重醫(yī)臨床免疫學檢驗重點

填空1.免疫防御功效異常可造成(感染、免疫缺點)疾病。2.抗原抗體反映的特點有（特異性、比例性、可逆性、階段性）3.抗原抗體反映的溫度普通以（15～40℃）為宜，最適溫度為（37℃）4.影響抗原抗體反映的環(huán)境因素重要有（電解質(zhì)、pH、溫度）5.某些特殊的抗原抗體反映對溫度有某些特殊的規(guī)定，如冷凝集素在（4℃）左右與紅細胞結(jié)合最佳，（20℃）以上反而解離。6.抗原抗體的結(jié)合分子間的引力涉及（靜電引力、范德華引力、氫鍵引力和疏水作用力），其中作用最強的是（疏水作用力）1.間接凝集反映的類型涉及（正向間接凝集、反向間接凝集反映、間接凝集克制反映和協(xié)同凝集反映）四種類型。2.參加凝集反映中的抗原稱為（凝集原），抗體稱為(凝集素)，慣用的直接凝集實驗有(玻片法、試管法、玻片法)3.在間接凝集反映中正向凝集反映是用(抗原)致敏載體以檢測標本中對應的(抗體)，而反向間接凝集反映是用(抗體)致敏載體以檢測標本中對應(抗原)4.間接抗球蛋白實驗可用已知抗原型紅細胞檢測血清中的(不完全抗體)，可用于輸血前的(交叉配血)實驗。1．免疫沉淀反映是（可溶性抗原）與（對應抗體）的特異性結(jié)合2．棋盤格法（抗原）和（抗體）同時稀釋，可一次完畢（抗原）和（抗體）的滴定3．單向瓊脂擴散是待測抗原從含有定量（抗體）的（凝膠）內(nèi)自由向周邊擴散，抗原抗體特異性結(jié)合，在兩者比例適宜的部位，形成（沉淀環(huán)）。4．Maneini曲線合用于（大分子抗原）的測定，在一定范疇內(nèi)，沉淀環(huán)隨時間延長而擴大，抗原濃度與（擴散環(huán)直徑的平方）呈線性關(guān)系，慣用（普通）坐標紙作圖。5．Fahey曲線合用于（小分子抗原）的測定，在一定范疇內(nèi)，沉淀環(huán)隨時間延長而擴大，沉淀環(huán)直徑與（抗原濃度的對數(shù)）呈線性關(guān)系，慣用（半對數(shù)）坐標紙作圖。6．雙向瓊脂擴散實驗可對抗原或抗體的存在、含量和相對分子量進行分析，沉淀線靠近抗原孔批示（抗體含量較高）；靠近抗體孔則批示（抗原含量較高）；不出現(xiàn)沉淀線則表明（無對應的抗原和抗體）。7．免疫電泳是將（電泳）與（雙向免疫擴散）相結(jié)合的一種免疫化學分析技術(shù)。8．火箭免疫電泳是（電泳）與（單向免疫擴散）相結(jié)合的免疫技術(shù)。9．對流免疫電泳是（電泳）與（雙向免疫擴散）相結(jié)合的免疫技術(shù)。10．對流免疫電泳中，抗體流向負極，是由于（電泳）速度?。姖B）速度大。11．免疫濁度測定的基本原理是抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成（免疫復合物），使反映液出現(xiàn)（濁度），并可根據(jù)其推算出抗原或抗體的量。12．根據(jù)Rayleigh方程，散射比濁法中的散射光強度與入射光波長成（反）比，與粒子的濃度和體積成（正）比。13．速率散射比濁法是測定單位時間內(nèi)免疫復合物形成的（最快時間段）的散射信號值，此時的散射信號最強，速率散射信號值最大。14．免疫膠乳濁度測定的原理與透射比濁法相似。載體為大小適中、均勻的膠乳顆粒其直徑應稍（不大于）入射光波長現(xiàn)在多用（200）nm的膠乳顆粒。15．免疫濁度測定的基本原則之一是反映體系中必須始終保持（抗體）過量。16．凝膠內(nèi)沉淀實驗涉及（單向擴散實驗、雙向擴散實驗）；抗原抗體最適比的基本測定辦法為（抗原稀釋法、抗體稀釋法）。1．標記免疫技術(shù)的示蹤物有(酶、放射性核素、熒光素、化學或生物發(fā)光劑、膠體金)2．放射免疫技術(shù)可分為(放射免疫分析RIA、免疫放射分析IRMA)兩種基本類型。3．采用125-I制備標記物的基本原理是以放射性碘原子置換被標記物分子中(酪胺酸或酪胺殘基)或(組胺殘基)上的氫原子。1．熒光免疫技術(shù)的重要類型涉及(熒光抗體染色技術(shù)、熒光免疫測定技術(shù))。2．熒光物質(zhì)有(熒光素、其它熒光素物質(zhì))。3．熒光抗體染色技術(shù)可分為(熒光免疫顯微技術(shù)、流式熒光免疫技術(shù))。4．鑭系稀土元素標記物制備的螯合劑有(多羧基酸類螯合劑、B-二酮體類螯合劑、BCPDA、菲洛林)5．熒光免疫測定根據(jù)抗原抗體反映后與否需要分離結(jié)合的與游離的熒光標記物而分為(均相、非均相)兩種類型。6．非均相熒光免疫測定法涉及(時間分辨熒光免疫測定、熒光酶免疫測定)。7．均相熒光免疫測定法涉及(熒光偏振免疫測、底物標記熒光免疫測定)。8．熒光素標記抗體的辦法有(攪拌標記、透析標記法)。1．膜載體酶免疫測定技術(shù)的類型重要有(斑點-ELISA免疫滲濾實驗、免疫層析實驗、免疫印跡法)2．酶免疫組織化學技術(shù)慣用的酶有（HRP、ALP、β-半乳糖苷酶(β-Gal)）。3．ELISA檢測抗原的辦法重要有(雙抗體夾心法、雙位點一步法、競爭法)；檢測抗體的辦法重要有（間接法、雙抗原夾心法、競爭法、捕獲法）。4．ELISA中三種必要試劑是(固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體、酶的反映底物)。5．制備酶結(jié)合物慣用的辦法有(戊二醛交聯(lián)法、過碘酸鹽氧化法)。6．在稀釋液和洗滌液中加入(吐溫一20)，能夠去除非特異性吸附。7．均相酶免疫測定技術(shù)的類型重要有(酶增強免疫測定技術(shù)、克隆酶供體免疫分析技術(shù))。8．非標記抗體酶免疫組織化學技術(shù)的類型重要有(酶橋法、PAP法、雙橋PAP法、APAAP法)。9．(SDS、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運、酶免疫測定)三項技術(shù)結(jié)合而成形成免疫印跡法。10．慣用于HRP標記抗原/抗體的辦法：（戊二醛交聯(lián)法、改良過碘酸鈉法）。1.化學發(fā)光免疫技術(shù)根據(jù)發(fā)光方式不同分為（化學發(fā)光酶免疫分析、化學發(fā)光免疫分析、點化學發(fā)光免疫分析）。2.根據(jù)形成激發(fā)態(tài)分子的激發(fā)能可將發(fā)光分為三種類型（光照發(fā)光、生物發(fā)光、化學發(fā)光），發(fā)光劑分為（熒光素、生物發(fā)光劑、化學發(fā)光劑）三種。3.HRP慣用的發(fā)光底物為（魯米諾）；ALP慣用的發(fā)光底物為（AMPPD、4-MUP）。4.發(fā)光酶免疫分析的技術(shù)要點涉及（抗原抗體反映、標記物游離部分和結(jié)合部分分離、酶促發(fā)光反映及檢測）三個過程。5.發(fā)光酶免疫分析慣用的標記酶有（ALP、HRP），根據(jù)酶促反映底物不同，發(fā)光酶免疫分析可分為（熒光酶免疫分析、化學發(fā)光酶免疫分析）6.電化學發(fā)光免疫分析是（電化學、免疫測定）相結(jié)合的產(chǎn)物。它的標記物的發(fā)光原理與普通化學發(fā)光不同，是一種在電極表面由（電化學）引發(fā)的特異性化學發(fā)光反映，事實上涉及了（電化學、化學發(fā)光）兩個過程。7.ECLIA通過（電）啟動發(fā)光反映，而CLIA是通過（化合物混合）啟動發(fā)光反映。1.不受位阻效應影響，更易發(fā)揮生物素活性作用的是（BCNHS）。2.用于標記蛋白質(zhì)醛基的，合用范疇較BHZ寬的活化生物素是（BCHZ）。3.在一定波長的光照射下，光敏基團可轉(zhuǎn)變?yōu)榉枷慊趸蕉苯优c腺嘌呤N7位氨基結(jié)合的是（光生物素）。4.生物素化蛋白質(zhì)衍生物有二類，一種是（生物素化的大分子生物活性物質(zhì)），另一種是（標記材料結(jié)合生物素后制成的標記物）。5.用于親和素標記的物質(zhì)中，最慣用的是（酶、異硫氰酸熒光素(FITC)、膠體金）。1.用丙酮做固定劑的抗原是（免疫球蛋白）；用1%聚甲醛做固定劑的抗原是（激素）；用10%甲醛做固定劑的抗原是（類脂質(zhì)）；用95%乙醇做固定劑的抗原是（蛋白質(zhì)）；用四氯化磺做固定劑的抗原是（酶）。2.免疫染色對特殊標本的進一步解決慣用（冰凍切片、石蠟切片）法。3.免疫組化染色后，陽性細胞的染色分布有三種類型，分別是（胞質(zhì)型、細胞核型、細胞膜表面型）。4.酶免疫組化技術(shù)中最慣用的酶有（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶）。5.免疫電鏡標本的制備重要有（非包埋法免疫染、包埋前免疫染色、包埋后免疫染色）6.免疫組化中最慣用的制片辦法是（蛋白酶消化法、非特異吸附法）。1．金免疫技術(shù)重要有(金免疫組織化學染色技術(shù))和(金免疫測定技術(shù))，前者涉及（免疫金(銀)光鏡染色技術(shù)、免疫金電鏡染色技術(shù)）；后者涉及（斑點金免疫滲濾實驗、斑點金免疫層析實驗）等。2．免疫金是指（膠體金與抗原(抗體)）的結(jié)合物，在免疫組織化學染色技術(shù)中，習慣上稱之為(金探針)3．斑點金免疫層析實驗辦法學類型有(雙抗體夾心法、競爭法、間接法)。4．滲濾裝置是斑點金免疫滲濾實驗試劑盒中重要構(gòu)成部分之一，由(塑料小盒、吸水墊料)和(點加了抗原或抗體的硝酸纖維素膜片)三部分構(gòu)成。5．斑點金免疫滲濾實驗試劑盒由(滲濾裝置、膠體金標記物、洗滌液)構(gòu)成。6．用于電鏡的免疫金法可分為(包埋前染色、包埋后染色)兩大類。7．免疫金電鏡染色技術(shù)涉及(標本包埋、免疫組化染色)兩個重要環(huán)節(jié)。8．為了消除待測血清標本中(非特異性IgG)的干擾，斑點金間接免疫層析法測抗體常設(shè)計成（反流免疫層析法）1．PBMCs涉及（淋巴細胞）和（單核細胞）。2．在反相溶血空斑實驗中每一種空斑代表一種（分泌Ig的細胞）。3．B細胞表面特異的標志是（SmIg）。4．慣用的測定淋巴細胞活力的辦法是（臺盼藍染色法）。5．淋巴細胞轉(zhuǎn)化狀況的鑒定辦法有（形態(tài)學辦法、3H—TdR摻入法、MTT比色法）。6．淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗應用的同位素是（3-H），細胞毒實驗應用的同位素是（51-Cr）7．分離外周血白細胞慣用的辦法是（自然沉降法）和（聚合物加速沉降法）。8．去除白細胞懸液中殘留紅細胞的慣用辦法有（無菌蒸餾水低滲裂解法、0．83％氯化銨解決法）。9．去除單個核細胞懸液中單核細胞的慣用辦法有（黏附去除法、羰基鐵粉吞噬去除法）。10．檢測T細胞數(shù)量的花環(huán)技術(shù)涉及（E花環(huán)實驗、葡萄球菌花環(huán)法、抗體致敏紅細胞花環(huán)法）；檢測B細胞數(shù)量的花環(huán)技術(shù)重要有（Ea花環(huán)實驗、Et花環(huán)實驗）。11.淋巴細胞的密度為（1.077±0.001）。12．外周血經(jīng)Ficoll分離液離心后從上到下分為（血清、PBMCs、粒細胞、紅細胞）層。1．活化的TH1細胞產(chǎn)生的細胞因子重要有（IL-2、IFN、IL-12），而TH2細胞重要產(chǎn)生的細胞因子為（IL-4、IL-5、IL-10）。2.細胞因子慣用的檢測法涉及（生物學檢測法、免疫學檢測法、分子生物學檢測法）。3.ELISA測定法測定細胞因子慣用（競爭法）。1．補體參加的反映實驗類型涉及(免疫溶血實驗、補體結(jié)合實驗、補體依賴的細胞毒驗、免疫黏附實驗).2．參加補體結(jié)合實驗的試劑可分為(批示系統(tǒng)、反映系統(tǒng))兩個系統(tǒng)。3．Ⅲ型變態(tài)反映疾病患者的血清中補體水平(減少)。4．補體的最佳保存溫度是(一20℃下列)，在（56℃）下30min即被滅活。5．CH50實驗中有（綿羊紅細胞、溶血素、人血清）參加反映。1．免疫球蛋白根據(jù)重鏈的不同可分為（IgM、IgG、IgA、IgE、IgD）2．免疫固定電泳的特點是（周期短、敏感性高、分辨清晰、成果易于分析）3．Ig中k/λ比率正常范疇是（1.2～2.4）1．腫瘤抗原可分為（腫瘤有關(guān)抗原、腫瘤特異性抗原）兩類。2．腫瘤標志物檢測的臨床意義，歸納起來有（早期普查、腫瘤診療、監(jiān)測病情）等3．腫瘤標志物的檢測對臨床某些腫瘤有重要輔助診療價值，如：AFP可輔助診療（肝癌），CEA可輔助診療（結(jié)腸癌），PSA可輔助診療（前列腺癌）。4．細胞免疫是抗腫瘤免疫的重要機制，參加抗腫瘤免疫的細胞重要有（T細胞、B細胞、NK細胞、樹突狀細胞)等。1．宿主抗移植物反映根據(jù)臨床出現(xiàn)癥狀狀況普通分為（超急性排斥、急性排斥、慢性排斥）三類。2.(HLA)是不同個體間進行器官或組織移植時發(fā)生排斥反映的重要成分。3.HLA三類分子中，（Ⅰ、Ⅱ類）分子是能發(fā)生移植排斥反映的首要抗原特別是（HLA-DR）位點。4.HLA-A、B、C和HLA-DQ、DR抗原采用(補體依賴的微量細胞毒)實驗檢測。簡答/問答抗原抗體反映的原理：1.Ag、Ab能特異性結(jié)合：（內(nèi)因）2.Ag、Ab結(jié)合的動力：（外因）靜電引力（又稱庫侖引力）范得華力（又稱電子云力）氫鍵、疏水作用力?？乖贵w反映的特點：2.特異性、交叉反映(cross-reaction)2.最適比例3.可逆性影響抗原抗體反映的重要因素本身因素：Ag：與Ag的理化性質(zhì)、抗原表位的數(shù)目及種類有關(guān)；Ab：與Ab的來源有關(guān)：是R型抗體或H型抗體；與Ab的特異性、親合性有關(guān)；與Ab的濃度有關(guān)。外界環(huán)境條件：1．電解質(zhì)2．PH3．溫度抗原抗體反映分哪些種類？沉淀反映；凝集反映；補體參加的溶血反映、補體結(jié)合實驗、中和實驗、三大標記技術(shù)什么是交叉反映，有無特異性，為什么？在臨床上有何意義？交叉反映(cross-reaction)抗體對含有相似或相似抗原表位的抗原發(fā)生的反映稱為交叉反映。交叉反映并沒有違反Ag、Ab特異性結(jié)合的原則，其產(chǎn)生的先決條件是存在共同Ag表位。交叉反映的意義：1.免疫學診療：（運用交叉反映）eg外斐氏反映等:運用變形桿菌OX19、OX2、OXk作Ag檢查血清中Ab，診療斑疹傷寒（立克次氏體感染所致）2.可造成免疫病理損害：eg鏈球菌感染后易造成腎小球腎炎，其因素為鏈球菌與人體腎小球基底膜有共同的Ag表位所致。雙擴、單擴、對流免疫電泳、免疫電泳實驗的原理，辦法，用途。凝膠擴散實驗原理：可溶性抗原與對應抗體在電解質(zhì)存在下，在瓊脂基質(zhì)中擴散，當兩者相遇，比例恰當時結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀線。雙擴，辦法：制備瓊脂板、打孔、加樣、擴散、用途：1.已知Ag或Ab測未知Ab或Ag：雙孔型2.抗原性質(zhì)分析：三角孔型3.測Ag有效稀釋度：梅花孔型。單擴：辦法：已知抗體+瓊脂混合制板、打孔，在瓊脂板小孔中加梯度抗原，抗原向四周擴散形成沉淀環(huán)，抗原濃度與沉淀環(huán)直徑呈線性關(guān)系繪制原則曲，從原則曲線上查出并計算待測標本含量。用途：定量測定可測IgG、IgA、IgM、C3等含量。對流免疫電泳（counter-immunoelectrophoresis)原理：定向加速的免疫雙擴（雙擴＋電場，使抗原、抗體相對泳動）辦法：抗原、抗體分別在瓊脂板上不同孔內(nèi)，抗原在負極端，抗體在正極端，電泳。電壓：4~6v/cm(瓊脂長度）電泳時間：45分鐘~1小時。用途用于HBsAg、AFP等檢測。免疫電泳（immunoelectrophoresis)原理：區(qū)帶電泳＋雙擴結(jié)合。辦法：1.Ag電泳分出區(qū)帶（當時看不到）2.Ag、Ab免疫雙擴。用途：慣用于分析復雜Ag的組分。（如人全血清組分的分析）影響電泳的因素有哪些？1.與溶液的pH有關(guān)：慣用pH8~9，蛋白質(zhì)帶負電2.與溶液離子強度有關(guān)：愈高，泳動慢，普通0.02~0.2M3.與電場強度有關(guān)：愈高，愈快，普通4~6v/cm（瓊脂長），約40v左右4.電滲作用的影響：電場中液體對于一固體的固定相對移動的現(xiàn)象。電滲方向與電泳方向相反。Ab沉淀素(precipitin)。沉淀反映稀釋ag，凝集反映稀釋ab。Ag凝集原agglutinogenAb凝集素agglutinin玻片凝集實驗和試管凝集實驗的區(qū)別玻片法用已知抗體檢測未知抗原。定性實驗。用途：ABO血型鑒定、菌種鑒定。試管法用已知抗原測未知抗體的效價。屬半定量實驗。反向間接凝集實驗、間接凝集克制實驗的原理及實例：反向間接（血、膠乳）凝集實驗。原理：將已知抗體吸附于載體上，檢測未知抗原。如：反向間接血凝檢測HBsAg、AFP等間接凝集克制實驗原理：待測樣本（可溶性Ag？）+已知Ab，反映一段時間后，+已知致敏Ag顆粒（已成為顆粒性Ag），觀察與否有凝集現(xiàn)象。不凝集為陽性，凝集為陰性。如：用膠乳凝集克制實驗檢測小便中絨毛膜促性腺激素（HCG）協(xié)同凝集實驗的原理原理：實質(zhì)為反向間接凝集反映葡萄球菌A蛋白（StaphylococcusproteinA,SPA)能非特異地與IgG的Fc段結(jié)合,當與特異性抗原相遇時，IgG的Fab段與抗原結(jié)合，出現(xiàn)金葡菌的凝集現(xiàn)象（屬特殊間接凝集實驗）比較沉淀實驗和凝集實驗的異同抗原性質(zhì)：可溶性Ag、顆粒性Ag。稀釋對象：抗原、抗體。成果現(xiàn)象：沉淀現(xiàn)象、凝集現(xiàn)象。敏感性：低、高。免疫血清制備的重要程序。（一）動物的選擇：1.慣用動物：哺乳類較多：馬、羊、豬、猴、兔豚鼠等；禽類：雞。2.選擇原則：免疫的Ag與動物的種類規(guī)定越遠越好（即免疫原性好）；與免疫血清的量有關(guān)：所需量大，用馬、羊、猴等大動物；所需量小，用兔、豚鼠等小動物動物的個體狀態(tài)：雄性、適齡、健康、無感染；其它：根據(jù)實驗的特殊規(guī)定。（二）抗原的條件：含有良好的抗原決定簇（表位）：易被LC識別而產(chǎn)生Ab；含有可靠的純度；足夠大的分子量及相對復雜的空間構(gòu)造；注射量：嚴格掌握。寧可小，普通用25μg/kg動物；量大可出現(xiàn)免疫克制佐劑概念、作用機理、福氏不完全/完全佐劑的構(gòu)成。佐劑（adjuvant)：同Ag一起或預先注入機體，能增強機體對該Ag的免疫應答或變化免疫應答類型的物質(zhì)。福氏不完全佐劑（FIA）：構(gòu)成：羊毛脂＋石臘油，兩者比例為4：1.福氏完全佐劑（FCA）：構(gòu)成：羊毛脂＋石臘油＋卡介苗分離提純免疫球蛋白有哪些辦法，其原理是什么？1鹽析法:在不同濃度的中性鹽中蛋白質(zhì)會脫水，減少帶電電勢，親水性變?yōu)槭杷裕肿娱g互相凝聚而沉淀（鹽析作用）。不同蛋白質(zhì)鹽析所需中性鹽的濃度不同，故可分離不同蛋白質(zhì)。2離子交換層析法:原理運用不同的蛋白質(zhì)在緩沖溶液中所帶電荷不同，與某一載體上的含有相反電荷的離子基團進行吸附，然后進行解脫，達成純化蛋白質(zhì)目的。3凝膠過濾法:凝膠顆粒是網(wǎng)狀構(gòu)造，當分子大小不同的混合物通過凝膠柱時，分子大的先下來，分子小的嵌入凝膠顆粒的網(wǎng)狀構(gòu)造中后下來，從而將分子大小不同的物質(zhì)分離開來，即為分子篩的作用。4親和層析法:運用抗原抗體的結(jié)合含有特異性、可逆性，將純化抗原先交聯(lián)到載體（瓊脂糖珠）上，制成親和層析柱，當Ab（Ig）通過時，與抗原特異性結(jié)合在柱上，Ab中雜質(zhì)流出。然后通過變化緩沖液pH、離子強度，使Ab解脫下來。免疫標記技術(shù)的原理用能夠微量檢測的標記物（示蹤物質(zhì)）標記抗原或抗體，作為試劑，與對應抗體或抗原結(jié)合反映后，測定抗原抗體復合物中的標記物，從而推斷所測抗體或抗原有無及量的多少免疫熒光技術(shù)中最慣用的熒光素是什么？1.異硫氰酸熒光黃(Fluoresceinisothiocyanate,FITC)可發(fā)出黃綠色熒光2.四乙基羅丹明（rhodamine,RB20)發(fā)出橘紅色熒光3.四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC)發(fā)出橙紅色熒光免疫熒光顯微染色的多個辦法及優(yōu)缺點1.直接法:快、直接、干擾因素少;用于檢測抗原;每檢測一種抗原要標記一種熒光抗體,較麻煩。2.間接法：優(yōu)點：制備一種熒光抗體（抗抗體）可用于多個Ab檢測；敏捷度高。3.補體法：敏捷度高，制備一種熒光抗補體用于多個檢測；干擾因素多，補體不穩(wěn)定，少用。4.雙標記法。免疫熒光顯微技術(shù)優(yōu)缺點優(yōu)點：1.特異性、敏感性高2.快速3.可定位4.既可測Ag又可測Ab。缺點：1.需要熒光顯微鏡2.有非特異熒光干擾3.定性測定、判斷成果不客觀4.片子難保存（熒光猝滅）ELISA的原理、辦法（以間接法測抗體和雙抗夾心法為例）及影響因素。原理：將酶分子與Ab或Ag連接成一酶結(jié)合物（酶標記物），當它與固相載體中對應Ag或Ab相遇，形成酶標記的AgAb復合物，加入底物，酶催化底物，生成有色產(chǎn)物，根據(jù)顏色深淺可測出溶液中Ag或Ab的量。雙抗體夾心法環(huán)節(jié)：包被已知Ab-洗滌-加待測標本（測Ag？）-洗滌-加酶標Ab-洗滌-加底物-加終止液-觀察成果。間接法：環(huán)節(jié)：包被已知Ag＋待測標本（Ab？）-反映一段時間后，洗滌-加酶標抗抗體（酶標羊抗人IgG）-洗滌-加底物-加終止液，觀察成果。ELISA實驗的影響因素（一）固相載體：酶標板規(guī)定：吸附性能好、空白值低、透明度高，板批間、孔間性能相近。（二）抗原、抗體Ag：需純化Ab：需效價高、親和力強、純化（三）實驗條件1.包被：普通用pH9.6CB(carbonatebuffer)，0.05M,有助于蛋白質(zhì)吸附。包被濃度：0.1~100g/ml，普通慣用10g/ml包被時間、溫度：4℃過夜或37℃1-3h包被量：100ul封閉：用0.1~5%牛血清白蛋白緩沖液浸泡0.5小時2.抗原抗體反映的條件。（1）微堿性有助于抗原抗體結(jié)合，故用pH7.4PBS(phosphatebuffersaline)洗滌（2）去污劑有助于AgAb形成，洗液中加0.05%Tween-20（3）Ag、Ab反映時間、溫度：普通37℃、40～50分鐘3.洗滌用PH7.2-7.4PBS,規(guī)一化,每次浸泡1~2分鐘,拋干,共洗滌3~4次4.酶促反映條件溫度37℃時間10-20分pH5.5底物量一致5.排除干擾：多設(shè)對照。ELISA實驗應設(shè)哪些對照，為什么？陽性對照同標本同樣顏色深；陰性對照同標本同樣顏色淺or無色；酶結(jié)合物對照加酶步加入無色；底物對照加底物步加入無色；空白對照只加終止液無色。判斷ELISA實驗成果的辦法。（一）肉眼鑒定與陽性、陰性對照顏色比較：1.若待檢孔顯色淺于陰性對照則鑒定為陰性；2.若待檢孔顯色深于或等于陽性對照孔則鑒定為陽性；3.若待檢孔顯色介于陰性對照孔和陽性對照孔之間則鑒定為弱陽性。（二）酶標光度儀檢測A492值（吸光率）：比色法1.與陽性、陰性對照測定值比較2.P/N比值：不不大于2.0為陽性，不大于2.0為陰性P:positive（待測吸光度值）N:negative單克隆抗體概念由一種B細胞克隆產(chǎn)生的識別單一抗原表位的同源抗體。雜交瘤技術(shù)制備單抗的原理及簡要環(huán)節(jié)能產(chǎn)生抗體的小鼠B(漿)細胞與小鼠骨髓瘤細胞雜交能生成分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞。1.制備能產(chǎn)生單抗的雜交瘤細胞2.克隆化雜交瘤細胞3.篩選雜交瘤細胞4.擴大培養(yǎng)單克隆雜交瘤細胞5.收集單抗并鑒定6.純化單抗HAT培養(yǎng)基的作用(次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）：氨基蝶呤是抗代謝的藥品，能阻斷內(nèi)源性合成DNA（合成DNA的重要途徑）。選出雜交瘤細胞。人源單克隆抗體概念：單克隆抗體為人IgG。制備目的：用于人?；蚬こ炭贵w、嵌合抗體概念，嵌合抗體優(yōu)點基因工程抗體：在基因水平上對編碼抗體的基因進行切割、拼接或修飾，甚至人工合成，然后導入受體細胞內(nèi)體現(xiàn)而產(chǎn)生的抗體（單克隆抗體）。嵌合抗體：用DNA重組技術(shù)將鼠源單抗基因的可變區(qū)（V區(qū)）基因與產(chǎn)生人Ig的恒定區(qū)（C區(qū)）基因相連接，構(gòu)成嵌合基因，導入受體細胞（骨髓瘤細胞），體現(xiàn)出嵌合抗體。a.免疫原性低，有助于用于人體b.在人體內(nèi)半衰期較鼠單抗長c.在人體內(nèi)生物學作用（如CDC、ADCC）較鼠單抗強d.與人/人雜交瘤比，體外傳代更穩(wěn)定人體免疫功效涉及哪些構(gòu)成部分一.非特異性免疫應答1.皮膚黏膜的機械阻擋作用及局部分泌的抑菌、殺菌物質(zhì)2.吞噬細胞的吞噬作用3.NK(naturekiller)細胞對病毒感染靶細胞的殺傷作用4.血液、體液中的抗菌分子：補體、溶菌酶。二.特異性免疫應答細胞免疫：由TLC主導完畢，其效應物質(zhì)是致敏TLc(CTL/Th1)體液免疫：由BLC主導完畢，其效應物質(zhì)是Ab實驗室中檢測人細胞免疫和體液免疫最慣用哪些實驗，這些實驗的原理如何？正常值應為多少？一.T細胞的計數(shù)（T細胞表面標志的檢測）（一）特異性抗原的檢測T細胞表面有某些特異的CD抗原，根據(jù)這些不同的CD抗原可鑒定不同的T細胞群體1.免疫熒光法：用熒光素標記的單抗作為試劑染色淋巴細胞，計算出染上熒光的淋巴細胞百分率2.免疫細胞化學法。（二）T細胞特異性受體（E受體）的檢測E花環(huán)形成實驗(ErythrocyteRosetteformingtest)原理：T淋巴細胞表面含有綿羊紅細胞（SRBC)受體（CD2)，當T淋巴細胞與綿羊紅細胞相遇時，T細胞通過該受體吸附綿羊紅細胞而形成花環(huán)。Et正常值60%~80%Ea正常值20%~30%二.T細胞功效的檢測（一）淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗1.原理淋巴細胞在某些物質(zhì)刺激下，細胞增殖、分化（如細胞變大、胞漿增多、出現(xiàn)空泡）DNA合成增加（核染色質(zhì)疏松，核仁出現(xiàn)），轉(zhuǎn)化成為淋巴母細胞。（1）形態(tài)學檢測法正常值60%～80%。（2）同位素摻入法（3H-TdR摻入法）原理：T細胞受PHA刺激后，細胞進入增殖周期發(fā)生有絲分裂合成DNA。實驗中當細胞進入S期時，在培養(yǎng)液中加入3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR)，細胞攝入，合成DNA,據(jù)摻入細胞內(nèi)的同位素量，可推測細胞增殖活躍程度，從而判斷淋巴細胞轉(zhuǎn)化的程度。（3）MTT比色法（二）有關(guān)的細胞因子的檢測（三）淋巴細胞的細胞毒性檢測1.形態(tài)學辦法2.同位素法：慣用51Cr釋放實驗原理：用51Cr標記靶細胞（普通為腫瘤細胞），將它與待測淋巴細胞（效應CTL細胞）一起培養(yǎng)，效應細胞破壞靶細胞，51Cr釋放出來，測定其51Cr數(shù)量，便可推知效應細胞的殺傷能力。特異溶解百分率不不大于50%為陽性。二、細胞免疫功效體內(nèi)檢測法（—）Ⅳ型超敏反映皮試原理：Ⅳ型超敏反映的本質(zhì)是細胞免疫，因此Ⅳ型超敏反映如為陽性，可反映細胞免疫功效好。陽性（直徑>0.5cm)：曾感染過結(jié)核菌，細胞免疫功效好。陰性(直徑<0.5cm)：細胞免疫功效差或從未感染過結(jié)核菌。強陽性（直徑>2.5cm)：表明現(xiàn)處在結(jié)核的活動期。三.B細胞數(shù)量的檢測（一）B細胞表面識別抗原受體（BCR）（SmIg,SurfacemembraneIg)的檢測。正常值：15%~25%。（二）B細胞表面抗原的檢測。B細胞表面特有的CD抗原有：CD19、CD20，用抗CD20的單抗（免疫熒光法、酶免疫組化法）檢測外周血淋巴細胞，陽性細胞為B淋巴細胞，約占總淋巴細胞的10%~15%。四.B細胞功效的檢測（一）血清中Ig的測定人的體液免疫功效正常（B細胞功效正常），應反映在血清中有正常量的免疫球蛋白（二）血型抗體效價的測定反映體內(nèi)IgM水平正常6月嬰兒抗A>1：8，或抗B>1:4;1歲后抗A>1:16，或抗B>1：8如3歲以上抗A或抗B效價仍<1：4，表達IgM缺少，提示先天性體液免疫功效缺點。（三）抗原刺激機體后抗體應答反映（體內(nèi)實驗）將抗原注射到體內(nèi)，一段時間后檢測對應抗體效價，如抗體效價低，闡明機體體液免疫功效差如用三聯(lián)傷寒菌苗0.25ml注射，每七天1次，持續(xù)3次，抗H應為1：160，若低，表達體液免疫應答功效差。補體的定義、構(gòu)成及性質(zhì)complement：補體是存在于人和動物血清中的一組含有酶活性的球蛋白，普通狀況下處在未激活狀態(tài)。補體的特性：穩(wěn)定性差，多個理化因素都可使之失活：如酸、堿、紫外線照射、激烈震蕩等。構(gòu)成：1.補體的固有成分：C1-C9,其中C1又涉及C1q、C1r、C1s,共9種成分11種蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3的含量最高；2.補體的調(diào)節(jié)蛋白：如C4調(diào)節(jié)蛋白、C1克制物、S蛋白等；3.補體受體；如C1qR、C3aR等；CH50實驗的原理、正常值及意義原理：構(gòu)成和功效完整的補體系統(tǒng)能使致敏羊紅細胞發(fā)生溶血；羊紅細胞的溶血程度與補體的活性成正比；CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀釋倍數(shù)?？傃a體活性參考范疇：50－100U/ml。補體檢測的臨床意義：1.補體量↑:多見于急性炎癥感染、組織損傷、癌腫；2.補體量↓：見于補體消耗↑：體內(nèi)有Ag、Ab反映，如SLE、RA等；補體合成↓：肝臟疾患；補體先天性缺少：含有遺傳性和家族史補體結(jié)合實驗的原理、成果判斷及評價原理：補體可與任何一組AgAb復合物結(jié)合；一旦與某一復合物結(jié)合后，便不再與另一復合物結(jié)合。成果判斷：不溶血為陽性，即待測物中有對應的Ab或Ag；溶血為陰性，即待測物中無對應的Ab或Ag。優(yōu)點：該實驗既可測Ag、又可測Ab；Ag既能夠是顆粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至能夠是塊狀物，因此檢測Ag的范疇廣；能夠用于病毒、立克次氏體、細菌等多個病原體的檢測（事實上是測Ag）；比較敏感(0.05μg/ml)、特異；成果判斷明顯：通過有無溶血來觀察，無需特殊儀器檢測。缺點：參加反映的物質(zhì)多，影響因素也多；（反映體系中有Ag、Ab、C、羊紅細胞、溶血素）；在正式實驗前需要找出幾個物質(zhì)間最恰當?shù)谋壤?，比較復雜。免疫復合物的含義及免疫復合物病的致病因素含義：immunecomplex,它重要指AgAb復合物及AgAbC復合物兩種。中檔大小的IC沉積在體內(nèi)，通過激活補體、激活血小板而致病。免疫復合物檢測使用的原則品、出現(xiàn)的問題及WHO推薦的檢測辦法原則品是AHG—熱聚合人IgG（不是IC）。IC檢測的有關(guān)技術(shù)問題：到現(xiàn)在為止，全部檢測IC的實驗，還沒有另人滿意的原則化方法;在體外制備的IC還很不穩(wěn)定，因此用人工合成的復合物作為定量原則不適宜。WHO推薦的檢測辦法：C1q結(jié)合實驗、膠固素實驗、類風濕因子（RF）實驗、Raji細胞實驗AID的基本特性及常見的AID有哪些？誘因可有可無。有一定的遺傳傾向。女性患者多見，發(fā)病率隨年紀增加而增加。患者血清中可檢出高效價的本身抗體和（或）本身致敏T淋巴細胞。某些本身抗體在本身免疫病中呈現(xiàn)交叉重疊現(xiàn)象:即在同一種本身免疫病患者體內(nèi)可檢測到多個本身抗體，而不同的本身免疫病也可存在同一種本身抗體。IgG、IgA、IgM升高，特別IgG升高明顯。病損局部可發(fā)現(xiàn)有淋巴細胞、漿細胞、嗜酸性粒細胞浸潤及免疫復合物沉積。免疫克制劑治療可獲得一定療效。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemiclupuserythematosus,SLE）Ⅲ型；類風濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoidarthritis，RA）Ⅲ型；本身免疫性溶血性貧血（autoimmunehemolyticanemia,AIHA）Ⅱ型；重癥肌無力（myastheniagravis,MG）Ⅱ型。ANA的定義及ANAs的構(gòu)成抗核抗體（antinuclearantibody,ANA)原指抗細胞核抗原成分的本身抗體的總稱。廣義地指抗細胞內(nèi)全部抗原成分的本身抗體的總和。ANA所針對的靶抗原由細胞核擴展到整個細胞，涉及細胞核、細胞漿、細胞骨架及細胞周期等。抗核抗體譜（antinuclearantibodies,ANAs）抗DNA抗體：抗dsDNA、抗ssDNA抗體抗組蛋白抗體（AHA)：抗H1、H2A、H2B、H3、H4等抗ENA抗體：抗Sm、抗核糖核蛋白（RNP）、抗SS-A、抗SS-B等抗非組蛋白抗體：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖細胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、抗PL-12、抗著絲點抗體等抗核仁抗體：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA抗細胞其它成分抗體：抗高爾基體、抗中心體、抗線粒體、抗肌動蛋白、抗核層蛋白等多個AID檢測時的代表性本身抗體有哪些？抗dsDNA抗體對SLE有較高特異性，70-90%活動性SLE患者該抗體陽性，是SLE的診療原則之一。AHA在藥品性狼瘡患者中陽性率達90-100%，而SLE病人陽性率僅有20-35%，類風濕性關(guān)節(jié)炎病人為36%?？筍m抗體：抗Sm抗體是SLE的特異性標志，疾病特異度達99%，為提高SLE的診療精確率，可將抗Sm抗體和抗dsDNA抗體同時檢測?？筍S-A、SS-B抗體：抗SS-A和抗SS-B抗體并存是干燥綜合癥的特異標志。核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又稱u1RNP。抗u1RNP抗體在混合性結(jié)締組織病(MCTD)陽性率為95%以上，是MCTD的標志抗體?？筍cl-70是進行性全身性硬化癥（PSS）的標志抗體，陽性率為50-64%。抗Jo-1抗體對肌炎和間質(zhì)性肺纖維化有高度特異性，抗體的效價與疾病的活動性有關(guān)。原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）時AMA陽性率可達90%以上。AMA是PBC的血清學指標。在原發(fā)性免疫缺點病中哪一種發(fā)生最多？原發(fā)性體液免疫缺點?。ㄕ荚l(fā)性ID的50~70%），如嬰兒性聯(lián)丙球蛋白缺少癥。懷疑體液免疫缺點應作哪些過篩實驗和確診實驗？1.過篩實驗（1）血清蛋白電泳丙球定量（2）血型抗體效價測定（反映IgM水平）正常（3）血清抗鏈球菌溶血素抗體的測定（抗O）的測定—反映IgG水平（4）骨髓檢查2.確診實驗（1）血清免疫球蛋白（G、M、A）測定（2）抗原刺激后抗體應答反映3）B細胞計數(shù)（4）T細胞亞群測定懷疑細胞免疫缺點應作哪些過篩實驗和確診實驗？過篩實驗（1）淋巴細胞絕對值測定（2）遲發(fā)型超敏反映皮試（3）胸腺X線檢查。確診實驗（1）淋巴結(jié)活檢（2）T淋巴細胞計數(shù)（3）T細胞功效實驗Ⅰ、Ⅳ型超敏反映皮試的原理1當變應原再次進入致敏者皮膚，與吸附在肥大細胞或/和嗜堿性粒細胞上的特異IgE高變區(qū)結(jié)合，造成肥大細胞或嗜堿性粒細胞脫顆粒，釋放生物活性介質(zhì)：如組織胺、白三烯、激肽等。在20－30分鐘內(nèi)局部皮膚出現(xiàn)紅暈、紅斑、風團以及搔癢感，數(shù)小時后消失。出現(xiàn)此現(xiàn)象者判斷為皮試陽性，即對該變應原過敏;未出現(xiàn)紅暈、紅斑、風團者為陰性，即對該變應原但是敏。4用皮內(nèi)注射、皮膚斑貼等辦法使變應原進入已致敏機體，體內(nèi)致敏的T細胞CD4+Th1再次碰到對應抗原后，釋放出大量細胞因子，如IL-2、IFN-γ、TNF、IL-3、GM-CSF,（1）活化巨噬細胞及NK，增強吞噬細胞作用；（2）吸引WBC達成Ag所在部位，增進吞噬；（3）增進T細胞增生和分泌細胞因子，加重局部炎癥反映，最后造成局部以單核細胞和淋巴細胞浸潤為主的炎癥反映。比較Ⅰ、Ⅳ型超敏反映皮試(抗原、時間、成果、意義）抗原：體液免疫細胞免疫；時間：15-25min48-72h；成果：風團和紅暈反映，紅腫、硬結(jié)等局部炎癥反映；意義：尋找變應原、防止藥品或疫苗過敏，尋找變應原、評價機體細胞免疫功效狀態(tài)、用于傳染病的診療。掌握HLA-I、II類分子的構(gòu)造、分布及意義。HLA-I類分子由一條α鏈和一條β鏈構(gòu)成，α鏈的N端胞外分辨為α1、α2、α3三個構(gòu)造區(qū)，其中α1、α2構(gòu)成抗原結(jié)合槽，與解決后的抗原肽結(jié)合形成MHC-抗原肽復合體。HLA-I類分子分布在全部有核細胞膜上。功效：