細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染和預(yù)防

細(xì)胞培養(yǎng)中的污染和預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過程中引起污染的因素

細(xì)胞培養(yǎng)污染是指培養(yǎng)環(huán)境中侵入了對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞變異的異物。

體外細(xì)胞培養(yǎng)污染可分為3類：物理性、化學(xué)性及生物性污染。一、物理性污染

物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分，從而影響細(xì)胞的代謝。1、物理性污染的來源

培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動、輻射（紫外線或熒光）會對細(xì)胞產(chǎn)生影響。2、物理性污染的現(xiàn)象

細(xì)胞、培養(yǎng)液或其他培養(yǎng)試劑暴露在放射線、輻射或過冷過熱的溫度中，可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變，如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長受抑制，甚至細(xì)胞死亡。3、物理性污染的預(yù)防1）、實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)計(jì)及建立規(guī)范的操作規(guī)程；2）、培養(yǎng)箱應(yīng)放在恒溫的環(huán)境中；3）、培養(yǎng)液及試劑應(yīng)放在固定位置，而且要注意避光，試劑周圍不能放置同位素；4）、從冰箱中取出的培養(yǎng)液應(yīng)在室溫條件中放置一段時(shí)間后再進(jìn)行使用，以避免過冷的溫度對細(xì)胞的影響。二、化學(xué)性污染

將一些對細(xì)胞有毒性或?qū)?xì)胞產(chǎn)生刺激性的化學(xué)物質(zhì)稱為化學(xué)性污染1、化學(xué)性污染的來源

未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。

細(xì)胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分（如氨基酸）若濃度超過了合理的范圍，也會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性。同樣，不同細(xì)胞系在最佳培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的，在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制。2、化學(xué)性污染的現(xiàn)象化學(xué)性污染同樣會使細(xì)胞生長受抑制，甚至細(xì)胞死亡。3、化學(xué)性污染的預(yù)防1）、使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,同時(shí)正確配制和儲存培養(yǎng)液及試劑；2）、在配制液體和清洗容器時(shí)必須使用不含雜質(zhì)的超純水。3）、選用同一批次的血清。4）、在選用器皿時(shí)，根據(jù)被培養(yǎng)細(xì)胞的生長特性、培養(yǎng)方式和所用培養(yǎng)液的性質(zhì)來選用適合的器皿來達(dá)到實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。三、生物性污染

生物污染包括比較容易發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌、霉菌和酵母的污染，和較難發(fā)現(xiàn)的病毒、支原體和其他細(xì)胞的污染。1、生物性污染的來源1)取材不慎或處理不當(dāng)2)空氣塵埃3)消毒不嚴(yán)4)操作不當(dāng)5)試劑尤其是血清污染2、生物性污染的現(xiàn)象常見的生物性污染：

1)、細(xì)菌：G+菌較多。

2)、真菌：霉菌較多。

3)、支原體：不易檢測。

4)、病毒：由于病毒有種屬特異性，所以病毒污染的概率比較小。1）細(xì)菌污染

大多數(shù)細(xì)菌（bacteria）污染可以改變培養(yǎng)液pH，使培養(yǎng)液變渾濁、變色。用相差顯微鏡觀察，可見滿視野都是