中溫淀粉酶概述

一、 概述中溫淀粉酶是一種a-淀粉酶，由精選的淀粉液化桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)經深層發(fā)酵而制成。該酶的分類名稱是1，4-a-D型葡萄糖水解酶。中溫淀粉酶可以為液體或固體。可以水解直鏈淀粉和支鏈淀粉中1，4-a-糖苷鍵的內切型淀粉酶，可以迅速降低糊化淀粉的粘度。其分解產品是不同鏈長的糊精以及低聚糖。這種傳統(tǒng)a-淀粉酶可以70-90°C(158-194°F)的較高溫度下使用。酶的添加量需要特定的使用條件，主要取決于設計的反應時間、液化的目標DE值、溫度及pH值。一般的推薦加量為0.3-0.5kg/t.ds。二、 使用注意事項酶制劑是蛋白質，吸入灰塵或懸浮微粒會產生過敏作用，可能導致人們產生過敏反應。如長時間接觸某些酶，可能會刺激皮膚、眼睛和粘膜。如因飛濺和強烈攪動可能造成可吸入的粉塵。溢出的酶干燥后可能造成粉塵。溢出的酶應用水沖刷干凈(避免濺出)。殘余的酶干燥后可能造成粉塵。三、 儲存建議將酶存于0-25C(32-77F)的密閉容器中，保持干燥，避免陽光直曬。本產品配至最佳的穩(wěn)定性。然而隨時間的推移，酶會逐漸失去活力。延期儲存或不宜條件，如較高的溫度或濕度，會導致較高的添加量。四、 酶活性鑒定a-淀粉酶制劑能將淀粉分子鏈中的a-1,4-葡萄糖苷鍵隨機切斷長短不一的斷鏈糊精、少量麥芽糖和葡萄糖，而使淀粉對碘呈藍紫色的特性反應逐漸消失，呈現(xiàn)棕紅色，其顏色消失的速度與酶活性有關，據(jù)此可通過反應后的吸光度計算酶活力。試劑和溶液2.1碘2.2碘化鉀2.3原碘液：稱取11.0g碘和20.0g碘化鉀，用少量水使碘完全溶解，定容至500mL,儲存于棕色瓶中。2.4稀碘液：吸取原碘液2.00mL，加20.0g碘化鉀用水溶解并定容至500mL，儲存于棕色瓶中。2.5磷酸緩沖液(PH=6.0):稱取15.23g磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H2O)和8.07g檸檬酸(C6H8O7.H2O),用水溶解并定容至100mL用PH校正后使用。2.6鹽酸溶液：c（HCl）=0.1moL。2.7可溶性淀粉溶液（20g/l）：稱取2.000g（精確至0.001g）可溶性淀粉（以絕干計）于燒杯中，用少量水調成漿狀物，邊攪拌邊緩緩加入70mL沸水中，然后用水分次沖洗裝淀粉的燒杯，洗液倒入其中，攪拌加熱至完全透明，冷卻定容至100mL。溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。2.8待測酶液制備稱取1g-2g酶粉（精確至0.0001g）或準確吸取酶液1.00mL，用少量磷酸緩沖液充分溶解，將上清液小心傾入容量瓶中，若有剩余殘渣，再加少量磷酸緩沖液充分研磨，最終樣品全部移入容量瓶中，用磷酸緩沖液定容至刻度，搖勻。用四層紗布過濾，濾液待用。注：待測中溫a-淀粉酶酶液酶活力控制在3.4u/mL-4.5u/mL范圍內。待測高溫a-淀粉酶活力控制在酶濃度在60u/ml-65u/mL范圍內。測定吸取20.0mL可溶性淀粉溶液于試管中，加入磷酸緩沖液5.00mL，搖勻后置于60°C土0.2°C，耐高溫。-淀粉酶制劑置于70C±0.2C恒溫水浴中預熱8min；加入1.00mL稀釋好的待測酶液，立即計時，搖勻，準確反應5min；立即用自動移液器吸取1.00mL反應液，加到預先盛有0.5mL鹽酸溶液和5.00mL稀碘液的試管中，搖勻，并以0.5mL鹽酸溶液和5.00mL稀碘液為空白，于660nm波長下，用于10mm比色皿迅速測定其吸光度（A）。根據(jù)吸光度查表A.I（略），求得測試酶液的濃度。計算4.1中溫a-淀粉酶活力1g固體酶粉（或1mL液體酶），于60C、pH=6.0條件下，1h液化1g可溶性淀粉，即為一個酶活單位，以u/g（u/mL）表示。中溫a-淀粉酶制劑的酶活力按式（1）計算：X1=c*n （1）式中：X1樣品的酶活力，u/mL或u/g；c測試酶樣濃度，u/mL或u/g；n樣品的稀釋倍數(shù)。所得結果表示至整數(shù)。4.2耐高溫a-淀粉酶1g固體酶粉（或1mL液體酶），于70C、pH=6.0條件下，1h液化1g可溶性淀粉，即為一個酶活單位，以u/g（u/mL）表示。耐高溫a-淀粉酶制劑的酶活力按式（2）計算：X2=c*n*