油茶果皮多元酚富集工藝研究

油茶果皮多元酚富集工藝研究【摘要】目的建立油茶果皮中多元酚的富集工藝。方法油茶果皮用60%丙酮-水提取，醋酸乙酯萃取后，流經(jīng)D101型大孔吸附樹(shù)脂，然后用不同濃度乙醇梯度洗脫，最后紫外分光光度法測(cè)定多元酚含量。結(jié)果60%丙酮-水提取物中多元酚含量為%，萃取后含量達(dá)到%，用30%乙醇進(jìn)行洗脫，此組分含量可達(dá)45%。結(jié)論此工藝用于油茶果皮中多元酚的富集操作簡(jiǎn)單、效果好。

【關(guān)鍵詞】油茶果皮多元酚大孔樹(shù)脂富集工藝

Abstract：ObjectiveToestablishaprocessingmethodforenrichingpolyphenolfromCamelliaoleiferaAbelpeelbyMacroporousResinthatpeelofCamelliaoleiferaAbelwasextractedby60%Acetone-H2Oandfractedbyethylacethe.Gradientalcoholelutionwasusedtoelutethecomponentsabsorptedonmacroporousresinandtheircontentsweredeterminedbyspectrophotometry.ResultsTheextractionof60%Acetone-H2Owasverygoodandthepolyphenolwasgatheredin40%alcohol.Thecontentofpolyphenolwas45%.ConclusionTheprocessingtechnologycanbeusedtoenrichpolyphenolfromCamelliaoleiferaAbelpeel.

Keywords：CamelliaoleiferaAbelpeel;Polyphenol;Macroporousresin;Process

油茶果皮是油茶果實(shí)去籽后的干燥果殼。油茶CamelliaoleiferaAbel為山茶科山茶亞屬油茶組植物，在我國(guó)資源豐富。油茶根皮、花、種子、油粕早就被《中國(guó)藥典》收載為藥用［1］，而茶油在2005年版《中國(guó)藥典》才收載入藥［2］?，F(xiàn)代研究證明，油粕和油茶果皮均具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的藥理作用。到目前為止，對(duì)油茶根皮、花、種子、油粕的研究均有報(bào)道［3］，而對(duì)油茶果皮的研究卻少之又少。前期研究得知油茶果皮含有大量的鞣質(zhì)和皂苷類成分。為明確油茶果皮抗腫瘤作用的具體藥用部位，本文對(duì)采自廣西巴馬縣的油茶果皮中多元酚類成分進(jìn)行了富集工藝研究，為進(jìn)一步確證油茶果皮的抗腫瘤作用和開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1儀器與試藥

Unico7200可見(jiàn)分光光度計(jì)；Laborata4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；BP210s十萬(wàn)分之一電子天平；Jascov-560紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；沒(méi)食子酸；所用試劑均為分析純；水為蒸餾水；油茶果皮。

2方法與結(jié)果

樣品提取稱取油茶果皮250g，60%丙酮-水回流提取3次，1h/次［4］，合并提取液，回收溶劑至干，供用。

總多元酚含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)品與樣品溶液的制備精密稱取10mg干燥至恒重的沒(méi)食子酸，置于100ml容量瓶中，用水溶解，精確配制mg/ml沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用。取60%丙酮-水提取浸膏7g,置于100ml容量瓶中，加入水溶解至刻度，搖勻過(guò)濾，棄去初濾液20ml左右。精確吸取續(xù)濾液5ml置于50ml棕色容量瓶，加水稀釋至刻度，得樣品溶液濃度為7mg/ml。

測(cè)定波長(zhǎng)的選擇標(biāo)準(zhǔn)品與樣品加磷鉬鎢酸-碳酸鈉顯色劑［5］，30min后用分光光度計(jì)在400～800nm范圍內(nèi)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果在754nm左右有最大吸收，故以沒(méi)食子酸最大吸收為基準(zhǔn)，選擇754nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，，，，ml，分別置于10ml棕色容量瓶中，加水至5ml，再分別加入1ml磷鉬鎢酸，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以相同試劑為空白，30min后在754nm處測(cè)定其吸光度。以A值為縱坐標(biāo)，體積V(ml)為橫坐標(biāo)，得回歸方程：A=5V+9(r=8)，線性關(guān)系良好，其線性范圍為5～5mg/ml。

樣品多元酚含量測(cè)定精密吸取樣品溶液ml，置于10ml棕色容量瓶，依照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法測(cè)定吸光度，并計(jì)算多元酚含量，浸膏中總多酚的含量為%，RSD=%。

萃取工藝研究取干燥浸膏10g直接加醋酸乙酯萃取，可稍微加熱，然后減壓下回收醋酸乙酯，得到萃取樣品g，采用上述方法測(cè)定萃取物中多元酚含量，結(jié)果為%，收率為18%。

大孔吸附樹(shù)脂富集工藝研究

大孔吸附樹(shù)脂的處理

將大孔樹(shù)脂裝入吸附柱中,并保持95%乙醇液面高出樹(shù)脂，浸泡。之后95%乙醇洗滌樹(shù)脂層,至流出液加蒸餾水不呈白色渾濁，再用蒸餾水洗至無(wú)醇味即可。然后用4%NaOH溶液1-2體積動(dòng)態(tài)洗滌-水洗至中性-4%HCl1-2體積酸洗，最后用蒸餾水洗至中性備用。

洗脫溶劑考察

將萃取浸膏水溶解后流經(jīng)處理好D101大孔吸附樹(shù)脂，靜態(tài)吸附過(guò)夜。之后控制流速3ml/min，分別用水、濃度為10%，20%，30%，40%，50%的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，各個(gè)梯度洗脫終點(diǎn)用磷鉬鎢酸-碳酸鈉做指示劑。然后將各個(gè)梯度下洗脫液減壓回收，將樣品干燥測(cè)定多元酚含量。結(jié)果見(jiàn)表1。表1不同梯度多元酚含量及在水中的溶解性

工藝可行性考察

取干燥浸膏10g重復(fù)以上萃取過(guò)程，直接用30%乙醇進(jìn)行洗脫，得到洗脫樣品，并且多元酚含量為45%，收率為%，與上述測(cè)定結(jié)果接近。

從以上結(jié)果看出，此工藝用于油茶果皮中多元酚的富集操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好。

3討論

經(jīng)過(guò)大量文獻(xiàn)調(diào)研表明，以沒(méi)食子酸為對(duì)照品測(cè)定多元酚含量，方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好、易于操作。結(jié)合油茶果皮中含有大量沒(méi)食子酸及其衍生物，故選擇以沒(méi)食子酸為對(duì)照品、以分光光度法測(cè)定多元酚的含量。

富集多元酚的方法很多，傳統(tǒng)的有醋酸鉛沉淀法、明膠沉淀法、溶劑法等，但作為藥物應(yīng)用來(lái)講有其自身缺點(diǎn)，用大孔吸附樹(shù)脂與乙醇洗脫體系結(jié)合則無(wú)污染且易于溶劑回收。同時(shí)多元酚在水中的溶解性大于在醋酸乙酯中，即多元酚在水中的分配比大于在醋酸乙酯中的分配比，所以要采用先水溶解提取物再醋酸乙酯萃取的方法，在水中仍會(huì)殘有大量多元酚，萃取不完全。為了避免多元酚在水中的殘留，選用了醋酸乙酯直接萃取的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此富集工藝效果較好。據(jù)報(bào)道植物中的多元酚類成分對(duì)腫瘤預(yù)防和控制惡化有重要作用。通過(guò)此富集工藝獲得了油茶果皮中的多元酚類成分，這也為確證油茶果皮的抗腫瘤作用和開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供了一條新途徑。

【參考文獻(xiàn)】

［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典，上冊(cè)［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2000,1603.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典,Ⅰ部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:278