臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)五 病原性球菌的檢驗(yàn)二

實(shí)驗(yàn)五病原性球菌的檢驗(yàn)(二）

目的要求：3學(xué)時熟悉病原性球菌的分離鑒定程序及臨床意義；掌握血瓊脂平板的制備方法；掌握常見球菌的形態(tài)特點(diǎn)和鑒定方法；熟悉鑒定細(xì)菌的動物試驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1.細(xì)菌菌落觀察；2.培養(yǎng)物涂片革蘭染色顯微鏡觀察；3.培養(yǎng)物生化試驗(yàn)；（1）肺炎鏈球菌的Optochin敏感試驗(yàn)；（2）膽汁溶菌試驗(yàn)（平板法）；（3）觸媒試驗(yàn)（玻片法）；（4）凝固酶試驗(yàn)（玻片法）；4.肺炎球菌、淋球菌的形態(tài)特點(diǎn)觀察1.肺炎鏈球菌的Optochin敏感試驗(yàn)結(jié)果觀察測量抑菌圈直徑（mm），判斷對Optochin的敏感性（>14mm為敏感（+），≦14mm不敏感（-）甲型溶血性鏈球菌抑菌圈直徑？敏感否？肺炎鏈球菌抑菌圈直徑？敏感否？

2.細(xì)菌的菌落、形態(tài)染色性觀察（1）描述菌落特征：

A溶血環(huán)；

B色素；

C菌落大小、形態(tài)、干濕、表面光滑、突出或凹陷等（2）革蘭染色觀察每種菌形態(tài)、染色性和排列3.細(xì)菌培養(yǎng)物生化試驗(yàn)3.1膽汁溶菌試驗(yàn)（平板法）：先做

原理：膽汁或膽鹽加速了肺炎鏈球菌本身自溶過程，促使細(xì)菌發(fā)生自溶。

方法與步驟：取10％去氧膽酸鈉溶液2-3接種環(huán)，滴加于被測菌的菌落上，置35℃30min后觀察結(jié)果。菌落被溶解為陽性。肺炎鏈球菌多為陽性

結(jié)果？

3.2觸媒試驗(yàn)（玻片法）：

原理：又稱過氧化氫酶試驗(yàn)。具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和新生氧而出現(xiàn)氣泡。

方法與步驟：取1-2接種環(huán)細(xì)菌與玻片上，然后滴加新鮮配置的3%的H2O2，在半分鐘內(nèi)出現(xiàn)氣泡者為陽性。多見于葡萄球菌、微球菌等

結(jié)果？

3.3血漿凝固酶試驗(yàn)（玻片法）：

原理：血漿凝固酶主要由致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的，能使含有肝素或枸櫞酸鈉等抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的物質(zhì)。它是鑒定葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)。

游離凝固酶結(jié)合凝固酶

方法與步驟：（1）講臺取一張玻片.（2）劃分3個位置.（3）挑取3-5環(huán)兔血漿到1、2位置，3-5環(huán)生理鹽水到3位置.（4）無菌操作，挑取1環(huán)細(xì)菌(金葡、表葡）在相應(yīng)位置，均勻涂開，觀察細(xì)菌團(tuán)塊物出現(xiàn)否。結(jié)果？凝固酶試驗(yàn)陽性陰性陰性4.肺炎鏈球菌與淋球菌觀察G+C，成雙排列，G-C，成雙排列，腎型矛尖狀，莢膜莢膜金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌草綠色鏈球菌化膿性鏈球菌肺炎鏈球菌淋球菌菌落金/中/光溶血環(huán)白/中/光檸/白無/灰/小a溶血無/灰/小B溶血無/灰/小a溶血無/灰/小革蘭染色++++++_膽汁溶菌+觸酶試驗(yàn)+++___+凝固酶試驗(yàn)+------肺炎鏈球菌觀察+