中藥質(zhì)量控制專題

中藥質(zhì)量控制研究專題之一LC/MS在中藥質(zhì)量控制研究中的應(yīng)用LC/MS主要應(yīng)用生物藥學(xué)(生物大分子)藥物研究：（獲取分子量信息、未知物的結(jié)構(gòu)鑒定、雜質(zhì)和降解產(chǎn)物的確定、品質(zhì)控制）藥代動力學(xué)研究（非臨床、臨床）內(nèi)容LC/MS構(gòu)造及工作原理主意事項應(yīng)用實例內(nèi)容LC/MS構(gòu)造及工作原理注意事項應(yīng)用實例LC/MS典型液相組成LC部分？更高更快更強(qiáng)1290UHPLC

System

UPLC

UFLC

UltraPerformanceLiquidChromatography離子光學(xué)組件質(zhì)量分析器檢測器樣品引入工作站真空系統(tǒng)質(zhì)譜部分LCI.離子源:使被分析樣品的原子或分子離子化為帶電粒子(離子)的裝置，并對離子進(jìn)行加速使其進(jìn)入分析器。EI(ElectronImpactIonization)：電子轟擊電離—硬電離。

CI(ChemicalIonization)：化學(xué)電離—核心是質(zhì)子轉(zhuǎn)移。

MALDI(MatrixAssistedLaserDesorption)：基質(zhì)輔助激光解吸電離。通常用于飛行時間質(zhì)譜和FT-MS，特別適合蛋白質(zhì)，多肽等大分子大氣壓電離(API)：軟電離，核心是電子的轉(zhuǎn)移液質(zhì)的離子源：

電噴霧電離，ESI(ElectrosprayIonization):—適宜極性分子的分析，能分析小分子及大分子。大氣壓化學(xué)電離，APCI(AtmosphericPressureChemicalIonization):—更適宜做弱極性小分子。大氣壓光噴霧電離，APPI(AtmosphericPressurePhotoSprayIonization):—同上，更適宜做非極性分子API源：細(xì)分為如下3類++++++++++++++++++++++加熱干燥氮氣反吹氣絕緣毛細(xì)管入口噴霧器與毛細(xì)管入口成90°角流動相噴霧離子-5,000VAgilent直角噴霧API技術(shù)噴霧氣離子光學(xué)組件質(zhì)量分析器檢測器前級真空高真空3×105II.真空系統(tǒng)III.離子光學(xué)組件毛細(xì)管Skimmer及八級桿Les1、Les2讓所有離子通過，順利進(jìn)入質(zhì)量分析器保證傳輸?shù)男时ＷC離子傳輸中不發(fā)生變化Octopole1RoughPumpTurboTurboQuadMassFilter(Q1)Lens1and2CapillaryVacuumwallIV.質(zhì)量分析器根據(jù)氣態(tài)離子的質(zhì)荷比測定四極質(zhì)譜儀(Q).飛行時間質(zhì)譜儀(TOF).離子阱質(zhì)譜儀（TRAP）付利葉變換-離子回旋共振質(zhì)譜儀(FT-ICRMS).┏四極+TOF（Q-TOF）串列式多級質(zhì)譜儀┫三重四極桿（QQQ）

(MS/MS)┗TOF+TOF高選擇性，最高定量靈敏度 復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分定量分析的首選；多種掃描模式的組合運用可提供結(jié)構(gòu)信息Q-TOFSensitivitySelectivityAPISourceDetectorEnergyQQQ:TripleQuadrupole

高靈敏度(適合生物樣品中痕量化合物的定量分析）

高選擇性

消除干擾：定量分析結(jié)果更準(zhǔn)確

多組分分析

結(jié)構(gòu)定性分析：中性丟失和母離子掃描

快速,實現(xiàn)高通量分析串聯(lián)四極桿液質(zhì)在分析中的優(yōu)勢AgilentQQQQQQ不同的掃描方式：Q1FullScan(Start–Stop)(Q1全掃描)Q1alwaysusedassingleMSanalyzerUsedprimarilyforident.ofprecursorionSIM-SelectedIonMonitoring(選擇離子監(jiān)測)UsedtooptimizeanalyzerforspecificionsSIMusedforquantitativeanalysesQ1SIMusedto“optimize”precursorionMaximizesignalinpreparationforMS/MSProductIonScan(子離子掃描)Afteridentification,theprecursorionissentintothecollisioncellandfragmentedbyCIDQ1isfixed,Q3sweepsagivenmassrangeUsedforstructuralelucidationFirststeptodevelopingquantitativemethodm3+scannedm1+fixedExampleofProductIonSpectrumEphedrine,MW=165PrecursorIonScan(母離子掃描)Q1sweepsagivenmassrange,Q3isfixedUsedtodeterminethe“origin”ofparticularproduction(s)createdinthecollisioncellFrequentlyusedfordrugmetaboliteidentification(commonproductionobservedinthemetabolites)m3+fixedm1+scannedExampleofPrecursorIonSpectrum600900120015001800m/z,amu587.5745.6895.6802.4633.4520.31105.01704.4600900120015001800m/z,amu3.0e66.0e69.0e61.2e7Intensity,cps608.3520.3802.4600900120015001800m/z,amu3.0e46.0e49.0e4Intensity,cpsPrecursorsof86(Ile/Leu)Q1Scan745.6NeutralLossScan(中性丟失掃描)Q1&Q3bothscanagivenmassrangebutwithaconstantdifferencebetweenrangesscannedSpectrumindicateswhichionsloseaneutralspeciesequaltoQ1-Q3differenceComplementtoPrecursorIonScanNeutral“gain”indicatesamultiplychargedprecursorionwasfragmentedΔmm1+scannedm3+scannedWhenanIonfragmentsthefollowingformulasapply:Positivemode(Parent)+

A++BNeutralNegativemode(Parent)-

A-+BNeutralMultipleReactionMonitoring(MRM)PrecursorionfixedProductionfixedFragmentation(CID)可以同時檢測多個離子對提高子離子的響應(yīng)主要用于定量靈敏度、選擇性提高多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）170210250290210222268280165QuadMassFilter(Q3)QuadMassFilter(Q1)CollisionCell全掃描質(zhì)譜，分子離子峰和背景離子(ESI)Q1只選擇母離子m/z210190210210在碰撞池中，使m/z210產(chǎn)生碎片150170190210210158191Q3只監(jiān)測m/z210產(chǎn)生的特征碎片離子，158和191用于定量分子和確認(rèn)160158190191沒有背景離子干擾VI.檢測器帶對數(shù)放大信號電路的離軸雙打拿極設(shè)計，將離子信號轉(zhuǎn)為電子信號可以獲得更高的信號增益實現(xiàn)正負(fù)極性的快速切換提高檢測器的壽命和降低噪音離軸設(shè)計可防止中性物質(zhì)進(jìn)入電子倍增器離子信號轉(zhuǎn)化為電子信號信號的放大（電子倍增管）電子信號轉(zhuǎn)化為數(shù)字響應(yīng)VII.工作站MassHunter軟件在線質(zhì)譜圖方法編輯器序列編輯器儀器狀態(tài)極性切換,離子化模式,掃描模式選擇內(nèi)容LC/MS構(gòu)造及工作原理注意事項應(yīng)用實例注意事項流動相：（1）不揮發(fā)性的鹽或酸（2）正負(fù)模式選擇于流動相之間的關(guān)系離子源的選擇：極性<?HPLC圖譜不能與質(zhì)譜離子流完全對應(yīng)！QQQ局限性:(1)異構(gòu)體，立體化學(xué)方面區(qū)分能力差。(2)重復(fù)性稍差，要嚴(yán)格控制操作條件。(3)有離子源產(chǎn)生的記憶效應(yīng)，污染等問題。(4)價格