藥物分析第3章講述

第三章

藥物的雜質(zhì)檢查如何理解“藥物的純度是判定藥品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)”這句話？仿制藥與被仿制藥一致性要求↓藥學(xué)方面一致（含量、結(jié)構(gòu)、雜質(zhì)、其它檢查項(xiàng)等）↓雜質(zhì)的數(shù)量和種類低于被仿制藥，否則需要分析雜質(zhì)的安全性并提供有關(guān)數(shù)據(jù)，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行相關(guān)的安全性試驗(yàn)↓建立雜質(zhì)適宜的雜質(zhì)檢查方法用于判斷一致性↓用于工藝優(yōu)化、去除雜質(zhì)、考察穩(wěn)定性、控制藥物質(zhì)量舉例：仿制藥的雜質(zhì)檢查國(guó)內(nèi)仿制藥研究中雜質(zhì)檢查面臨的困難

-雜質(zhì)來(lái)源不清

-雜質(zhì)檢查方法缺乏針對(duì)性

-雜質(zhì)對(duì)照品制備困難（受限于工藝?yán)щy），方法驗(yàn)證不充分

-雜質(zhì)檢查結(jié)果難于評(píng)價(jià)

例鹽酸曲美他嗪片進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)釆用梯度洗脫，對(duì)3種已知雜質(zhì)、單個(gè)未知雜質(zhì)及總雜質(zhì)分別進(jìn)行控制國(guó)內(nèi)仿制釆用等度洗脫，僅對(duì)未知雜質(zhì)（單個(gè)雜質(zhì)和/或總雜質(zhì)）進(jìn)行控制國(guó)內(nèi)同品種標(biāo)準(zhǔn)對(duì)有關(guān)物質(zhì)的規(guī)定：總雜質(zhì)不得過(guò)1.0%。Contents概述一般雜質(zhì)的檢查方法特殊雜質(zhì)的檢查方法藥物純度的概念與要求雜質(zhì)的來(lái)源與種類雜質(zhì)的限量檢查與計(jì)算一、概述藥物純度的概念與要求藥物的純度——藥物的純凈程度雜質(zhì)——無(wú)治療作用，影響藥物穩(wěn)定性和療效，對(duì)人體健康有害的物質(zhì)雜質(zhì)檢查——也稱純度檢查藥用純度與化學(xué)純度的區(qū)別？雜質(zhì)的來(lái)源與種類來(lái)源：生產(chǎn)過(guò)程中引入貯藏過(guò)程中引入原料，中間體，副產(chǎn)物；試劑，溶劑，催化劑；器皿、裝置、管道等影響；制劑過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)；同分異構(gòu)及同質(zhì)異晶現(xiàn)象保管不當(dāng)、貯藏時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；溫度、濕度、光、空氣影響；微生物作用，產(chǎn)生：降解物、水解物、聚合物、氧化物、異構(gòu)化、霉變等種類：按來(lái)源分：一般雜質(zhì)、特殊雜質(zhì)按結(jié)構(gòu)分：無(wú)機(jī)、有機(jī)雜質(zhì)；殘留溶劑按性質(zhì)分：信號(hào)雜質(zhì)、有害（毒）雜質(zhì)無(wú)效、低效的異構(gòu)體或晶型光學(xué)異構(gòu)體（左旋體，右旋體）幾何異構(gòu)體（順式體，反式體）多晶型（晶型不同，理化常數(shù)，溶解度，穩(wěn)定性，體內(nèi)吸收和療效也不同）注意：藥典中規(guī)定的檢查項(xiàng)目，是指正常生產(chǎn)和儲(chǔ)存中可能產(chǎn)生并需控制的雜質(zhì)。藥典中未規(guī)定的雜質(zhì)，一般有以下幾種情況：指正常生產(chǎn)和儲(chǔ)存中不可能引入含量甚微，對(duì)人體和藥物質(zhì)量無(wú)不良反應(yīng)限量要求較寬，現(xiàn)有產(chǎn)品均能達(dá)到對(duì)雜質(zhì)認(rèn)識(shí)不足，有待于積累資料雜質(zhì)的限量藥物中的雜質(zhì)在不影響療效和不發(fā)生毒性的原則下允許有一定量的雜質(zhì)存在。雜質(zhì)的限量就是指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用%，百萬(wàn)分之幾（ppm）表示。對(duì)人體有毒的雜質(zhì)控制較嚴(yán)：砷——不得過(guò)百萬(wàn)分之十重金屬——不得過(guò)百萬(wàn)分之五十雜質(zhì)量的控制方法限量檢查（Limittest）通常不測(cè)定其準(zhǔn)確含量，只檢查雜質(zhì)的量是否超過(guò)限量，所以稱為雜質(zhì)的限量檢查（對(duì)照法、靈敏度法、比較法）對(duì)照法：取一定量雜質(zhì)對(duì)照品與一定量供試品在相同條件下處理后，比較結(jié)果，以確定雜質(zhì)含量是否超過(guò)規(guī)定量藥物中雜質(zhì)的限量計(jì)算式中：或：式中標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度是藥典規(guī)定的固定值平行操作原則例1對(duì)乙酰氨基酚中氯化物的檢查取對(duì)乙酰氨基酚2.0g，加水100mL加熱溶解后冷卻，濾過(guò)，取濾液25mL，依法檢查氯化物，發(fā)生的渾濁與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5.0mL（每1mL相當(dāng)于10g的Cl）制成的對(duì)照液比較，不得更濃。求氯化物的限量是多少？例2谷氨酸鈉中重金屬的檢查取本品1.0g，加水23mL溶解后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5)2mL，依法檢查，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10gPb/1mL）所呈顏色比較，不得更深，重金屬限量為百萬(wàn)分之十，求所取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液多少mL？例3卡比馬唑片中甲疏咪唑的檢查供試液——取20片，研細(xì)，加三氯甲烷適量研磨使溶，濾過(guò)，置10mL量瓶中，加三氯甲烷置刻度，搖勻（規(guī)格5mg）對(duì)照液——甲疏咪唑的三氯甲烷溶液（100g/mL）分別取10L點(diǎn)于同一薄層板上，展開，顯色，供試液若顯與對(duì)照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得更深，求雜質(zhì)限量？例4腎上腺素中酮體的檢查取本品0.10g，置50mL量瓶中，加鹽酸溶液溶液并稀釋至刻度，搖勻，在310nm處測(cè)定吸光度，不得超過(guò)0.05，已知酮體的吸收系數(shù)E1%1cm=435，求酮體的限量？比較法二、一般雜質(zhì)的檢查方法在自然界分布廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中易引入的雜質(zhì)如：氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、干燥失重、熾灼殘?jiān)?、有機(jī)溶劑殘留量等1.氯化物檢查法原理：在稀硝酸溶液中與一定量標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液按同法操作結(jié)果比較加硝酸的作用：（1）避免Ag2CO3↓，Ag3PO4↓

，Ag2O↓等的形成，消除這些陰離子的干擾（2）加速AgCl↓生成，產(chǎn)生較好的乳濁注意事項(xiàng)Cl-的濃度：50～80g/50mL為宜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液（10gCl/mL）5.0～8.0mL供試品不澄明——過(guò)濾供試品有色——外消色法或內(nèi)消色法用含硝酸的水洗凈濾紙中Cl-至洗液與AgNO3不產(chǎn)生渾濁，再過(guò)濾供試液例KMnO4中Cl-的檢查，樣品（紫色）+乙醇，顏色消退后再檢查如果供試溶液帶顏色內(nèi)消色法供試液（2倍量），等分成兩等分：

?量+AgNO3→過(guò)濾至澄清+標(biāo)準(zhǔn)Cl-→對(duì)照

?量+AgNO3→→→→→→→→→樣品比較對(duì)照與樣品的渾濁程度2.硫酸鹽的檢查方法原理：在稀鹽酸溶液中SO42-+Ba2+→BaSO4↓（白色渾濁）與一定量標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液按同法所得結(jié)果比較加酸的作用： 加稀HCl使成酸性，可防止BaCO3↓,Ba3(PO4)2↓形成注意事項(xiàng)SO42-的濃度：0.1～0.5mgSO4/50mL為宜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液（0.1mgSO4/mL）1.0～5.0mL；溶液渾濁或有色，處理方法與Cl-檢查法相似3.鐵鹽檢查法原理：在鹽酸酸性溶液中紅色反應(yīng)在HCl酸性中進(jìn)行，可防止Fe3+水解Fe2+無(wú)此反應(yīng)，需加入氧化劑過(guò)硫酸氨氧化，同時(shí)防止硫氰酸鐵分解；或加硝酸處理，但需加熱煮沸除去NOFe3+的濃度：10～50

gFe3+

/50mL為宜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鐵銨[FeNH4(SO4)2﹒12H2O]1.0～5.0mL(10

gFe3+

/mL)；標(biāo)準(zhǔn)液配置時(shí)為防止水解，需加適量硫酸注意事項(xiàng)

反應(yīng)可逆，加過(guò)量試劑可提高反應(yīng)靈敏度，同時(shí)可消除一些陰離子（Cl-，PO43-，SO42-，枸櫞酸根）與Fe3+形成有色配位物而引起的干擾供試品與對(duì)照品色調(diào)不一致或呈色淺；可加正丁醇或異戊醇提取

環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物；需經(jīng)熾灼破壞后測(cè)定4.重金屬檢查法重金屬原義是指比重大于5的金屬，包括金、銀、銅、鐵、鉛等，重金屬在人體中累積達(dá)到一定程度會(huì)造成慢性中毒。密度在4.5g/cm3以上的金屬，稱作重金屬。最終在工業(yè)上真正劃入重金屬的為10種金屬元素：銅、鉛、鋅、錫、鎳、鈷、銻、汞、鎘和鉍。重金屬系指在一定的條件下，能與硫代乙酰胺（CH3CSNH2）試液或Na2S試液作用而顯色的金屬雜質(zhì)。（一）第一法（硫代乙酰胺法）

本法適用于無(wú)需有機(jī)破壞，在酸性條件下可溶解的、無(wú)色的藥物的重金屬檢查。1．原理

2.操作方法樣品管對(duì)照管結(jié)果觀察

樣品對(duì)照生成有色的硫化物，觀察顏色的變化3．注意①

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度：27ml溶液中Pb2+標(biāo)準(zhǔn)溶液10

g/ml

1~2ml②

溶液的pH：pH在3.0~3.5時(shí),呈色較完全.③

供試品溶液有顏色時(shí)的處理a.外消色法：Ⅰ.稀焦糖溶液調(diào)節(jié)，

Ⅱ.指示劑調(diào)節(jié)b.內(nèi)消色

（二）第二法（熾灼破壞后檢查重金屬）本法適用于含芳香環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸及乙醇的有機(jī)藥物的重金屬檢查。先熾灼破壞有機(jī)結(jié)構(gòu)，得到重金屬鹽或氧化物殘?jiān)缓笸谝环z查。熾灼溫度為500～600℃。（三）第三法（硫化鈉法）本法適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。在氫氧化鈉堿性條件下加硫化鈉試液（顯色劑），比色，檢查重金屬。（四）第四法（微孔濾膜法）本法適用于含2～5

g重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查。因重金屬限量低，用納氏比色管難以觀察比較，改用此法，重金屬硫化物沉淀富集于濾膜上，比較其色斑，以提高檢測(cè)的靈敏度。5.砷鹽檢查法《中國(guó)藥典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法。（一）古蔡法1．原理利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)氫，與供試品中微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與同等條件下一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，判斷供試品中的砷鹽是否超過(guò)限量。砷化氫與溴化汞試紙反應(yīng)，生成砷斑的反應(yīng)如下：閱讀標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備（P61），回答如下問(wèn)題：導(dǎo)氣管中填充醋酸鉛棉花的作用是什么？Zn和HCl的作用是（）？

A.產(chǎn)生AsH3↑B.調(diào)節(jié)酸度C.生成新生態(tài)H2↑D.使As5+→As3+與溴化汞試紙生成砷斑的物質(zhì)是（）？

A.HgBr2B.AsH3C.

H2SD.

SnCl2碘化鉀和氯化亞錫的作用是（）？A.有利于AsH3生成

B.抑制SbH3生成C.除去H2S干擾D.將As5+還原成As3+

E.使氫氣均勻連續(xù)的產(chǎn)生溴化汞試紙的作用是（）？A.消除H2S干擾B.與SbH3形成色斑

C.與AsH3形成色斑D.消除砷化氫的干擾（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法【Ag（DDC）法】

1．原理第一步：同古蔡氏法生成砷化氫第二步：砷化氫還原Ag-DDC溶液,產(chǎn)生紅色的膠態(tài)銀.目視比色法儀器分析510nm，可定量6.干燥失重藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的重量，包括水分及其他揮發(fā)性成分。檢查方法常壓恒溫干燥（烘干法）——受熱較穩(wěn)定的中藥制劑

恒重：連續(xù)2次干燥后的重量差異不超過(guò)0.3mg，間隔1h1g；105℃，3h--1h……注意：溫度降至70~80℃時(shí)取出檢查方法干燥劑干燥

——受熱易分解或揮發(fā)的供試品變色硅膠，五氧化二磷，無(wú)水氯化鈣等干燥劑減壓干燥——熔點(diǎn)低、受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品干燥器的使用7.水分測(cè)定法檢查方法費(fèi)休氏法甲苯法----含揮發(fā)性成分的供試品烘干法----不含或含少量揮發(fā)性成分的供試減壓干燥----含揮發(fā)性成分的貴重藥品氣相色譜法----散劑、顆粒劑、丸劑、片劑等各類型制劑中微量水分的測(cè)定二部一部KarlFischer滴定基本理論

卡爾·費(fèi)休法簡(jiǎn)稱費(fèi)休氏法，是1935年卡爾·費(fèi)休(KarlFjscher)提出的測(cè)定水分的容量分析方法。費(fèi)休法是測(cè)定物質(zhì)水分的各類化學(xué)方法中，對(duì)水最為專一、最為準(zhǔn)確的方法。

KarlFischer

1901-19581.費(fèi)休氏法化學(xué)反應(yīng)原理化學(xué)反應(yīng)I2

+SO2+H2O

2HI+SO3ˉ吡啶存在時(shí)無(wú)水吡啶能定量地吸收HI和SO3ˉ，生成氫碘酸吡啶和亞硫酸吡啶。C5H5N·I2+C5H5N·SO2+C5H5N+H2O2C5H5N·HI+C5H5N·SO3

亞硫酸吡啶不穩(wěn)定，能與水發(fā)生副反應(yīng)，消耗一部分水，因而干擾測(cè)定。如下反應(yīng)：C5H5N·SO3+H2OC5H5NHSO4H加入無(wú)水甲醇避免了上述副反應(yīng)的發(fā)生。C5H5N·SO3+CH3OHC5H5NHSO4CH3綜上總的反應(yīng)式:C5H5N?I2+C5H5N?SO2+C5H5N+CH3OH+H2O2C5H5N?HI+C5H5N?HSO4CH3終點(diǎn)指示法有兩種：碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中能與水起定量反應(yīng)，當(dāng)水完全消耗掉，稍有過(guò)量的費(fèi)休氏試劑使溶液由淡黃色變成淺紅棕色。永停滴定法。另作空白試驗(yàn)2.費(fèi)休氏水分測(cè)定電化學(xué)反應(yīng)原理一旦所有的水都與碘進(jìn)行了反應(yīng)，滴定杯中的混和液里就會(huì)有游離態(tài)的碘，此游離碘將促使離子導(dǎo)電并且降低電壓，以使極化電流穩(wěn)定，當(dāng)電壓降至某一設(shè)定值時(shí)，滴定終止。

水分測(cè)定儀的基本操作步驟1.準(zhǔn)備工作

2.加入試劑

3.預(yù)滴定、標(biāo)定和漂移值測(cè)定

4.

供試品水分測(cè)定

5.關(guān)機(jī)

1.KF滴定的優(yōu)越性(與其它幾種水分測(cè)定比較)卡氏水分測(cè)定法干燥失重（常壓、減壓）甲苯法（中藥）應(yīng)用廣泛（適用于多種有機(jī)物和無(wú)機(jī)物，還包括遇熱易破壞的藥品）烘箱干燥（對(duì)熱較穩(wěn)定藥品）減壓干燥（使用對(duì)熱較不穩(wěn)定或水分較難除盡的）含揮發(fā)性成分藥品適合于ppm級(jí)至100％水含量100％水含量100％水含量檢測(cè)快速檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)操作簡(jiǎn)易結(jié)果準(zhǔn)確操作簡(jiǎn)單，但精密度準(zhǔn)確度不夠高操作存在甲苯用量大，毒性大不受地方限制受地方限制受地方限制(1)試劑對(duì)水的作用靈敏性和專一性高，是較理想的水分測(cè)定方法。(2)適用于遇熱易分解的物質(zhì)或含有揮發(fā)性成分的供試品的水分測(cè)定。(3)費(fèi)休氏試劑本身可以作為指示劑，也可用永停滴定法指示終點(diǎn)。2.KF滴定的特點(diǎn)8.熾灼殘?jiān)?、定義：有機(jī)物經(jīng)高溫?zé)胱坪髿埩舻姆菗]發(fā)性物及雜質(zhì)，多為金屬的氧化物或無(wú)機(jī)鹽類。2、操作：供試品1.0～2.0g→置已恒重的坩堝中→精密稱定→熾灼至炭化→放冷→硫酸0.5～1ml使?jié)駶?rùn)→低溫除盡硫酸蒸氣→700～800℃至灰化→精密稱定→恒重3、注意：如需將殘?jiān)糇髦亟饘贆z查，則熾灼溫度必須控制在500～600℃。間隔30min。例：鉛測(cè)定時(shí)，若加熱溫度過(guò)高，會(huì)有什么影響？9.灰分測(cè)定1、總灰分：藥品經(jīng)粉碎后加熱，高溫?zé)胱浦粱一?，則其細(xì)胞組織及其內(nèi)含物成為灰燼而殘留，由此所得灰分為“生理灰分”，即總灰分

2．酸不溶性灰分：藥品經(jīng)高溫?zé)胱频玫降目偦曳旨欲}酸處理，得到不溶于鹽酸的灰分，成為酸不溶性灰分。注意：當(dāng)灰分本身差異較大時(shí)，增加酸不溶性灰分的測(cè)定10.有害元素檢查法有害元素系指——鉛、鎘、砷、汞、銅藥典一部增加該法，并規(guī)定了有害元素的限度（1）原子吸收分光光度法鉛、鎘的測(cè)定(石墨爐法)砷的測(cè)定(氧化物法)采用適宜的氫化物發(fā)生裝置汞的測(cè)定(冷吸收法)采用適宜的氫化物發(fā)生裝置銅的測(cè)定(火焰法)空氣-乙炔火焰（2）電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》國(guó)家對(duì)外貿(mào)易經(jīng)濟(jì)合作部發(fā)部頒布重金屬總量≤20．0mg／kg

鉛（Pb）≤5．0mg／kg

鎘（Cd）≤0．3mg／kg

汞（Hg）≤0．2mg／kg

銅（Cu）≤20．0mg／kg

砷（As）≤2．0mg／kg重金屬元素檢驗(yàn)不合格案例分析

（鉛、鎘、砷、汞）1、鉛、鎘不合格已很少見，但仍然有。原料檢驗(yàn)是否做到位，特別是本底值含量比較高的原料更要小心！見于以茶葉、海藻為原料的保健產(chǎn)品例子1：某產(chǎn)品，中藥材磨粉，鉛含量很高，浸泡提取則基本檢測(cè)不到鉛。例子2：本身檢驗(yàn)功夫不到家。2、砷、汞不合格對(duì)比前兩者，多見。海洋，水產(chǎn)為原料產(chǎn)品

海洋及水產(chǎn)品中含量很高動(dòng)物性產(chǎn)品的含量難做

三、特殊雜質(zhì)的檢查方法

藥物中的特殊雜質(zhì)一般是該藥物在生