實(shí)驗(yàn)1微生物顯微鏡的使用細(xì)菌形態(tài)的觀察和細(xì)菌的革蘭氏染色

實(shí)驗(yàn)一顯微鏡油鏡的使用與保護(hù)細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察細(xì)菌的革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)?zāi)康?）掌握顯微鏡油鏡的使用和保護(hù)法2）認(rèn)識(shí)細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)。3）掌握細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備、革蘭氏染色法的步驟、細(xì)菌的革蘭氏染色結(jié)果。4）學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

1）顯微鏡油鏡的使用方法；2）觀察細(xì)菌基本形態(tài)的染色裝片；3）觀察幾種常見細(xì)菌菌落；4）進(jìn)行革蘭氏染色法的操作實(shí)驗(yàn)原理

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關(guān)鍵，影響顯微鏡的分辨率。顯微鏡物鏡中的油鏡放大倍數(shù)最大，可達(dá)100X,

油鏡使用需在載玻片與鏡頭之間滴加鏡油（香柏油）。

油鏡的基本原理總放大倍數(shù)(物鏡放大倍數(shù)x目鏡放大倍數(shù))物鏡的數(shù)值孔徑NANA=n?sin

n是指介質(zhì)（空氣、浸油等）的折射率；

是孔徑角的一半。分辨率顯微鏡所能分辨的兩點(diǎn)之間的距離分辨率＝

/2×N.A.=/2×n?sin

（為所使用的光線的波長(zhǎng)）油鏡的分辨率為0.2μm左右

油鏡的使用

增加照明亮度油鏡頭焦距很短，直徑很小，所需光照強(qiáng)度最大增加顯微鏡的分辨率顯微鏡性能的優(yōu)劣主要決定其分辨率的大小。

為什么使用香柏油？

當(dāng)物鏡與裝片間的介質(zhì)是空氣（空氣折射率n=1.0）時(shí)，光線會(huì)發(fā)生折射，使進(jìn)入物鏡的光線減少，降低了視野的照明度。當(dāng)介質(zhì)為香柏油時(shí)，香柏油的折射率（1.52）與玻璃相近，光線可經(jīng)過載片直接進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射，增加了照明度，更重要的是增加了數(shù)值孔徑達(dá)到提高分辨率的目的。顯微鏡使用方法顯微鏡各部分名稱油鏡的維護(hù)與保養(yǎng)透鏡的清潔用無水乙醇和無水乙醚（3:7/4:6）擦拭鏡頭。尤其是用完油鏡后。干燥防止生霉目的要求鞏固顯微鏡油鏡的使用方法認(rèn)識(shí)細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)觀察并描繪幾種常見微生物的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)微生物形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)儀器、材料和用具顯微鏡、鏡油、鏡頭紙、擦鏡液細(xì)菌裝片：細(xì)菌三種基本形態(tài)裝片及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)-芽孢、鞭毛、莢膜裝片。細(xì)菌基本形態(tài)觀察（1）觀察金黃色葡萄球菌、八疊球菌裝片。注意菌體間的關(guān)系。（2）觀察枯草芽孢桿菌、大腸桿菌裝片。（3）觀察螺菌裝片。注意菌體的螺旋。

細(xì)菌的基本形態(tài)ArrangementofCocci球菌A.arrangementofcocciB.staphylococcusarrangementC.streptococcusarrangementD.sarcinaarrangementE.diplococcusarrangementArrangementsofBacilli牙孢桿菌A.arrangementsofbacilliB.singlebacillusC.streptobacillusSpiralFormsA.spiralformsB.spirillumC.spirochete(arrows)mixedwithredbloodcellsD.vibrio細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（1）固氮菌（莢膜）裝片：注意菌體和莢膜的染色差異，莢膜的大小、以及與菌體的關(guān)系。（2）螺菌（鞭毛）裝片：注意鞭毛的染色、位置、數(shù)目、形狀和大小。（3）巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、破傷風(fēng)梭菌裝片，注意孢體和菌體的染色差異，芽孢的形狀、大小和位置。CapsulestainofEnterobacteraerogenes細(xì)菌莢膜細(xì)菌的鞭毛arrangementofflagella鞭毛細(xì)菌芽孢目的要求掌握細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備方法及革蘭氏染色法的步驟識(shí)別細(xì)菌的革蘭氏染色結(jié)果學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)細(xì)菌革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)儀器、材料和用具(1)顯微鏡、鏡油、擦鏡紙、擦鏡液(2)結(jié)晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番紅染液(3)載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、酒精燈、(4)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌液體培養(yǎng)液、牙垢實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)步驟涂片左手持菌液試管,右手持接種環(huán)在火焰中灼燒,冷卻后從試管中取菌液一滴,在潔凈載玻片上做一涂膜;從固體斜面或平板上取菌時(shí),用無菌接種環(huán)取少量菌體,涂抹均勻于玻片上預(yù)先滴有的一滴自來水中;干燥在空氣中自然干燥用鑷子夾住涂片一端,

在火焰上連續(xù)通過三次;以載玻片在手背上試感覺不燙為宜.固定3.95%的乙醇脫色：滴加95%的乙醇，輕輕搖動(dòng)玻片進(jìn)行脫色，直至流出的乙醇無紫色時(shí)，水洗；染色步驟1.結(jié)晶紫初染：滴加數(shù)滴結(jié)晶紫染液于細(xì)菌涂片上，