王靜杰 開題報(bào)告ppt

羅氏沼蝦促雄性腺激素基因克隆與表達(dá)專業(yè)：海洋生物學(xué)方向：海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)姓名：王靜杰導(dǎo)師：李廣麗教授目錄課題研究目的及意義國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀羅氏沼蝦促雄性腺的研究羅氏沼蝦促雄性腺激素研究研究?jī)?nèi)容研究方法技術(shù)路線圖創(chuàng)新點(diǎn)研究基礎(chǔ)及進(jìn)度安排課題研究目的及意義研究對(duì)象：羅氏沼蝦成蝦個(gè)體一般雄性大于雌性養(yǎng)殖范圍廣研究目的：AGH基因序列時(shí)空表達(dá)——不同組織胚胎發(fā)育不同時(shí)期研究意義：為甲殼動(dòng)物的遺傳育種和性別的定向控制提供理論依據(jù)。對(duì)實(shí)現(xiàn)某些經(jīng)濟(jì)蝦蟹類的單性化養(yǎng)殖，促進(jìn)名優(yōu)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。羅氏沼蝦促雄性腺的研究促雄性腺AndrogenicGland,AG促雄性腺激素AndrogenicGlandHormone,AGH羅氏沼蝦促雄性腺的研究1980年Nagamine：促雄性腺對(duì)于雄性第二性征的產(chǎn)生有決定作用。1990年Sagi：去促雄性腺，獲得了雌性個(gè)體，再以此個(gè)體與正常的雄性個(gè)體交配，得到全雄的群體。1992年Malecha：移植促雄性腺，培育出性逆轉(zhuǎn)的全雄性個(gè)體。2006年Aflalo和WikromRungsin：去促雄性腺的雄蝦反轉(zhuǎn)成雌蝦與雄蝦雜交培育出了全雄羅氏沼蝦家系。

羅氏沼蝦促雄性腺激素研究張銀華：液相色譜-電噴霧電離-質(zhì)譜聯(lián)用，分離羅氏沼蝦AGH類似物，得分子量17480u為主要組分的混合蛋白。劉萍：構(gòu)建羅氏沼蝦促雄性腺cDNA文庫(kù)，12條EST（表達(dá)序列標(biāo)簽）序列，其中4個(gè)cDNA功能基因，4個(gè)rRNA，4個(gè)新基因。馬文明：羅氏沼蝦AGH類似物（rMAL），建立了對(duì)促雄性腺提取物及其類似物的生物學(xué)活性分析和RNA干擾的有效方法。研究?jī)?nèi)容雄性腺激素基因cDNA克隆；雄性腺激素在組織分布；雄性腺激素的胚胎表達(dá)。研究方法引物設(shè)計(jì)提取促雄性腺的總RNA兩步法RT-PCRDNA純化回收連接，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒PCR，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)測(cè)序半定量RT-PCR檢測(cè)AGH基因時(shí)空表達(dá)引物設(shè)計(jì)摘錄GenBank中已登錄的AGH序列，應(yīng)用DNAssist2.0比對(duì)找出保守區(qū)，利用Primer5.0設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物。遵循引物設(shè)計(jì)原則：發(fā)卡結(jié)構(gòu)Dimmer錯(cuò)配總RNA提取TRizol（異硫氰酸胍）法組織勻漿氯仿，異丙醇抽提75%乙醇洗滌溶解RNARNA易降解解剖器、吸頭、離心管需要RNaseFree

戴口罩，勤換手套

兩步法RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈PrimeScriptII1stStrandcDNASynthesisKit試劑盒PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）即用PCR擴(kuò)增試劑盒出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增重新設(shè)計(jì)引物或者使用巢式PCR適當(dāng)降低模板或引物濃度適當(dāng)減少酶量降低鎂離子濃度適當(dāng)提高退火溫度減少循環(huán)次數(shù)DNA純化回收通用型DNA純化回收試劑盒DNA回收效率較低或者未回收到目的片段延長(zhǎng)水浴時(shí)間，使膠塊充分溶解第一次使用時(shí)按比例添加乙醇，并在試劑瓶上做標(biāo)記離心轉(zhuǎn)速不夠