念珠菌對(duì)5種抗真菌藥的藥物敏感性研究

念珠菌對(duì)5種抗真菌藥的藥物敏感性研究

由于抗生素和非抗真菌藥物的廣泛應(yīng)用，山羊感染的可能性近年來顯著增加。念珠菌可以引起人體淺部和全身性感染,因其侵犯部位及患者狀態(tài)不同而表現(xiàn)不同,并注意到念珠菌對(duì)常用抗真菌藥物存在耐藥菌株。我們采用濃度梯度法(Etest法)測定,由臨床標(biāo)本分離的173株念珠菌屬(Candida)對(duì)抗真菌藥物兩性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的敏感性,現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。1數(shù)據(jù)和方法1.1真菌分離和分離2002年2月～2003年8月,在北京大學(xué)深圳醫(yī)院呼吸內(nèi)科、腎內(nèi)科、血液科、內(nèi)分泌科、心臟外科、腦外科和重癥監(jiān)護(hù)室、婦產(chǎn)科,從血、尿、痰和腦脊液、陰道分泌物等標(biāo)本中共分離到念珠菌173株。1.2個(gè)月生動(dòng)物培養(yǎng)念珠菌分離采用ChromAgar或薩布羅瓊脂平板35℃、培養(yǎng)24～48h。鑒定采用Bio-Merieux生產(chǎn)的APICandida,API20CAUX鑒定分離菌株。1.3抗真菌藥敏試驗(yàn)Etest試紙條為瑞典ABBiodisk公司產(chǎn)品。包括兩性霉素B0.002～32μg/ml、伊曲康唑0.002～32μg/ml、酮康唑0.002～32μg/ml、氟胞嘧啶0.002～32μg/ml、氟康唑0.016～256μg/ml。藥敏培養(yǎng)基成分:RPMI-1640(Gibco產(chǎn)品),0.165MMOPS(Sigma),1.5%Bacto瓊脂(Difco產(chǎn)品),2%葡萄糖。121℃、15min,制成直徑150mm的平板。Etest法:純化的菌種,制備成濁度為0.5McFarland的菌懸液,均勻涂布于藥敏專用培養(yǎng)基上,平板干燥15min后將5種Etest試紙條按約為72度夾角緊貼附于培養(yǎng)基上,放置于35℃培養(yǎng)24h,在抑菌環(huán)與紙條上藥物濃度刻度交界處讀取MIC值。質(zhì)控菌株ATCC90028對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行質(zhì)量控制。結(jié)果按NCCLSM27-A抗真菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)判定:兩性霉素BMIC≤1μg/ml、伊曲康唑MIC≤0.125μg/ml、酮康唑MIC≤0.5μg/ml、氟胞嘧啶MIC≤4μg/ml、氟康唑MIC≤8μg/ml為敏感;兩性霉素BMIC≥2μg/ml、伊曲康唑MIC≥1μg/ml、酮康唑MIC≥4μg/ml、氟胞嘧啶MIC≥32μg/ml、氟康唑MIC≥64μg/ml為耐藥;伊曲康唑MIC在0.25～0.5μg/ml、酮康唑MIC在0.5～2μg/ml、氟胞嘧啶MIC在8～16μg/ml、氟康唑MIC在16～32μg/ml為劑量依賴敏感。當(dāng)讀取的抑菌濃度為0.19μg/ml、0.75μg/ml、3μg/ml、6μg/ml、24μg/ml時(shí),歸到相鄰的高濃度梯度范圍內(nèi)。2結(jié)果2.1ic范圍、mic50、mic29173株念珠菌對(duì)5種抗真菌藥物的MIC范圍、MIC50、MIC90檢測結(jié)果見表1。173株念珠菌在5種抗真菌藥物不同濃度抑菌株數(shù)分布見表2。2.2種抗真菌藥的耐藥率根據(jù)NCCLSM27-A抗真菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),白色念珠菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐藥率依次為1.1%、10.8%、5.4%、2.2%和5.4%。光滑念珠菌對(duì)上述5種抗真菌藥的耐藥率依次為6.5%、54.8%、22.5%、3.2%和16.2%。熱帶念珠菌對(duì)上述5種抗真菌藥的耐藥率依次為12.5%、12.5%、4.2%、4.2%和4.2%。克柔念珠菌對(duì)上述5種抗真菌藥的耐藥率依次為16.7%、33.3%、8.3%、16.7%和33.3%。近平滑念珠菌對(duì)上述5種抗真菌藥的耐藥率依次為0、25.0%、0、0和25.0%。見表2。3抗菌藥物的耐藥情況念珠菌的耐藥性最近受到重視,并有多種方法可用于研究念珠菌對(duì)抗真菌藥物的耐藥性。用NCCLSM27-A微量稀釋法與Etest法進(jìn)行對(duì)比研究,結(jié)果2種方法有很好的一致性,認(rèn)為Etest法與微量稀釋法可作為互相替代的藥敏檢測方法。以下結(jié)合筆者研究結(jié)果,探討臨床常見念珠菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性。白色念珠菌仍然是最常分離到的念珠菌,其對(duì)抗真菌藥物的敏感性高于非白色念珠菌。念珠菌對(duì)抗真菌藥物的敏感率從高向低依次為白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌。根據(jù)Pfaller等的研究,白色念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑的耐藥率分別為0.6%～1.1%和0.6%～2.2%。其MIC90分別為0.5～1μg/ml和0.12μg/ml。Sobel等對(duì)白色念珠菌進(jìn)行藥敏檢測,96%的白色念珠菌對(duì)氟康唑敏感,0.4%的白色念珠菌對(duì)氟康唑劑量依賴敏感,3.6%的白色念珠菌對(duì)氟康唑耐藥。陶風(fēng)蓉等報(bào)道,白色念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥率為1.9%。本研究中,白色念珠菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐藥率依次為1.1%、10.8%、5.4%、2.2%和5.4%。光滑念珠菌是僅次于白色念珠菌的常見念珠菌。Pfaller等報(bào)道,光滑念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑的耐藥率分別為5.2%～8.7%和32.8%～36.9%。其MIC90分別為16～32μg/ml和2μg/ml。Sobel等對(duì)光滑念珠菌進(jìn)行藥敏檢測,4.5%的光滑念珠菌對(duì)氟康唑耐藥。Safdar等報(bào)道347株光滑念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑的耐藥率分別為10.7%和15.2%。劑量依賴敏感分別為9.8%和42.7%。Holland等對(duì)VVC患者的89株光滑念珠菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn),71%對(duì)氟康唑劑量依賴敏感,3.4%對(duì)氟康唑耐藥。24%的光滑念珠菌對(duì)伊曲康唑劑量依賴敏感,71%對(duì)伊曲康唑耐藥。陶風(fēng)蓉等報(bào)道,光滑念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥率為42.6%。本研究中,光滑念珠菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐藥率依次為6.5%、54.8%、22.5%、3.2%和16.2%。Pfaller等報(bào)道,熱帶念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑的耐藥率分別為0和3.6%～4.2%。陶風(fēng)蓉等報(bào)道,熱帶念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥率為7.4%。本研究中,熱帶念珠菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐藥率依次為12.5%、12.5%、4.2%、4.2%和4.2%?？巳崮钪榫鷮?duì)氟康唑天然耐藥,對(duì)其他抗真菌藥物也有較高的耐藥性。Holland等報(bào)道,11.1%的克柔念珠菌對(duì)伊曲康唑的耐藥,88.9%對(duì)伊曲康唑?yàn)閯┝恳蕾嚸舾?。Pfaller等報(bào)道,克柔念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑的耐藥率分別為100%和0%～66.6%。陶風(fēng)蓉等報(bào)道,克柔念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥率為37.5%。本研究中,克柔念珠菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐藥率依次為16.7%、33.3%、8.3%、16.7%和33.3%。Pfaller等和St-Germain等報(bào)道,近平滑念珠菌對(duì)常用的抗真菌藥物敏感,對(duì)氟康唑、酮康唑和兩性霉素B無耐藥菌株。陶風(fēng)蓉等也證實(shí)近平滑念珠菌對(duì)氟康唑無耐藥存在。我們對(duì)4株近平滑念珠菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn),近平滑念珠菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和