印楝油的毒理學(xué)安全性評價

印楝油的毒理學(xué)安全性評價

因此，印度-巴基斯坦次大陸和南亞-南亞干旱地區(qū)的木本植物也被稱為印度-巴基斯坦。由于印楝全身是寶,被美國國家研究委員會稱之為“解決全球問題之樹”、“天然藥庫”。印楝還被國際上認(rèn)為是最有潛力的殺蟲植物,并被聯(lián)合國糧農(nóng)組織、亞太經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展委員會、國際林聯(lián)等推薦為東亞、南亞和非洲的優(yōu)先發(fā)展樹種。印楝油(neemoil)是印楝樹的種子提取物。印楝油有3種傳統(tǒng)制備方法,隨著現(xiàn)代提取技術(shù)的發(fā)展,出現(xiàn)了一種新型的提取方法,即采用CO2超臨界流體從印楝種仁中提取印楝油,此法能獲得較多的油脂和三萜類化合物。印楝油含有7種化學(xué)成分,主要為飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸及其甲酯,含量最多的成分為18-碳酸甲酯。印楝油在南亞及東南亞地區(qū)被用作民間醫(yī)藥使用已有2000多年的歷史,常用于麻風(fēng)病、腸道蠕蟲病、呼吸系統(tǒng)疾病、便秘、血液疾病、風(fēng)濕病、膽道感染、潰瘍、子宮炎、牙齦炎、搔癢和慢性皮膚病等疾病的治療?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,印楝油具有多種生物學(xué)活性,如抗寄生蟲、抗微生物、解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗?jié)兒痛龠M(jìn)傷口愈合等。目前對印楝油毒理學(xué)方面的研究相關(guān)報道極少,僅見于殷中瓊報道了印楝油的氯仿提取物作為抗生育劑,屬無毒類抗生育藥。隨著對印楝油藥理作用研究的深入,需要對印楝油的安全性進(jìn)行評價,以便為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。為此,筆者進(jìn)行了印楝油對小鼠的急性毒性試驗和蓄積毒性研究。1材料和方法1.1試驗藥物印楝油由成都綠金公司惠贈,通過超臨界CO2萃取所得,純度在99.9%以上。1.2實驗動物選用性成熟昆明種小鼠,體重為18~22g,用常規(guī)方式飼養(yǎng),自由采食。購于原四川醫(yī)學(xué)院實驗動物研究所。1.3小鼠的急性毒性試驗采用改良寇氏法測定印楝油對小鼠的經(jīng)口急性毒性試驗的LD50。取50只小鼠隨機分為5組,每組10只,雌、雄各半。在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上,設(shè)5個染毒劑量組:45.0、36.0、28.8、23.0和18.4g/kg組。對各劑量組進(jìn)行一次性經(jīng)口灌胃給藥,給藥后觀察并且記錄小鼠的攝食、飲水、呼吸、活動和死亡情況,連續(xù)觀察14d,計算LD50。對死亡小鼠及觀察期滿處死的小鼠進(jìn)行剖檢,若發(fā)現(xiàn)異常組織或臟器則做病理學(xué)檢查。1.4固定劑量法檢測k采用固定劑量蓄積毒性系數(shù)法,評價印楝油對小鼠的蓄積毒性。取40只小鼠,隨機分為試驗組和陰性對照組兩組,每組20只,雌、雄各半,試驗組小鼠以1/5LD50劑量每日灌胃,陰性對照組小鼠不予任何處理。當(dāng)試驗組累計發(fā)生一半動物死亡,即可終止試驗。計算累積總接觸劑量LD50(n),根據(jù)此公式計算K值進(jìn)行評價:K=LD50(n)/LD50。若接觸劑量累積達(dá)到5個LD50劑量,試驗組動物死亡還未達(dá)到一半,可終止試驗,此時計算出K>5。固定劑量法試驗期為25~100d。在給藥期間觀察小白鼠的精神、食欲、飲水及死亡情況和有無異常反應(yīng)。給藥結(jié)束后,剖檢各組小鼠,對試驗組與陰性對照組小鼠的每周飼料利用率以及臟器系數(shù)進(jìn)行分析比較,若發(fā)現(xiàn)異常組織或臟器則做病理學(xué)檢查。1.5處理數(shù)據(jù)用SPSS17.0分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計、分析、處理和顯著性t檢驗。2結(jié)果與分析2.1急性ld-md最高劑量組小鼠染毒后第50min,精神沉郁,行動遲緩,畏寒扎堆,逐漸癱臥,第3h左右開始出現(xiàn)腹瀉癥狀,6h內(nèi)9只死亡。其余劑量組的中毒表現(xiàn)同上,但中毒程度隨劑量遞減而減輕,24h內(nèi)存活者基本能恢復(fù)正常。具體死亡記錄見表1。對各組死亡小鼠和觀察期滿存活的小鼠進(jìn)行處死剖檢,發(fā)現(xiàn)急性中毒死亡小鼠腸道內(nèi)有大量液體充盈、腸道腫脹,其余組織或臟器無明顯異常。采用改良寇氏法計算可得印楝油對小鼠的經(jīng)口LD50為31.95g/kg,95%可信限為27.73~36.06g/kg。根據(jù)外源化學(xué)物急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn),印楝油屬實際無毒物質(zhì)。2.2累積毒性試驗2.2.1漢植物葉片殘留毒性小鼠給藥后第28d,對照組20只小鼠全部存活。試驗組有4只雄鼠與3只雌鼠死亡,存活小鼠13只。眼觀和病理剖檢各組小鼠均未見異常變化。經(jīng)測定,蓄積系數(shù)K>5。根據(jù)蓄積毒性評價標(biāo)準(zhǔn),印楝油的蓄積毒性為輕度毒性。試驗期間,試驗組動物未見明顯的中毒癥狀。2.2.2兩組的飼料利用率由表2可見,在給藥后第1周,試驗組的飼料利用率略高于對照組,差異不顯著(P>0.05);第2周,試驗組的飼料利用率明顯低于對照組,差異顯著(P<0.05);第3周,試驗組的飼料利用率與對照組比較,差異不顯著(P>0.05);第4周,試驗組的飼料利用率與對照組比較,差異不顯著(P>0.05)。表明在28d內(nèi)給予小鼠1/5LD50及以下劑量范圍內(nèi)的印楝油對小鼠的飼料利用率無影響。2.2.3《清咸水歌》載由表3可知,在印楝油的蓄積毒性試驗中,試驗組小鼠心、肝、脾、肺、腎的臟器系數(shù)與對照組差異不顯著(P>0.05)。這表明在28d內(nèi)給予小鼠1/5LD50及以下劑量范圍內(nèi)的印楝油對小鼠的臟器系數(shù)無影響(P>0.05)。Themeanwith*issignificantlydifferentfromthatinthecontrolgroupatthesametime3討論3.1急性毒性指標(biāo)急性毒性和蓄積毒性試驗是評價外源化合物安全性的重要指標(biāo)。急性毒性試驗是藥物毒理學(xué)安全性評價的第一步,具有了解受試物急性毒性強弱的作用。LD50是評價受試物急性毒性強弱以及比較其急性毒性大小的一個常用指標(biāo)。LD50數(shù)值越大,則表明受試物急性毒性越弱、越小;反之,急性毒性就越強、越大。有文獻(xiàn)報道,印楝油對大鼠和兔有一定急性毒性,內(nèi)服LD50分別為14.1、24.0mL/kg;對懷孕早期大鼠有致流產(chǎn)作用。印楝油對小鼠的急性毒性較小,只有在高劑量時才出現(xiàn)高度興奮、個別死亡的情況。印楝油氯仿提取物對大鼠幾乎無毒,其急性經(jīng)口LD50>10000mg/kg,經(jīng)皮LD50>5000mg/kg,對家兔皮膚、眼黏膜無刺激性。本試驗采用改良寇氏法測定的印楝油對小鼠的經(jīng)口LD50為31.95g/kg。根據(jù)世界衛(wèi)生組織推薦的五級毒性標(biāo)準(zhǔn)可知,印楝油屬于實際無毒物質(zhì)。3.2蓄積性毒性的測定外源化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入機體后,經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)化后以代謝產(chǎn)物或者以未經(jīng)代謝轉(zhuǎn)化的原形母體化學(xué)物質(zhì)排出體外。但是當(dāng)化學(xué)物質(zhì)反復(fù)多次染毒動物,而且進(jìn)入機體的速度或總量超過代謝轉(zhuǎn)化的速度與排出機體的速度或總量時,化學(xué)物質(zhì)或其代謝產(chǎn)物就可能在機體內(nèi)逐漸增加并貯留某些部位。這種現(xiàn)象稱為化學(xué)物質(zhì)的蓄積作用(accumulation),大多數(shù)蓄積作用會產(chǎn)生蓄積毒性(accumulativetoxicity)。蓄積毒性是指低于一次中毒劑量的外源化學(xué)物質(zhì),反復(fù)與機體接觸一定時間后致使機體出現(xiàn)的中毒作用。外源化學(xué)物質(zhì)在機體內(nèi)所產(chǎn)生的蓄積作用是引起亞慢性毒性作用和慢性毒性作用的基礎(chǔ)。人們在外源化學(xué)物質(zhì)毒理學(xué)評定的實際工作中,可根據(jù)受試物的蓄積毒性強弱作為評估它的毒性作用指標(biāo)之一,也是制定衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)時選用安全系數(shù)大小的重要參考依據(jù)。至今國內(nèi)外關(guān)于印楝油的蓄積毒性試驗研究報道幾乎為空白。本試驗采用固定劑量蓄積毒性系數(shù)法測定的蓄積系數(shù)K>5。根據(jù)蓄積系數(shù)分級標(biāo)準(zhǔn),判斷印楝油基本無蓄積毒性。急性毒性與蓄積毒性試驗結(jié)果可以初步確定印楝油使用安全,為以后的亞慢性毒性試驗和特殊毒性試驗劑量的選擇與產(chǎn)品開發(fā)利用提供了一定的科學(xué)依據(jù)。3.3對飼養(yǎng)的影響飼料消耗量是喂飼染毒時確定染毒劑量的關(guān)鍵參數(shù),也是化學(xué)物質(zhì)毒性作用的重要指標(biāo)。一般藥物會影響動物的飲水量與攝食量。在分析評價藥物對動物攝食量的影響時,通常以飼料利用率進(jìn)行比較。飼料利用率即動物每攝入100g飼料所增加的體重。如果印楝油影響動物食欲,則每日進(jìn)食量減少,體重增長會受到影響,但飼料利用率不一定改變,如果印楝油干擾了動物對食物的吸收或代謝,雖然不一定影響食欲,但體重增長卻很緩慢,因而飼料利用率會有所改變。在蓄積毒性試驗中測定的試驗組與對照組飼料利用率沒有明顯的差異,這表明在28d內(nèi)給予小鼠1/5LD50及以下劑量范圍內(nèi)印楝油對小鼠的飼料利用率無影響。3.4印蔗油在不同劑量印酒中的急性毒性試驗結(jié)果臟器系數(shù),又稱臟/體比值,指某一臟器濕重在100g體重中所占的質(zhì)量。一般用于心、肝、脾、肺、腎等實質(zhì)器官。在排除稱重前的失水及年齡、性別、營養(yǎng)不良等因素的影響后,如果臟器系數(shù)增大,表明有充血、水腫、增生、肥大等變化;臟器系數(shù)減小,表明臟器可能出現(xiàn)萎縮、退行性等變化。臟器系數(shù)的比較結(jié)果在藥物毒性試驗中被看做一項重要指標(biāo),這項檢驗結(jié)果一定程度上