)PCR特異性檢測(cè)ExpertO保守區(qū)——反應(yīng)親緣性可變區(qū)——反應(yīng)菌種間差異廣譜性細(xì)菌/真菌感染核酸檢測(cè)-臨床應(yīng)用檢測(cè)方法：核酸檢測(cè)16srDNA/18srDNA-“細(xì)菌/真菌身份證”(每個(gè)細(xì)菌/真菌都有的一個(gè)基因)38保守區(qū)——反應(yīng)親緣性廣譜性細(xì)菌/真菌感染核酸檢測(cè)-臨床應(yīng)用檢不明微生物感染病原體廣譜檢測(cè)檢測(cè)方法：PCR+ABI3730xl測(cè)序法類型報(bào)告周期樣本采集細(xì)菌感染檢測(cè)1天內(nèi)標(biāo)本要求：痰液、肺泡灌洗液等真菌感染檢測(cè)結(jié)核桿菌檢測(cè)

檢測(cè)內(nèi)容

39不明微生物感染病原體廣譜檢測(cè)檢測(cè)方法：PCR+ABI3細(xì)菌16s/真菌18s檢測(cè)16srDNA/18srDNA-“細(xì)菌/真菌身份證”臨床細(xì)菌/真菌檢測(cè)常用的方法細(xì)菌/真菌培養(yǎng)生化表型檢測(cè)確定菌種基因檢測(cè)病原體培養(yǎng)檢測(cè)時(shí)間3-5天(最快18h)3-7天，陰性結(jié)果2個(gè)月靈敏度10-100copies＞10*5copies特異度可區(qū)分＞1000種菌＜350種菌局限性＜100個(gè)菌為陰性苛氧菌，厭氧菌不易培養(yǎng)；不能早期診斷技術(shù)條件要求PCR擴(kuò)增無菌37℃培養(yǎng)箱與顯微鏡臨床意義確定感染懷疑感染細(xì)菌16S分型——“細(xì)菌分型的金標(biāo)準(zhǔn)”40細(xì)菌16s/真菌18s檢測(cè)16srDNA/18srD聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)診斷血流感染1CriticalCareMedicine2015目的：選擇歐洲6個(gè)國(guó)家共9個(gè)ICU529名重癥感染患者所采集的標(biāo)本進(jìn)行血培養(yǎng)和分子生物學(xué)檢測(cè)，其中包括616份血流感染、185份肺炎及110份無菌區(qū)液體或組織的樣本，評(píng)價(jià)聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)方法的潛在臨床意義分子檢測(cè)技術(shù)用于血流感染、肺炎及無菌部位感染的危重病人快速