動(dòng)物醫(yī)學(xué)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)

地錦草黃酮的提取及其藥敏實(shí)驗(yàn)地錦草(HumifuseEuphorbaiaHerb)別名血見悉、紅絲草、奶疳草、奶漿草。來(lái)源為大戟科植物地棉EuphorbiahumifusaWilld.的地上部分。植物形態(tài)一年生葡萄草本，有白色乳汁。莖纖細(xì)，近基部分枝，帶紫紅色，無(wú)毛。葉對(duì)生，長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)4～10mm，寬4～6mm，先端鈍圓，基部偏斜，邊緣有細(xì)齒，綠色或帶紅色，兩面無(wú)毛或疏生柔毛。種子卵形，黑褐色，外被白色蠟粉?；ㄆ?～10月，果實(shí)7月后漸次成熟。生于平原荒地、路邊、田間。除廣東、廣西外，全國(guó)各地均產(chǎn)。采制夏、秋季采收，除去雜質(zhì)，曬干。

圖1地錦草植株形態(tài)一、實(shí)驗(yàn)原理（一）地錦草黃酮的提取黃酮是地錦草的主要有效成分之一，具有三環(huán)苯基苯并吡喃結(jié)構(gòu)的呈色化合物。黃酮類化合物均可溶于乙醇，而超聲波的超聲空化作用對(duì)細(xì)胞膜的破壞有助于黃酮類化合物的釋放與溶出，超聲波使提取液不斷振蕩，有助于溶質(zhì)的擴(kuò)散，提高了有效成份的提取率以及原料的利用率。本實(shí)驗(yàn)將傳統(tǒng)的回流提取法結(jié)合超聲波法提取地錦草黃酮。（二）地錦草黃酮的純化利用D-101大孔樹脂的吸附與篩選原理，經(jīng)一定的溶劑洗脫不同分子量的化合物，從而得到分離純化，得到總黃酮。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┱莆仗崛〉劐\草黃酮的方法；（二）掌握藥敏實(shí)驗(yàn)的基本步驟。三、實(shí)驗(yàn)用儀器及材料實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子天平、恒溫水浴鍋、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、超聲波細(xì)胞粉碎儀、冷凍干燥機(jī)、圓底燒瓶、平皿、漏斗、燒杯等。實(shí)驗(yàn)對(duì)象及材料地錦草干燥粉末、80%乙醇、D-101大孔吸附樹脂、牛肉浸膏、蛋白胨、瓊脂、氯化鈉等。四、實(shí)驗(yàn)方法（一）地錦草黃酮的提取1.1粗提物的提取準(zhǔn)確稱取地錦草干燥粉末20g，80%的乙醇200ml超聲25min，轉(zhuǎn)移至500ml的圓底燒瓶，60℃加熱回流2h，共回流2次，過濾，合并濾液，減壓濃縮濾液，濃縮后加少量純凈水，于燒杯中靜置過夜，離心除雜，取上清液。四、實(shí)驗(yàn)方法1.2粗提物的純化將預(yù)處理的D-101大孔吸附樹脂濕法裝柱，先用95%的乙醇洗脫，再用蒸餾水洗脫，直至洗脫液無(wú)乙醇?xì)馕丁Ｈ?0ml粗提液，以2BV/h流速上柱，上柱完畢后靜置吸附30min，吸附后先用蒸餾水洗脫，洗