血栓閉塞性脈管炎患者肢體壞死行截血管的免疫病理學(xué)研究

血栓閉塞性脈管炎患者肢體壞死行截血管的免疫病理學(xué)研究

動脈關(guān)節(jié)炎（thor-key）是一種影響血管的慢性疾病。它主要影響著四肢遠端的中小型動脈小動脈，尤其是下肢血管。病因雖不十分清楚,吸煙可能是其誘因,近年的研究證明了血管壁免疫損傷及免疫炎癥在該病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。本研究對TAO患者血管壁進行HE染色及CD3和CD20免疫病理學(xué)染色,用光學(xué)顯微鏡觀察,并與對照組的觀察結(jié)果作比較研究,現(xiàn)報告如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1骨肉瘤是術(shù)后病例之一,應(yīng)該選擇手術(shù)標(biāo)本,術(shù)前動脈;(1)TAO組:29例,為我院2005~2007年因TAO導(dǎo)致肢體缺血壞死行截肢術(shù)的手術(shù)標(biāo)本(均為下肢),術(shù)前均行CTA或DSA檢查明確診斷,術(shù)后病理學(xué)檢查證實。29例均為男性,年齡19~41(平均28.9±4.8)歲,吸煙史5~20(平均11.9±3.5)年。其中足背動脈16例,脛前動脈8例,脛后動脈5例。(2)對照組:32例,為我院同期32例因其他病因行截肢術(shù)的手術(shù)標(biāo)本,其中骨肉瘤16例,動脈硬化性閉塞12例,外傷4例。男21例,女11例,年齡18~76(平均40.4±19.2)歲。其中足背動脈11例,脛前動脈10例,脛后動脈8例,股動脈3例。1.1.2試劑1.2免疫組化染色每例標(biāo)本分別進行兩種處理:(1)常規(guī)切片HE染色復(fù)查診斷;(2)用于免疫組化染色的標(biāo)本切片按免疫組織化學(xué)SP法處理。并設(shè)立對照:以已知淋巴結(jié)陽性切片為CD3、CD20陽性對照;以PBS液代替第一抗體為陰性對照。1.3陽性細胞體CD3、CD20以細胞膜及細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色信號為陽性細胞。隨機觀察至少10個高倍鏡(10×40)視野,算出1個高倍鏡視野中細胞平均數(shù)。1.4統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行t檢驗,以P≤0.05判為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1內(nèi)皮細胞及內(nèi)含纖維層增殖TAO組患者血管壁明顯增厚,以內(nèi)膜增生為主。內(nèi)皮細胞及內(nèi)皮下纖維層有部分增生。膠原纖維排列紊亂,稀疏與TAO組比較*P<0.01,**P<0.01TAO組間比較P<0.053不同類型細胞的免疫作用T淋巴細胞、B淋巴細胞及其亞群是機體免疫系統(tǒng)的主要組成部分,其中T淋巴細胞除直接介導(dǎo)細胞免疫功能外,對機體免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)也起關(guān)鍵作用;B淋巴細胞主要介導(dǎo)體液免疫。近年來研究認(rèn)為TAO是一種自身免疫性疾病,其活動期病人主要表現(xiàn)為細胞免疫功能低下而體液免疫亢進。其免疫功能混亂由以T淋巴細胞功能混亂為主,特別在血管壁的直接免疫炎癥和免疫損傷中起顯著作用。本實驗先以切片觀察證明免疫損傷為TAO發(fā)病的主要原因,損傷部位以血管內(nèi)膜為主。并CD3(+)標(biāo)記T淋巴細胞,以CD20(+)標(biāo)記B淋巴細胞進一步探討細胞免疫和體液免疫在TAO發(fā)病的作用。我們的實驗表明TAO患者動脈壁的浸潤細胞中CD3(+)的T淋巴細胞數(shù)目明顯多于CD20(+)的B淋巴細胞。兩種細胞的分布主要集中在增生的內(nèi)膜層,中膜及外膜層分布較少。兩種細胞在內(nèi)膜層的分布存在差異,CD3(+)的T淋巴細胞分布更接近內(nèi)皮細胞;CD20(+)B淋巴細胞分布更接近于內(nèi)彈力膜層。該分布差異可能與TAO患者的病理基礎(chǔ)為多種免疫損傷及T淋巴細胞、B淋巴細胞功能不同有關(guān):(1)T淋巴細胞介導(dǎo)的細胞免疫失調(diào),主要表現(xiàn)在T細胞亞群功能失調(diào)為主。抑制性T淋巴細胞(TS)功能降低,使機體免疫系統(tǒng)對自身抗原易于發(fā)生免疫應(yīng)答,引起體液免疫亢進,導(dǎo)致和加重免疫復(fù)合物的損傷;效應(yīng)T淋巴細胞(TE)和細胞毒T淋不勻。內(nèi)彈力膜不規(guī)則,粗細不均,有的斷裂,有的消失。在纖維層可見少量由中膜游走來的平滑肌細胞。中膜廣泛纖維化,平滑肌細胞排列紊亂。外膜也有較明顯的增生。增生的內(nèi)膜中可見明顯的淋巴細胞浸潤,中膜及外膜未見大量炎性細胞浸潤。而對照組血管結(jié)構(gòu)基本正常。2.2cd3+、cd20+細胞分布CD3(+)、CD20(+)細胞呈圓形或者橢圓形。正常血管壁組織中,無或極少有CD3(+)、CD20(+)細胞的分布,TAO患者血管壁可見大量CD3(+)、CD20(+)細胞分布,主要集中在增生的血管內(nèi)膜層,內(nèi)彈力膜以下的血管中膜肌層及外膜層均未見明顯的CD3(+)細胞分布。其中CD3(+)陽性細胞分布更接近內(nèi)皮細胞(如圖1);CD20(+)細胞更接近于內(nèi)彈力膜,中膜可偶見少量CD20(+)細胞分布(如圖2)。2.3cd3+t細胞間的免疫反應(yīng)CD3(+)、CD20(+)細胞平均數(shù)TAO組明顯高于對照組,兩組相比差異有顯著性(P<0.01);TAO組中CD3(+)細胞平均數(shù)高于CD20(+)細胞平均數(shù),兩者間有較顯著差異(P<0.05)(見表1)。巴細胞(TC)細胞功能相對亢進,可能直接參與機體的自身免疫反應(yīng),造成血管壁損傷。臨床表現(xiàn)有淺靜脈炎發(fā)作,及活動期病變處有淋巴細胞浸潤等跡象。這種炎癥主要引起內(nèi)皮細胞病變,可能導(dǎo)致CD3(+)的T淋巴細胞分布更接近內(nèi)皮細胞。(2)B細胞介導(dǎo)的體液免疫功能亢進,體液免疫測定結(jié)果也表明TAO患者血清中的免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和多種免疫復(fù)合物[抗磷脂蛋白抗體、抗內(nèi)皮細胞抗體、抗中性粒細胞抗體等]明顯高于正常值[4~7]。體液免疫亢進及抑制性T淋巴細胞(TS)功能降低雙重作用加重了血管壁的免疫復(fù)合物損傷。研究表明TAO患者血管壁的免疫復(fù)合物主要沉積在內(nèi)彈力膜下及中膜,可能導(dǎo)致CD20(+)的B淋巴細胞分布更接近于內(nèi)彈力膜,中膜也可偶見少量CD20(+)的B淋巴細胞分布。綜上,TAO是一種多免疫因素參與的自身免疫疾病,其特異表現(xiàn)為中小動靜脈的非特異性免疫炎癥及血管腔的血栓性閉塞。非特異性炎癥主要由T淋巴細胞介導(dǎo)的直接免疫損傷及其抗免疫復(fù)合物損傷作用降低導(dǎo)致。血管腔的血栓性閉塞主要由B淋巴細胞介導(dǎo)的體液免疫亢進及紅細胞免疫功能異常導(dǎo)致,但血管損傷也會加速血栓的形成。CD3(+)T淋巴細胞直接引起的免疫損傷在TAO患者血管壁的免疫損傷中起關(guān)鍵的作用,對免疫復(fù)合