高中生物選擇性必修3基因工程單元檢測試卷

高中生物選擇性必修3第3章基因工程單元檢測試卷題號(hào)一二三總分得分評(píng)卷人得分一、多選題1．下列生物技術(shù)操作對(duì)遺傳物質(zhì)的改造，會(huì)遺傳給子代的是（）A．將胰島素基因體現(xiàn)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，篩選獲得基因工程菌B．將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細(xì)胞，經(jīng)組培獲得花色變異植株C．將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?，哺育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛D．將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細(xì)胞后回輸患者，進(jìn)行基因治療評(píng)卷人得分二、綜合題2．嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的葡萄糖苷酶（BglB酶）是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更加好地應(yīng)用，開展了下列實(shí)驗(yàn)：I．運(yùn)用大腸桿菌體現(xiàn)BgIB酶（1）PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用_______________的基因組DNA作模板。（2）如圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶的識(shí)別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入__________和_________不同限制酶的識(shí)別序列。（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的體現(xiàn)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是由于______________________________。Ⅱ．溫度對(duì)BgIB酶活性的影響（4）據(jù)圖1，2可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會(huì)__________；為高效運(yùn)用BgIB酶降解纖維素，反映溫度最佳控制在____________（單選）。A．50℃B．60℃C．70℃D．80℃注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過其活性的保持程度來反映的。Ⅲ．運(yùn)用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴(kuò)增bglB基因的過程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。通過篩選，可獲得能體現(xiàn)出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。（5）與用誘變劑直接解決嗜熱土壤芽孢桿菌相比，上述育種技術(shù)獲得熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其因素是在PCR過程中__________（多選）。A．僅針對(duì)bglB基因進(jìn)行誘變B．bglB基因產(chǎn)生了定向突變C．bglB基因可快速累積突變D．bglB基因突變不會(huì)造成酶的氨基酸數(shù)目變化3．干擾素是動(dòng)物體內(nèi)的一種蛋白質(zhì)，可用于治療病毒感染和癌癥。長久以來，人們運(yùn)用有關(guān)病毒誘導(dǎo)白細(xì)胞產(chǎn)生干擾素，再從血液中提取，但每升血只能提取0.05μg。1982年，我國科學(xué)家通過基因工程技術(shù)開發(fā)研制出我國首個(gè)基因工程藥品——重組人干擾素?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：（1）相對(duì)于從基因組文庫中獲取的干擾素基因，從經(jīng)病毒免疫的細(xì)胞中提取mRNA，再逆轉(zhuǎn)錄并構(gòu)建的cDNA文庫中獲取的干擾素基因，更易在大腸桿菌中合成正常干擾素。從基因體現(xiàn)的角度分析，其因素是________________________________________________。（2）天然的干擾素很難在體外保存，但通過蛋白質(zhì)工程能得到“可保存的干擾素”。蛋白質(zhì)工程以_____________和_____________的關(guān)系為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)。（3）如圖為該基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建，需同時(shí)用限制酶HindⅢ和BstⅠ解決目的基因和質(zhì)粒，重要目的是_____________________________________________________________________。（4）質(zhì)粒中l(wèi)acZ基因編碼的半乳糖苷酶，能催化生成藍(lán)色物質(zhì)從而將細(xì)菌染成藍(lán)色。在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中，未被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌的生長現(xiàn)象是___________，含有質(zhì)粒的大腸桿菌的生長現(xiàn)象是_____________，含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌的生長現(xiàn)象是_____________，從而獲得所需重組細(xì)胞。（注：若能正常生長需要寫出菌落特性）（5）轉(zhuǎn)基因細(xì)菌產(chǎn)生的干擾素可能會(huì)成為某些人的過敏原，存在潛在風(fēng)險(xiǎn)。有科學(xué)家將干擾素基因轉(zhuǎn)入小鼠基因組，獲得膀胱生物反映器，最后在尿液中獲得干擾素。在該操作中，應(yīng)使干擾素基因在_____________細(xì)胞中特異性體現(xiàn)。4．如圖是運(yùn)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的流程示意圖，請(qǐng)回到下列問題：(1)合成人胰島素的RNA應(yīng)從人類的______________細(xì)胞中獲?。惠^之于從基因組文庫中獲取的目的基因，圖示辦法獲取的目的基因所含堿基數(shù)量__________(填“更多”“更少”或“同樣多”)。(2)將質(zhì)粒A和目的基因結(jié)合為重組質(zhì)粒的過程中，需要使用的酶有______________________，這兩個(gè)不同的DNA分子能進(jìn)行重組的因素是_______________(3)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌B之前，常需要使用__________解決細(xì)菌B，使導(dǎo)入更易成功。(4)在篩選目的細(xì)菌的過程中，我們應(yīng)當(dāng)選擇__________(填序號(hào))。A．在含氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都能存活的細(xì)菌B．在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能存活，含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能存活的細(xì)菌C．在四環(huán)素的培養(yǎng)基中能存活，含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中不能存活的細(xì)菌D．在含氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都不能存活的細(xì)菌(5)選擇細(xì)菌作為受體細(xì)胞的因素可能是______________，在細(xì)菌培養(yǎng)液中分離得到的目的基因的體現(xiàn)產(chǎn)物_____________(填“能”或“不能”)直接使用。5．金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在的金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計(jì)劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒从常≒CR）擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化解決。PCR擴(kuò)增過程示意圖如圖，請(qǐng)回答下列問題：（1）從高體現(xiàn)MT蛋白的生物組織中提取mRNA，通過_____獲得_____用于PCR擴(kuò)增。（2）設(shè)計(jì)一對(duì)與MT基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物（引物1和引物2），為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適宜的_____位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間_____，而造成引物自連。（3）PCR擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定是成敗的核心。退火溫度過高會(huì)破壞_____的堿基配對(duì)。退火溫度的設(shè)定與引物長度、堿基構(gòu)成有關(guān)，長度相似但_____的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。（4）如果PCR反映得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，則能夠采用的改善方法有_____（填序號(hào)：①升高退火溫度②減少退火溫度③重新設(shè)計(jì)引物）。（5）圖中環(huán)節(jié)1代表_____，環(huán)節(jié)2代表退火，環(huán)節(jié)3代表延伸。6．科研人員運(yùn)用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖1所示，圖2、圖3分別表達(dá)干擾素基因及質(zhì)粒的有關(guān)信息。（1）在圖1治療過程中與否體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性，為什么？__________（填“是”或“否”），________________________。（2）分析圖2、圖3，對(duì)干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時(shí)，可選用的限制酶組合為______________。（3）為了得到實(shí)驗(yàn)所需的大量干擾素基因，研究人員運(yùn)用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。由于DNA復(fù)制時(shí)，子鏈只能由方向延伸，因此能夠從圖2所示的A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選用_____作為引物。若要將1個(gè)干擾素基因復(fù)制4次，則需要在緩沖液中最少加入__________個(gè)引物。（4）將環(huán)節(jié)③獲得的ES細(xì)胞放在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)_________色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)。為檢測干擾素基因與否體現(xiàn)，能夠采用__________辦法進(jìn)行檢測。（5）科學(xué)家通過蛋白質(zhì)工程技術(shù)將干擾素分子中的一種半胱氨酸變成絲氨酸，就能夠在不影響其活性的前提下延長其保存周期。這項(xiàng)技術(shù)是以_____________________________為基礎(chǔ)而進(jìn)行的操作。7．水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉，直鏈淀粉所占比例越小糯性越強(qiáng)?？蒲腥藛T將能體現(xiàn)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻，實(shí)現(xiàn)了對(duì)直鏈淀粉合成酶基因（Wx基因）啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯，從而獲得了3個(gè)突變品系。（1）將能體現(xiàn)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí)，所需的酶是______，重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和體現(xiàn)的過程稱為_____________。（2）根據(jù)啟動(dòng)子的作用推測，Wx基因啟動(dòng)子序列的變化影響了______，從而變化了Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平。與野生型水稻相比，3個(gè)突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列___(填：發(fā)生或不發(fā)生)變化，因素是_____________。（3）為檢測啟動(dòng)子變化對(duì)Wx基因體現(xiàn)的影響，科研人員需要檢測Wx基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA（WxmRNA）的量。檢測時(shí)分別提取各品系胚乳中的總RNA，經(jīng)_____過程獲得總cDNA。通過PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性的擴(kuò)增出Wx基因的cDNA，因素是_____________。（4）各品系WxmRNA量的檢測成果如圖所示，據(jù)圖推測糯性最強(qiáng)的品系為_____，因素是___________。8．基因工程中能夠通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。回答下列問題。（1）基因工程中所用的目的基因能夠人工合成，也能夠從基因文庫中獲得。基因文庫涉及________和________。（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是________。在體外運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反映體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是________。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的________。（3）現(xiàn)在在PCR反映中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的重要因素是________。9．圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0含有四環(huán)素抗性基因（tetr)和氨芐青霉素抗性基因（ampr）。請(qǐng)回答下列問題：（1）EcoRV酶切位點(diǎn)為，EcoRV酶切出來的線性載體P1為___________末端。（2）用TaqDNA聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一種腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶解決，在兩端各添加了一種堿基為___________的脫氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在__________酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。（3）為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進(jìn)行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長狀況以下表（“+”代表生長，“﹣”代表不生長）。根據(jù)表中成果判斷，應(yīng)選擇的菌落是__________（填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入狀況分別是_____、________________。（4）為鑒定篩選出的菌落中與否含有對(duì)的插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在對(duì)的重組質(zhì)粒中的對(duì)應(yīng)位置，PCR鑒定時(shí)應(yīng)選擇的一對(duì)引物是__________。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對(duì)引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增出了400bp片段，因素是_______________。10．人的T細(xì)胞能夠產(chǎn)生某種含有臨床價(jià)值的蛋白質(zhì)（Y），該蛋白質(zhì)由一條多肽鏈構(gòu)成?，F(xiàn)在能夠運(yùn)用當(dāng)代生物技術(shù)生產(chǎn)Y?；卮鹣铝袉栴}。（1）若要獲得Y的基因，可從人的T細(xì)胞中提取___________作為模板，在____________催化下合成cDNA，再運(yùn)用_______________技術(shù)在體外擴(kuò)增獲得大量Y的基因。（2）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞慣用的辦法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。若將上述所得Y的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的__________________中，得到含目的基因的重組Ti質(zhì)粒，則可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將該基因?qū)肽撤N植物的葉肉細(xì)胞中。若該葉肉細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、篩選等得到了能穩(wěn)定體現(xiàn)Y的愈傷組織，則闡明Y的基因已經(jīng)_______________。（3）天然的Y普通需要在低溫條件下保存。假設(shè)將Y的第6位氨基酸甲變化為氨基酸乙可提高其熱穩(wěn)定性，若要根據(jù)蛋白質(zhì)工程的原理對(duì)Y進(jìn)行改造以提高其熱穩(wěn)定性，具體思路是__________________。11．某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的體現(xiàn)。某科研團(tuán)體將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的末端，獲得了L1－GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核體現(xiàn)載體P1，其部分構(gòu)造和酶切位點(diǎn)的示意圖以下，圖中E1～E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相似。回答下列問題：（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)體在將甲插入質(zhì)粒P0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶是__________。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了確保__________，也是為了確保__________。（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則闡明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完畢了__________和__________過程。（3）為了檢測甲與否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同窗用PCR辦法進(jìn)行鑒定，在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的__________（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。評(píng)卷人得分三、實(shí)驗(yàn)題12．B基因存在于水稻基因組中，其僅在體細(xì)胞（2n）和精子中正常體現(xiàn)，但在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因體現(xiàn)對(duì)卵細(xì)胞的影響，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)。據(jù)圖回答：（1）B基因在水稻卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄，推測其可能的因素是卵細(xì)胞中________。A．含B基因的染色體缺失B．DNA聚合酶失活C．B基因發(fā)生基因突變D．B基因的啟動(dòng)子無法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄（2）從水稻體細(xì)胞或________中提取總RNA，構(gòu)建____________文庫，進(jìn)而獲得B基因編碼蛋白的序列。將該序列與Luc基因（體現(xiàn)的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光）連接成融合基因（體現(xiàn)的蛋白質(zhì)能保存兩種蛋白質(zhì)各自的功效），然后構(gòu)建重組體現(xiàn)載體。（3）在過程①、②轉(zhuǎn)化篩選時(shí)，過程______________中T-DNA整合到受體細(xì)胞染色體DNA上，過程__________________在培養(yǎng)基中應(yīng)加入卡那霉素。（4）獲得轉(zhuǎn)基因植株過程中，下列鑒定篩選方式對(duì)的的是________。A．將隨機(jī)斷裂的B基因片段制備成探針進(jìn)行DNA分子雜交B．以Luc基由于模板設(shè)計(jì)探針進(jìn)行DNA分子雜交C．以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計(jì)探針與從卵細(xì)胞提取的mRNA雜交D．檢測加入熒光素的卵細(xì)胞中與否發(fā)出熒光（5）從轉(zhuǎn)基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細(xì)胞內(nèi)僅含一種染色體組，鑒定該胚是由未受精的卵細(xì)胞發(fā)育形成的，而普通狀況下水稻卵細(xì)胞在未受精時(shí)不進(jìn)行發(fā)育，由此表明_________________。13．回答下列問題：（1）博耶（H.Boyer）和科恩（S.Coben）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了體現(xiàn)。該研究除證明了質(zhì)粒能夠作為載體外，還證明了___________（答出兩點(diǎn)即可）。（2）體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2+參加的___________辦法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞，而體外重組的噬菌體DNA普通需與___________組裝成完整的噬菌體后，才干通過侵染的辦法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞，在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是___________。（3）真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)體現(xiàn)時(shí)，體現(xiàn)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。為避免蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用______________________的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加___________的克制劑。參考答案1．ABC【分析】（1）基因工程的基本操作程序重要涉及四個(gè)環(huán)節(jié)：一是目的基因的獲??；二是基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建；三是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；四是目的基因的檢測與鑒定。若受體細(xì)胞為大腸桿菌等單細(xì)胞生物，則導(dǎo)入的目的基因會(huì)隨單細(xì)胞生物的生殖遺傳給后裔。若受體細(xì)胞為植物細(xì)胞，則導(dǎo)入的目的基因可通過無性繁殖遺傳給后裔。若受體細(xì)胞為動(dòng)物的受精卵，則導(dǎo)入的目的基因可通過轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的有性生殖遺傳給后裔。

（2）基因治療是指把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的體現(xiàn)產(chǎn)物發(fā)揮功效，從而達(dá)成治療疾病的目的。由于病人的生殖細(xì)胞中沒有目的基因，因此導(dǎo)入的目的基因不會(huì)遺傳給后裔?！驹斀狻緼、將胰島素基因體現(xiàn)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，獲得的工程菌中含有對(duì)應(yīng)的遺傳物質(zhì)并能夠遺傳給后裔，A對(duì)的；B、將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細(xì)胞，獲得的植株花色發(fā)生了變異，闡明花青素代謝基因成功體現(xiàn)，此性狀可通過無性繁殖遺傳給后裔，B對(duì)的；C、向奶牛受精卵中導(dǎo)入腸乳糖酶基因，哺育出的奶?？珊铣扇樘敲福樘敲阜纸馊樘?，使牛乳中乳糖含量減少，闡明乳糖酶基因成功體現(xiàn)，該基因也能遺傳給子代，C對(duì)的；D、將腺苷酸脫氨酶基因?qū)肓馨图?xì)胞，不影響生殖細(xì)胞中的基因，故不能遺傳給后裔，D錯(cuò)誤。故選ABC。2．嗜熱土壤芽孢桿菌NdeⅠBamHⅠ轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶失活BAC【分析】基因工程技術(shù)的基本環(huán)節(jié)：（1）目的基因的獲?。恨k法有從基因文庫中獲取、運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心環(huán)節(jié)，基因體現(xiàn)載體涉及目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的辦法也不同。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的辦法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的辦法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的辦法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA與否插入目的基因-DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因與否轉(zhuǎn)錄出了mRNA-分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因與否翻譯成蛋白質(zhì)-抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻縄．（1）根據(jù)題意可知，葡萄糖苷酶（BglB酶）是由嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的，因此PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用嗜熱土壤芽孢桿菌的基因組DNA作模板。（2）根據(jù)啟動(dòng)子和終止子的生理作用可知，目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子和終止子之間。由題圖可看出，兩者之間存在三種限制酶的酶切位點(diǎn)，但是由于XbaⅠ在質(zhì)粒上有不止一種酶切位點(diǎn)，用XbaI切割會(huì)使質(zhì)粒丟失終止子，因此為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入NdeⅠ和BamHI限制酶的識(shí)別序列。（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的體現(xiàn)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是由于轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶。Ⅱ．（4）據(jù)題圖2可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會(huì)失活；由題圖1可看出，60～70℃時(shí)該酶的相對(duì)活性最高，而由題圖2可看出，隨著保溫時(shí)間的延長，70℃條件下酶的相對(duì)活性下降明顯，因此為高效運(yùn)用BglB酶降解纖維素，反映溫度最佳控制在60℃，即B對(duì)的。故選B。（5）A、PCR過程中僅針對(duì)bglB基因進(jìn)行誘變，而用誘變劑直接解決嗜熱土壤芽孢桿菌對(duì)嗜熱土壤芽孢桿菌體內(nèi)的全部DNA均起作用，A對(duì)的；B、基因突變含有不定向性，B錯(cuò)誤；C、突變后的bglB基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，可快速累積突變，C對(duì)的；D、BglB基因突變可能會(huì)造成酶的氨基酸數(shù)目變化，D錯(cuò)誤。故選AC?！军c(diǎn)睛】本題考察基因工程、酶、育種等知識(shí)，旨在考察獲取信息、運(yùn)用信息及所學(xué)知識(shí)進(jìn)行分析、判斷的能力及識(shí)圖能力。3．從基因組文庫中獲得的干擾素基因有內(nèi)含子，在大腸桿菌中與其對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除，無法體現(xiàn)出干擾素蛋白質(zhì)分子的構(gòu)造規(guī)律生物功效避免目的基因和載體本身環(huán)化或反向連接無法生長正常生長，菌落呈藍(lán)色正常生長，菌落呈白色膀胱上皮【分析】基因工程技術(shù)的基本環(huán)節(jié)：（1）目的基因的獲?。恨k法有從基因文庫中獲取、運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心環(huán)節(jié)，基因體現(xiàn)載體涉及目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的辦法也不同。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的辦法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的辦法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的辦法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA與否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因與否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因與否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）從基因組文庫中獲得的干擾素基因有內(nèi)含子，在大腸桿菌中與其對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除，造成干擾素基因無法成功體現(xiàn)。而從經(jīng)病毒免疫的細(xì)胞中提取mRNA，再逆轉(zhuǎn)錄并構(gòu)建的cDNA文庫中獲取的干擾素基因，無內(nèi)含子，更易在大腸桿菌中合成正常干擾素。（2）蛋白質(zhì)工程以蛋白質(zhì)分子的構(gòu)造規(guī)律和生物功效的關(guān)系為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)。（3）在構(gòu)建該基因體現(xiàn)載體時(shí)，需同時(shí)用限制酶HindⅢ和BstⅠ解決目的基因和質(zhì)粒，主這樣能夠避免目的基因和載體本身環(huán)化或反向連接。（4）在重組質(zhì)粒中，由于限制酶HindⅢ和BstⅠ的作用，破壞了lacZ基因，造成半乳糖苷酶不能合成，而半乳糖苷酶能催化生成藍(lán)色物質(zhì)從而將細(xì)菌染成藍(lán)色。在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中，未被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌不含四環(huán)素抗性基因，無法生長；含有質(zhì)粒的大腸桿菌含有四環(huán)素抗性基因，能正常生長，且含有l(wèi)acZ基因，菌落呈藍(lán)色；含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌含有四環(huán)素抗性基因，能正常生長，但lacZ基因被破壞，菌落呈白色。（5）科學(xué)家將干擾素基因轉(zhuǎn)入小鼠基因組，獲得膀胱生物反映器，最后在尿液中獲得干擾素，這個(gè)過程中，應(yīng)使干擾素基因在膀胱上皮細(xì)胞中特異性體現(xiàn)，從而使尿液中含有了干擾素?！军c(diǎn)睛】熟知基因工程的原理和操作流程是解答本題的核心，能對(duì)的辨析題中的目的基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建過程以及其中的標(biāo)記基因的變化是解答本題的難點(diǎn)，蛋白質(zhì)工程的原理及其特點(diǎn)也是本題的考察點(diǎn)。4．胰島B更少限制酶和DNA連接酶不同DNA分子含有相似的化學(xué)構(gòu)成和空間構(gòu)造Ca2+B細(xì)胞代謝和繁殖速度快，能快速獲得大量產(chǎn)物；本身基因組較小，較易獲得成功不能【分析】1、基因文庫是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入到受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因。基因組文庫包含某種生物全部的基因；部分基因文庫包含某種生物的部分基因，如：cDNA文庫。2、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的辦法也不同。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的辦法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的辦法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的辦法是感受態(tài)細(xì)胞法。3、基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建：①過程：用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，再用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子。②目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且能夠遺傳給下一代并體現(xiàn)和發(fā)揮作用。③基因體現(xiàn)載體的構(gòu)成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。4、分析題圖：圖示表達(dá)將人的生長激素基因?qū)爰?xì)菌B細(xì)胞內(nèi)制造“工程菌”的過程。質(zhì)粒A上含有四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因，構(gòu)建基因體現(xiàn)載體后，破環(huán)了質(zhì)粒A的四環(huán)素抗性基因，但氨芐青霉素抗性基因正常，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒或普通質(zhì)粒的大腸桿菌都能抗氨芐青霉素，但導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能抗四環(huán)素。【詳解】（1）由于細(xì)胞分化，胰島素基因只在胰島B細(xì)胞中體現(xiàn)，因此合成人胰島素的RNA應(yīng)從人類的胰島B細(xì)胞中獲取；這種通過胰島素的RNA獲取目的基因的辦法為逆轉(zhuǎn)錄法，得到的目的基因中不含非編碼區(qū)和內(nèi)含子，因此該辦法獲取的目的基因與從基因組文庫中獲取的目的基因相比，所含的堿基數(shù)量更少。（2）將質(zhì)粒A和目的基因結(jié)合為重組質(zhì)粒的過程中，即構(gòu)建基因體現(xiàn)載體的過程中需要使用限制酶和DNA連接酶；這兩個(gè)不同的DNA分子含有相似的化學(xué)構(gòu)成和空間構(gòu)造，因此能進(jìn)行重組。（3）將目的基因?qū)胛⑸飸T用Ca2+轉(zhuǎn)化法，用一定濃度的Ca2+溶液解決細(xì)菌B，使之處在感受態(tài)，方便于基因體現(xiàn)載體的導(dǎo)入。（4）根據(jù)分析可知，由于基因體現(xiàn)載體中抗四環(huán)素基因被破壞，因此能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長的是導(dǎo)入普通質(zhì)粒A的細(xì)菌，而抗氨芐青霉素基因未被破壞，因此在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生長的是導(dǎo)入普通質(zhì)粒A的細(xì)菌和重組質(zhì)粒。總而言之，B對(duì)的，A、C、D錯(cuò)誤。（5）由于細(xì)菌細(xì)胞代謝和繁殖速度快，能快速獲得大量產(chǎn)物；且本身基因組較小，較易獲得成功，因此常選擇細(xì)菌作為基因工程的受體細(xì)胞；由于細(xì)菌屬于原核生物，細(xì)胞內(nèi)沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等，因此細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)合成的胰島素幾乎沒有活性，因此在細(xì)菌培養(yǎng)液中分離得到的胰島素不能直接使用?！军c(diǎn)睛】本題考察基因工程的知識(shí)點(diǎn)，規(guī)定學(xué)生掌握基因工程的操作環(huán)節(jié)是解決該題的重點(diǎn)。理解基因組文庫和cDNA文庫的構(gòu)建過程和區(qū)別，識(shí)記目的基因的獲取辦法和基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建是解決本題的核心。理解原核生物的特點(diǎn)，識(shí)記細(xì)菌作為基因工程的受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)和將目的導(dǎo)入微生物的辦法，運(yùn)用基因工程的綜合知識(shí)分析解決問題是突破該題的核心。5．逆轉(zhuǎn)錄cDNA限制性核酸內(nèi)切酶堿基互補(bǔ)配對(duì)引物與模板GC含量高②③變性【分析】PCR技術(shù)：

1、概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒从?，是一?xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。2、原理：DNA復(fù)制。3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序方便合成一對(duì)引物。4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。5、過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈，PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開。【詳解】（1）PCR擴(kuò)增目的基因，首先要有目的基因作為模板，因此從高體現(xiàn)MT蛋白的生物組織中提取mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，從而用于PCR擴(kuò)增。（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒，首先要用限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，因此位于目的基因兩端的引物中需要增加適宜的限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)．設(shè)計(jì)的引物之間不能有堿基互補(bǔ)配對(duì)，否則引物自連，而不能與模板相連。（3）退火表達(dá)引物與模板相連，若退火溫度過高會(huì)破壞引物與模板的堿基配對(duì)．由于G-C之間有三個(gè)氫鍵，A-T之間有兩個(gè)氫鍵，因此G-C含量越高的引物，退火溫度越高。（4）PCR反映得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，可能是退火溫度過高，造成引物與模板不能相連；或引物間互相配對(duì)，引物自連，不能與模板相連，因此，可通過減少退火溫度或重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行改善，故選②③。（5）圖中環(huán)節(jié)1、2、3分別代表變性、退火、延伸，這三個(gè)環(huán)節(jié)構(gòu)成一輪循環(huán)?！军c(diǎn)睛】本題重要考察基因工程的有關(guān)知識(shí)，規(guī)定學(xué)生理解PCR的具體過程，以及引物的作用，學(xué)會(huì)分析引物或溫度變化對(duì)PCR成果的影響。6．否，由于沒有發(fā)育成完整個(gè)體HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠB和C30綠抗原—抗體雜交蛋白質(zhì)分子的構(gòu)造規(guī)律及其與生物功效的關(guān)系【分析】分析圖1：①表達(dá)核移植過程；②表達(dá)早期胚胎培養(yǎng)過程；③表達(dá)將目的基因?qū)隕S細(xì)胞。

分析圖2：該DNA片段含有四種限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中SamⅠ酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上。

分析圖3：圖3為質(zhì)粒構(gòu)造示意圖，該質(zhì)粒含有2個(gè)標(biāo)記基因（紅色熒光標(biāo)記基因和綠色熒光標(biāo)記基因）?！驹斀狻浚?）在題圖1治療過程中并未體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，由于整個(gè)過程中沒有發(fā)育成完整個(gè)體。（2）據(jù)題圖2、圖3中的酶切位點(diǎn)分析可知，不能選用SmaI，由于該酶的酶切位點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部，會(huì)破壞目的基因的構(gòu)造，選擇限制酶時(shí)要滿足目的基因兩端的酶切位點(diǎn)在質(zhì)粒當(dāng)中都包含，并且使用限制酶切割后仍然能保存一種標(biāo)記基因，因此構(gòu)建基因體現(xiàn)載體能夠選擇目的基因兩端的酶切位點(diǎn)進(jìn)行組合，據(jù)此可知，可選用的限制酶組合為HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ。（3）用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，由于DNA復(fù)制過程中子鏈只能由方向延伸，又因DNA分子中的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械模虼四軌蜃鳛橐锏膯捂淒NA片段為B和C。由于每條新合成的DNA單鏈都需要有引物才干合成，因此，若要將1個(gè)干擾素基因復(fù)制4次，則需要加入的引物數(shù)量為（個(gè)）。（4）在構(gòu)建基因體現(xiàn)載體時(shí)，綠色熒光蛋白基因沒有被破壞，因此在進(jìn)行篩選時(shí)，可用該基因作為標(biāo)記基因進(jìn)行檢測，即選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)。基因體現(xiàn)是指基因指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的過程，因此檢測基因與否體現(xiàn)就是檢測與否合成了有關(guān)的蛋白質(zhì)，可采用抗原—抗體雜交辦法進(jìn)行檢測。（5）蛋白質(zhì)工程是以蛋白質(zhì)分子的構(gòu)造規(guī)律及其與生物功效的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求?！军c(diǎn)睛】本題以基因治療的流程圖為載體，考察了基因工程、細(xì)胞工程以及胚胎工程等方面的知識(shí)，難度適中?？忌軌蜃R(shí)記細(xì)胞核移植的過程；明確基因工程中質(zhì)粒和目的基因需要運(yùn)用同種限制酶進(jìn)行切割；掌握目的基因檢測和鑒定的普通辦法等。7．限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶轉(zhuǎn)化RNA聚合酶與啟動(dòng)子的識(shí)別和結(jié)合不發(fā)生編碼直鏈淀粉合成酶的堿基序列中不含啟動(dòng)子逆轉(zhuǎn)錄（或：反轉(zhuǎn)錄）引物是根據(jù)Wx基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的（或：引物能與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合）品系3品系3的WxmRNA最少，控制合成的直鏈淀粉合成酶最少，直鏈淀粉合成量最少，糯性最強(qiáng)【分析】基因工程的操作環(huán)節(jié)：1、獲取目的基因（從基因組文庫中獲取、運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因、化學(xué)合成法）；2、基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建（這也是基因工程的核心）；一種完整的基因體現(xiàn)載體涉及：（1）啟動(dòng)子：位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄；（2）目的基因：編碼蛋白質(zhì)的基因；（3）終止子：位于基因的尾端，其作用使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止；（4）標(biāo)記基因：作用是為了鑒別受體細(xì)胞中與否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來。3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（植物、動(dòng)物、微生物）：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和體現(xiàn)的過程，稱為轉(zhuǎn)化。4、目的基因的檢測與鑒定（DNA分子雜交技術(shù),分子雜交技術(shù)、抗原抗體雜交）。【詳解】（1）將目的基因與Ti質(zhì)粒構(gòu)建基因體現(xiàn)載體時(shí)，需要限制酶的切割，將目的基因插入載體時(shí)需要DNA連接酶的連接，重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和體現(xiàn)的過程叫做轉(zhuǎn)化。（2）根據(jù)以上分析可知，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)，如果啟動(dòng)子序列變化將會(huì)影響RNA聚合酶與之結(jié)合和識(shí)別，進(jìn)而影響基因的轉(zhuǎn)錄水平。在真核生物中，編碼蛋白質(zhì)的序列是基因中編碼區(qū)，編碼區(qū)中不涉及啟動(dòng)子序列，因此直鏈淀粉合成酶的基因堿基序列中不含有啟動(dòng)子，因此3個(gè)突變品系中Wx基因中控制合成直鏈淀粉酶的氨基酸序列不發(fā)生變化。（3）以mRNA為模板合成cDNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄，運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增Wx基因的cDNA，需要以Wx基因合成的引物，這樣引物能夠在總cDNA中與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合，從而運(yùn)用PCR擴(kuò)增技術(shù)專一性擴(kuò)增出Wx基因的cDNA。（4）識(shí)圖分析可知，圖中品系3的Wx基因的mRNA的含量最少，那么合成的直鏈淀粉酶最少，直鏈淀粉合成量最少，因此該水稻胚乳中含的直鏈淀粉比例最小，糯性最強(qiáng)?！军c(diǎn)睛】本題考察基因工程的知識(shí)點(diǎn)，規(guī)定學(xué)生掌握基因工程的操作工具和操作環(huán)節(jié)是解決問題的核心。識(shí)記并理解基因工程中工具酶的種類和作用，把握基因體現(xiàn)載體構(gòu)建的過程，理解啟動(dòng)子的功效和編碼蛋白質(zhì)的基因的構(gòu)造，這是該題考察的難點(diǎn)；把握PCR擴(kuò)增技術(shù)的操作過程和引物的作用，這是突破第（3）問的核心。8．基因組文庫cDNA文庫解旋酶加熱至90-95℃氫鍵Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活【分析】基因工程的操作環(huán)節(jié)：目的基因的獲取（基因文庫獲取、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因體現(xiàn)載體（含目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)）；把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、鈣離子解決法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平—DNA分子雜交法、分子雜交法、抗原抗體雜交法和個(gè)體水平—抗蟲、抗病接種實(shí)驗(yàn)等）?！驹斀狻浚?）基因文庫涉及基因組文庫和部分基因文庫(CDNA文庫)，前者涉及一種生物的全部基因，后者只涉及一種生物的部分基因。（2）體內(nèi)進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)，需要解旋酶和DNA聚合酶，解旋酶能夠打開雙鏈之間的氫鍵，DNA聚合酶能夠催化磷酸二酯鍵的形成。在體外進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，運(yùn)用高溫變性即加熱至90-95℃，破壞雙鏈之間的氫鍵，使DNA成為單鏈。解旋酶和高溫解決都破壞了DNA雙鏈中堿基對(duì)之間的氫鍵。（3）由于在PCR過程中，需要不停的變化溫度，該過程中涉及較高溫度解決變性，大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶在高溫解決下會(huì)變性失活，因此PCR過程中需要用耐高溫的TaqDNA聚合酶催化。【點(diǎn)睛】PCR的原理是DNA雙鏈的復(fù)制，故類似于細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制過程，需要模板、原料等條件。由于該過程中特殊的高溫條件，需要用耐高溫的DNA聚合酶。9．平胸腺嘧啶（T）DNA連接BA類菌落含有P0C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒乙丙目的基因反向連接【分析】基因體現(xiàn)載體的基本構(gòu)造涉及復(fù)制原點(diǎn)、目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子等。根據(jù)題干信息和圖形分析，P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標(biāo)記基因，可用于檢測目的基因與否導(dǎo)入受體細(xì)胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因（tetr）?！驹斀狻浚?）根據(jù)題意分析，EcoRV酶識(shí)別的序列是-GATATC-，并且兩條鏈都在中間的T與A之間進(jìn)行切割，因此其切出來的線性載體P1為平末端。（2）依題意并據(jù)圖分析，目的基因兩側(cè)為黏性末端，且露出的堿基為A，則在載體P1的兩端需要各加一種含有堿基T的脫氧核苷酸，方便形成含有黏性末端的載體P2，再用DNA連接酶將P2與目的基因連接起來形成重組質(zhì)粒P3。（3）根據(jù)以上分析已知，限制酶（EcoRV酶）切割后破壞了四環(huán)素抗性基因，但是沒有破壞氨芐青霉素抗性基因，因此含有重組質(zhì)粒P3的菌落在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中應(yīng)當(dāng)不能生長，而在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能生長，結(jié)合表格分析可知，應(yīng)當(dāng)選擇B類菌落。根據(jù)表格分析，A類菌落在氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都能夠生長，闡明其導(dǎo)入的是P0；C類菌落在任何抗生素的培養(yǎng)基中都不能生長，闡明其沒有導(dǎo)入任何質(zhì)粒。（4）據(jù)圖分析，根據(jù)目的基因插入的位置和PCR技術(shù)的原理分析，PCR鑒定時(shí)應(yīng)當(dāng)選擇的一對(duì)引物是乙和丙；根據(jù)題意和圖形分析，某同窗用圖中的另外一對(duì)引物（甲、乙）從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增出了400bp的片段，闡明其目的基因發(fā)生了反向連接。【點(diǎn)睛】解答本題的核心是識(shí)記并理解基因工程的四個(gè)基本環(huán)節(jié)，特別是對(duì)核心環(huán)節(jié)——構(gòu)建基因體現(xiàn)載體環(huán)節(jié)的理解，明確基因體現(xiàn)載體的幾個(gè)必須的成分及其作用，進(jìn)而結(jié)合題干規(guī)定分析答題。10．mRNA逆轉(zhuǎn)錄酶PCRT-DNA整合到葉肉細(xì)胞染色體DNA上找到第6位氨基酸中的堿基所在的基因位置，參考密碼子表，將第6位氨基酸甲的堿基替代為氨基酸乙的堿基【分析】基因工程的操作環(huán)節(jié)：獲取目的基因（基因文庫獲取、PCR、人工合成等）；構(gòu)建基因體現(xiàn)載體（含目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)）；把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（動(dòng)物—顯微注射法；植物—農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法；微生物—鈣離子解決法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平和個(gè)體水平）?！驹斀狻浚?）由于人的T細(xì)胞能夠產(chǎn)生蛋白質(zhì)Y，要獲得Y的基因，可從人的T細(xì)胞中提取mRNA作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶催化下，運(yùn)用四種游離的脫氧核苷酸合成cDNA，再運(yùn)用PCR技術(shù)（體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)）在體外擴(kuò)增獲得大量Y的基因。（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中，T-DNA能夠攜帶目的基因轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的的染色體DNA上，故需要Y的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA中得到含目的基因的重組Ti質(zhì)粒，把含目的基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入到農(nóng)桿菌中，再讓含目的基因的農(nóng)桿菌侵染植物的葉肉細(xì)胞。若該葉肉細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、篩選等得到了能穩(wěn)定體現(xiàn)Y的愈傷組織，則闡明Y的基因已經(jīng)整合到葉肉細(xì)胞染色體DNA上。（3）蛋白質(zhì)工程需要從預(yù)期的蛋白質(zhì)的功效出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)構(gòu)造，推出對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列，故對(duì)Y進(jìn)行改造以提高其熱穩(wěn)定性，需要找到第6位氨基酸中的堿基所在的基因位置，參考密碼子表，將第6位氨基酸甲的堿基替代為氨基酸乙的堿基?！军c(diǎn)睛】天然蛋白質(zhì)合成的過程是按照中心法則進(jìn)行的，即基因通過體現(xiàn)產(chǎn)生含有氨基酸序列的多肽鏈，加工后形成含有高級(jí)構(gòu)造的蛋白質(zhì)，進(jìn)而行使生物功效。蛋白質(zhì)工程與之相反，它是從預(yù)期的蛋白質(zhì)功效出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)構(gòu)造，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列來進(jìn)行改造。11．E1和E4甲的完整甲與載體對(duì)的連接轉(zhuǎn)錄翻譯核DNA【分析】1、基因工程的工具：（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）運(yùn)載體：慣用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

2、動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一種細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一種已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一種新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最后發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。核移植得到的動(dòng)物稱克隆動(dòng)物。【詳解】（1）構(gòu)建基因體現(xiàn)載體時(shí)，使用的限制酶不能破壞融合基因。選用產(chǎn)生不同黏性末端的兩種限制酶E1和E4進(jìn)行切割，確保了甲的完整，并且確保融合基因和質(zhì)粒對(duì)的連接。（2）在牛的皮膚細(xì)胞中觀察到綠色熒光，闡明L1基因已經(jīng)體現(xiàn)，即在該皮膚細(xì)胞中完畢了轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。（3）為檢測克隆牛的不同組織細(xì)胞中與否含有融合基因，需提取不同組織細(xì)胞的核DNA作為PCR模板，用PCR辦法進(jìn)行鑒定【點(diǎn)睛】本題結(jié)合圖解，考察基因工程、細(xì)胞工程的有關(guān)知識(shí)，規(guī)定考生識(shí)記基因工程的操作工具，掌握各操作工具的作用；識(shí)記細(xì)胞核移植技術(shù)的過程及其應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息精確答題。12．D精子cDNA②①BCDB基因體現(xiàn)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚【分析】基因工程的基本操作程序：1、目的基因的獲?。海?）目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的構(gòu)造基因。（2）獲取辦法：①從基因文庫中獲??；②人工合成（反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法）；③PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。2、基因體現(xiàn)載體的構(gòu)建:（1）目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且能夠遺傳至下一代，使目的基因能夠體現(xiàn)和發(fā)揮作用。（2）構(gòu)成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。①啟動(dòng)子：是一段有特殊構(gòu)造的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最后獲得所需的蛋白質(zhì)。②終止子：也是一段有特殊構(gòu)造的DNA片段，位于基因的尾端。③標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中與否含有目的基因，從而將