南方醫(yī)科大學實驗室生物安全重點

生物安全（bio-safety）是指避免或控制生物因子，特別是以外的和故意的運用生物因子對實驗人員的暴露和上海的意識、方法和技術。生物安全：國防戰(zhàn)略的制高點。生物安全是指全球化時代國家有效應對生物及生物技術因素的影響和威脅，維護和保障本身安全與利益的狀態(tài)和能力。（鄭濤《生物安全學》）定義：國內——特質轉基因生物體的環(huán)境釋放以及外來物種入侵對生態(tài)環(huán)境，特別是對生物多樣性所造成的危害；生物技術及其產品對公眾健康和生態(tài)環(huán)境所造成的的危害；專指微生物實驗室的安全管理。國外——（狹義）防控因管理不善、操作不當致使有害生物意外泄露或環(huán)境釋放、跨國轉移所造成的的危害，重要關注意外事故的防控。（廣義）“免遭生物攻擊和侵害的管理與控制過程”，既涉及意外事故，也涉及蓄意行為。意義：①實驗室生物安全的需要；②新現和再現傳染病防治的需要；③防治醫(yī)院感染的需要。實驗室生物安全：保護工作人員避免接觸實驗室工作中的生物因子的原則和技術路線、避免實驗生物因子傷害風險的原則和方法。實驗室感染的直接因素：溢出和潑灑；針頭和注射器；銳器、碎玻璃；動物的咬傷；離心機事故；微生物氣溶膠。*氣溶膠（aerosol）：固體和（或）液體為力穩(wěn)定的懸浮于氣體介質中形成的分散體系。其中的氣體介質稱為持續(xù)相，普通為空氣；微粒稱為分散相，成分復雜，大小不一，粒徑為0.001~100μm，是氣溶膠的研究對象。能夠產生微生物氣溶膠的操作：接種環(huán)操作；吸管操作；針頭和注射器操作；培養(yǎng)和劃線操作；混合微生物懸液、使用攪拌機、混合器、超聲波儀和混合用的儀器；打開培養(yǎng)容器，感染性材料的溢出；真空凍干和過濾；接種雞胚和培養(yǎng)物的收取。新現和再現傳染病：定義：①因病原體的變異、種間傳遞、人類行為等因素而新出現的傳染病；②原來已經存在，只是由于新的檢測技術的應用而新發(fā)現的傳染病；③已被有效控制，但又石灰復燃的傳染病。醫(yī)院感染（Nosocomialinfection）：病人在如愿不存在也不處在潛伏期而在醫(yī)院內發(fā)生的感染，同時也涉及在醫(yī)院內感染而在出院后才發(fā)病的病人?！吨腥A人民共和國傳染病防治法》1989年2月21日公布；8月28日修訂，同年12月1日實施；6月29日修訂。目的：防止、控制和消亡傳染病的發(fā)生與流行，保障人民健康和公共衛(wèi)生。規(guī)定國家對傳染病實施防止為主，防治結合，分類管理。把我國流行的傳染病分為甲類、乙類、丙類。*注意：SARS、肺炭疽、人感染高致病性禽流感雖為乙類傳染病但是要按甲類管理；艾滋病由甲類管理改為乙類管理?！恫≡⑸飳嶒炇疑锇踩芾項l例》11月12日國務院424號令公布實施，是我國第一種含有法律效應的病原微生物安全的法規(guī)。內容涉及：病原微生物的分類和管理；實驗室的設立和管理；實驗室感染控制；監(jiān)督管理；法律責任。并在和相繼修訂。注意：第二十三條出入境檢查檢疫機構、醫(yī)療衛(wèi)生機構、動物防疫機構在實驗室開展檢測、診療工作時，發(fā)現高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物，需要進一步從事這類高致病性病原微生物有關實驗活動的，應當根據本條例的規(guī)定經同意同意，并在含有對應條件的實驗室中進行。（原：“獲得對應資格證書的實驗室”)。強調：造成傳染病傳輸、流行等嚴重后果的實驗室工作人員將受到處分，處以3年下列有期徒刑或拘役；構成犯罪的，依法追究刑事責任。對中國尚未發(fā)現或者已經宣布消亡的病原微生物，任何單位和個人未經同意不得從事有關實驗活動?！度碎g傳染的病原微生物名錄》1月11日衛(wèi)生部制訂。***第一類病原微生物：能夠引發(fā)人類或者動物非常嚴重疾病的微生物以及我國尚未發(fā)現或者已經宣布消亡的微生物；如埃博拉病毒第二類病原微生物：能夠引發(fā)人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳輸的微生物；如鼠疫耶爾森氏菌第三類病原微生物：★中檔個體危險和有限群體危險★可感染發(fā)病，對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引發(fā)嚴重的危害的病原體★實驗室暴露極少引發(fā)嚴重疾病，有有效治療和防止方法，并且傳輸危險有限；如肝炎病毒，最常見第四類病原微生物:個體和群體低危險;不能造成健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒、和寄生蟲等（非致病生物因子）;如大腸桿菌。各國微生物危險分級：四個級別的生物安全防護水平：一級最低；四級最高?！夺t(yī)療廢物管理條例》醫(yī)療廢物：醫(yī)療衛(wèi)生機構在醫(yī)療、防止、保健以及其它有關活動中產生的含有直接或者間接感染性、毒性以及其它危害性的廢物。登記內容：醫(yī)療廢物的來源、種類、重量或者數量、交接時間、處置辦法、最后去向以及經辦人簽名等項目，且登記資料最少保存３年。我國微生物實驗室的原則和指南：《實驗室生物安全通用規(guī)定》（修訂版）（GB19489-）；《實驗室生物安全通用規(guī)定》（GB19489-）國家實驗室生物安全強制執(zhí)行的原則；我國第一部有關實驗室生物安全的國標；生物安全實驗室認證承認的唯一國標。我國衛(wèi)生行業(yè)原則：《生物安全實驗室建設技術規(guī)范》（GB50346-）修訂版（GB50346-）《微生物和生物醫(yī)學實驗室的生物安全通用準則》（WS233-）內容：生物安全防護的基本原則；實驗室的分類分級及合用范疇；普通生物安全防護實驗室的基本規(guī)定；實驗脊椎動物生物安全防護實驗室生物危險標志及使用?！恫≡⑸飳嶒炇业纳锇踩ㄓ脺蕜t》（WS233-）感染性物質：指已知含有或有理由認為含有病原體的物質。病原體是指能使人類和動物感染疾病的微生物(涉及細菌、病毒、立克次體、放線菌、寄生蟲、真菌)和其它因子，如朊病毒。分類：A類-在運輸過程中與之接觸，能對健康人或動物造成永久性殘疾或致命疾病的感染性物質；B類-不符合A類原則的額感染性物質。《高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》通過，實施。包裝系統：內層-將樣品采用防水、防漏的內層容器包裝并貼上批示內容物的標簽；中層-內層容器和中層容器間應放置足量的吸水性材料；外層-硬質。申請資料：1.填寫樣本運輸申請表；2.法人資格證明材料（復印件）；3.接受樣本單位同意接受的證明文獻：接受單位應含有法人資格；含有從事高致病性病原微生物實驗活動資格的實驗室；獲得有關政府主管部門核發(fā)的從事高致病性病原微生物實驗活動、菌（毒）種或樣本保藏、生物制品生產等的同意文獻；5.容器或包裝材料的同意文號、合格證書（復印件）或者高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸容器或包裝材料承諾書；6.其它。運輸審批：注意-多次運輸使用期為6個月，期滿后需重新申請。保藏機構：保藏機構分為菌（毒）種保藏中心和保藏專業(yè)實驗室。菌（毒）種保藏中心分為國家級和省級兩級。實驗室在有關實驗活動結束后，應及時將病原微生物菌（毒）種和樣本就地銷毀或送交保藏機構保管。生物安全實驗室構造：硬件——一級防護屏障（安全設備）；二級防護屏障（設施）；軟件——實驗室管理規(guī)程；原則操作程序。一級為最低防護水平，四級為最高防護水平。一級生物安全防護水平（BSL-1）：★適合于已知其特性的、在健康成人中不引發(fā)疾病的、對實驗室工作人員和環(huán)境危害性最小的生物因子的工作。★許多普通與人類疾病不有關的病原微生物是條件致病性的?！飳τ谠隗w內已經繁殖多代的疫苗株不要簡樸地認為是無毒的。設備規(guī)定：對高壓滅菌器、離心機安全罩沒有規(guī)定；可有一型生物安全柜；不需要特殊的一級和二級屏障、除需要洗手池外，依靠原則的微生物操作即可獲得基本的防護水平。個人防護：穿工作服；戴防護眼鏡；手部皮膚破損或皮疹時應戴手套。二級生物安全防護水平（BSL-2）：應用最多、最普遍、易建易通過、風險小，使用方便、節(jié)省、訓練隊伍，可應急★合用于操作我國的第三類（少量二類）危害的致病微生物?！镞m合于從未知病原的人身上取血、體液和組織。★微生物操作必需在一級生物安全防護水平的基礎上，增加生物安全柜、高壓滅菌器等。設備規(guī)定：生物安全柜（II級A1型或B1型）-應安裝在實驗室在氣流流動小，人員走動少，離門和中央空調送風口較遠的地方；生物安全柜的周邊應有一定的空間，與墻壁最少保持30cm的距離，便于清潔環(huán)境衛(wèi)生。高壓滅菌器（臺式/臺式不排氣）-放在BSL-2實驗室內或門外；不需要離心機安全罩。洗眼器-應根據實驗室的實驗活動內容，擬定與否需要安裝洗眼器。如果需要洗眼器，則應安裝在BSL－2實驗室內靠近出口的地方應急噴淋裝置-必要時安裝，在使用中可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗時間最少需要20分鐘。個人防護：符合BSL－1的規(guī)定；穿工作服或罩衫，離開實驗室時，應脫下工作服，留在實驗室內，工作服應先消毒，后洗滌；當手可能接觸感染材料、污染表面或設備時應戴手套，不應戴著手套離開實驗室；當微生物操作不可能在生物安全柜內進行，而必須采用外部操作時，為避免感染性材料濺出或霧化危害，必須使用面部保護裝置。三級生物安全防護水平（BSL-3）：特殊規(guī)定-3區(qū)2緩（清潔區(qū)、潛在半污染區(qū)、污染區(qū)）★合用于操作我國第二類（個別第一類）病原微生物?！锶繉嶒炇也僮鲬谏锇踩窕蚱渌荛]容器中操作，如氣密型氣溶膠發(fā)生柜。二級屏障涉及實驗室的控制入口和為減小感染性氣溶膠從實驗室釋放的特殊通風系統。個人防護：三級防護原則；防護效果逐級升高。四級生物安全防護水平（BSL-4）：★合用于操作我國第一類病原微生物。另外，與四級生物安全防護水平的微生物含有相近的或一致的抗原關系的微生物也應當在該防護水平進行研究；★我國尚未發(fā)現或已經滅絕的微生物；★III級生物安全柜或全身正壓防護服能夠把實驗室工作人員與氣溶膠化的感染性材料完全隔離開；★普通是獨立建筑物或含有復雜的、特殊的通風系統和避免活的微生物釋放到環(huán)境中的污物解決系統與其它建筑完全隔離。能夠造成實驗室生物危害的重要因素：★氣溶膠的形成；★解決大容量和／或高濃度微生物；★人員或設備過多；★嚙齒動物和節(jié)肢動物大量孳生；★未經允許人員進入實驗室；★工作流程中使用某些特殊的樣品和試劑一級防護著裝原則：工作帽；16層紗布口罩；連體防護服/連體工作服；工作鞋；乳膠手套。合用范疇：BSL-1/BSL-2。二級防護著裝原則：N95口罩；護目鏡；二層防護服；一次性防護帽；外層一次性防水隔離衣；二層乳膠手套；長筒襪和防護鞋加鞋套。合用范疇：BSL-3實驗室；發(fā)熱門診醫(yī)護人員；醫(yī)院檢查和接觸樣品的人員；傳染病人和尸體護送人員；污物解決人；實驗室維修人。三級防護著裝原則：在二級的基礎上加上有效的防護面罩和正壓頭盔或正壓服。使用范疇：BSL-4和ABSL-4操作；SARS病人的氣管切開、氣管插管、吸痰和尸體解剖等。超凈臺：超凈臺保護樣品不受污染，合用于普通實驗室或1級生物安全水平中對人員和環(huán)境無保護規(guī)定的實驗。生物安全柜：全部生物學污染的管道均為負壓狀態(tài)或有負壓的管道通風系統包圍。放置-遠離門窗，與墻壁有30cm的間隙；預留出空間連接管道；外界排氣口要比樓頂高3米；BSC-1：可保護操作人員、環(huán)境；BSC-2：A1型-可保護樣品、操作人員、環(huán)境；合用于生物安全1/2/3級的樣品，規(guī)定樣品沒有揮發(fā)性有毒化學物質及揮發(fā)性放射核素；A2型-可保護樣品、操作人員、環(huán)境；合用于生物安全1、2、3級的樣品，允許樣品有微量揮發(fā)性有毒化學物質及痕量的揮發(fā)性放射核素；B2型-可保護樣品、操作人員、環(huán)境；可用于生物安全1/2/3級的樣品，如病原微生物，以及在這些微生物研究中用到的揮發(fā)性有毒化學品及放射性核素；BSC-3:帶袖套式。高壓蒸汽滅菌器：通過高壓及飽和蒸汽高熱釋放的潛熱滅菌，合用于耐高溫、高壓和潮濕的物品。下排式；預真空式-抽出冷空氣形成負壓，再輸入蒸汽使蒸汽透入物品；蒸汽壓力可達105kpa,溫度可達132℃；脈動真空（雙扉）-邊加熱邊重復抽真空。個人防護裝備：是指用于避免工作人員受到物理、化學和生物等有害因子傷害的器材和用品。（不得佩戴個人防護裝備走出實驗室）眼睛：安全鏡-護目鏡-進行可能發(fā)生化學和生物污染物質濺出的實驗頭面部及呼吸道：口罩-N95面罩-進行潛在爆炸和使用混合強腐蝕性和強酸溶液防毒面具-當實驗室操作不能安全有效將氣溶膠限定在一定范疇時使用軀體：實驗服；隔離衣手/足：手套；鞋套-BSL-2應堅持使用耳：聽力保護器

；基因工程生物安全管理目的：健全基因工程生物安全管理法規(guī)、機構加強安全管理的技術保障提高研究者、開發(fā)者、消費者安全意識強化監(jiān)管和責任追究基因工程生物安全工作涉及安全性的研究、評價、管理和交流等，其中安全性評價是安全管理的基礎和核心，其重要目的是從技術上分析生物技術及其產品的潛在危險，擬定安全等級，制訂防備方法，避免潛在危害。***安全評價原則和內容：*評定內容：-影響因素：插入基因直接引發(fā)的危害；與受體/宿主有關的危害；現有病原體性狀變化的危害；-基因原材料的安全性；-操作對受體生物的安全性影響；-受體生物的安全等級；-基因工程體（基因工程產品）的安全等級——擬定根據：受體生物安全等級和基因操作對受體生物安全性的影響；定級原則：受體生物的安全等級原則；安全等級I級：未曾發(fā)生過不利影響II級：低度危險，有方法完全可避III級：中度危險，有方法基本可避IV級：高度危險，無方法控制危害-轉基因生物釋放后的安全性；-安全性綜合評價。安全評定環(huán)節(jié)：擬定受體的安全等級操作對受體生物的安全性影響擬定基因工程體（基因工程產品）的安全等級轉基因生物釋放后的安全性（擬定接受環(huán)境對安全的影響）擬定安全方法的有效性安全性綜合評價*原則：實質等同性原則預先防備性原則個案評定原則逐步評定原則風險效益平衡熟悉性原則基因工程：又稱基因拼接技術或DNA重組技術，根據特定目的，運用多種技術手段，把一種生物的特定目的基因DNA片段，導入到另一生物體基因組中，進行基因重組，定向改造該生物的遺傳性狀。轉基因生物安全的三個屬性：①基因工程體是活的：基因可漂移；②轉基因安全是潛在的：可防止；③基因工程體的影響是不可逆的：不易解除。轉基因生物安全問題評定四項原則：科學原則；個案原則；比較分析原則；逐步完善原則基因工程實驗室的潛在危害：物理性、化學性、生物性生物性危害：①基因供體、載體、受體、繁殖體以及基因改造體含有或可能含有致病性、致癌性、抗藥性、轉移性和生態(tài)學效應，如有操作不當和防護漏洞，可能會造成人員感染和環(huán)境污染；②插入基因所引發(fā)的直接危害：毒素、激素、細胞因子、致瘤基因序列、抗生素耐藥性、毒力因子或增強子、變態(tài)反映原、基因體現調節(jié)因子；③與受體或宿主有關危害：宿主的易感性、宿主菌種的致病性、宿主范疇的變化、接受免疫狀況、暴露后果、現有病原體性狀的變化；④GMO對社會和生態(tài)安全的潛在危害：轉基因農作物造成基因釋放和飄逸、轉基因食品可能含有潛在的毒性、基因改造微生物含有潛在的致病性。

氣溶膠種類：飛沫核氣溶膠，粉塵氣溶膠；粒徑：粒徑>100μm的飛沫沉降很快；粒徑<50μm的飛沫在0.4s內就擴散開了；粒徑>5μm的飛沫核能被呼吸道粘膜捕獲；粒徑<5μm的飛沫核易被人吸入達成肺泡。BSL-1/2實驗室安全操作規(guī)范：進入制度：未經允許，任何人不得進入實驗室和動物實驗室；BSL-2門上生物危害標志；實驗室的門保持關閉；與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。防護規(guī)定：實驗室工作時，需著工作服或防護服；嚴禁穿實驗防護服離開工作區(qū)域；不得在實驗室內穿露腳趾的鞋；日常服裝不得和防護服放在同一柜子內；接觸感染性的材料時，應戴上適宜的手套，手套用完后，應先消毒再摘除；戴安全眼鏡、面罩（面具）或其它防護設備；離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手；嚴禁在實驗室進食、飲水、吸煙、化妝和解決隱形眼鏡。有關操作的指導原則：嚴禁用口吸移液管，嚴禁舔標簽；全部操作盡量減少氣溶膠；制訂解決溢出物的操作程序；污染的液體在排放到生活污水管道以前必須去除污染；沒有污染的文獻紙張，才干帶出實驗室。實驗室工作區(qū)管理原則：保持清潔整潔；結束后應去除工作臺面的污染；全部受到污染的材料，必須先去除污染；感染性材料的包裝和運輸應遵照有關規(guī)定；如果窗戶能夠打開則應安裝紗窗。生物安全柜使用原則：工作臺擺放，按照左凈右臟；生物安全柜內感染性材料溢灑的解決：少量-用吸取紙巾立刻解決，用浸滿消毒液的毛巾或紗布對生物安全柜工作臺面、后壁、側壁、觀察窗進行擦洗，工作面消毒后應更換手套。大量-液體會通過生物安全柜前面或背面的格柵流到下面去，在確保生物安全柜的排水閥被關閉后，可將消毒液倒在工作臺面上，使液體通過格柵流到排水盤上，全部接觸溢出物品的材料都要進行消毒和/或高壓滅菌解決。儀器有關危險：皮下注射針頭-意外接種；產憤怒溶膠或感染性物質溢出；離心機-產憤怒溶膠、濺出和管子破裂；超速離心機-管子破裂，機器故障，產憤怒溶膠，操作失誤；高速攪拌器，組織勻漿器-飛沫、滲漏和容器破裂；超聲波破碎機、超聲波清潔器-產憤怒溶膠、聽力受損、皮炎；凍干機（冷凍干燥機）-產憤怒溶膠、直接接觸污染；水浴-微生物生長，疊氮化鈉和某些金屬形成爆炸復合物；干燥器-爆裂、瓶子碎片和感染性物質飛出；培養(yǎng)物攪拌器，混合器，攪拌器-產憤怒溶膠、噴濺和溢出。離心機的使用：放到適宜的位置和高度；離心管最佳使用塑料制品；注意轉頭蓋與轉頭型號與否匹配；空離心桶配平時應當用蒸餾水或70％乙醇，不使用鹽水和次氯酸鹽溶液；離心管內液面水平距管口應留出一定空隙；檢查離心杯內表面有無污物,轉頭有無腐蝕點、裂縫；離心桶、轉頭和離心機腔用后應消毒；對于高致病性病原微生物要警惕產生的氣溶膠風險（在使用大型離心機應加裝負壓罩，通過過濾系統排出/在使用微型離心機時，可在生物安全柜內操作/如不能在安全柜內離心也無負壓罩，則必須將密封的轉頭在安全柜內裝載、平衡、密封和打開）；全部的離心管必須帶蓋密封，盡能夠在生物安全柜內打開蓋子。攪拌器、振蕩器、混勻器和超聲波破碎儀的使用：管子、蓋子、杯子或瓶子都應保持完好；在混勻、震蕩和超聲波破碎的過程中，器皿內的壓力會增大，故最佳使用塑料的；在生物安全柜里操作；在操作結束后，應在生物安全柜里啟動容器；使用超聲波震碎儀時，應有耳部聽力保護裝置。研磨器的使用：使用玻璃研磨器時，應戴上手套，手里墊上紗布后操作，建議使用塑料研磨器；組織研磨時，應在生物安全柜內操作。吸管和移液器的使用：應使用機械移液裝置，吸管都應當有棉塞，沿管壁加入液體，盡量靠近液面，使用由濾膜的槍頭，避免吹打；被污染的吸管浸沒在消毒劑中，并浸泡一定時間；工作臺表面放置一塊吸取紗布；嚴禁使用注射器移液。感染性材料的操作與防護規(guī)范：標本：容器-最佳采用塑料，要有蓋子或塞子，容器貼上標簽，表格或闡明不要綁在容器外，應單獨放在防水袋。實驗室內運輸-用金屬或塑料材質的二層容器包裝；第二層容器中有標本容器支架；二層容器耐高壓或抗化學消毒劑腐蝕接受-大量標本應在專用的房間或區(qū)域內接受（不能在BSL-1接受）；操作人員床防護服和戴口罩、面/眼罩和手套；根據病原微生物或標本的級別在對應的實驗室生物安全柜打開。包裝打開-備有消毒劑；先檢查外觀、標簽與否完整，送檢報告單和內容物與否相符，登記具體的報告單并處置辦法；接受標本應由2人進行。血清-分離：戴手套，防護眼鏡；吸管使用后浸在消毒液里，浸泡足夠時間；血凝塊的廢棄標本管，加蓋后放到防滲漏的容器中，以備高壓或焚燒。*消毒：通過物理或化學的手段去除微生物（不一定殺滅芽孢）。*滅菌：殺滅和/或去除全部微生物及其芽孢的過程。*清潔：指去除污垢、有機物和污漬。*消毒與滅菌的辦法：①化學消毒滅菌：液體化學試劑殺滅微生物繁殖體或芽孢，對象-物體表面、空氣和污染物等；方式-擦洗、熏蒸和浸泡等?？咕鷦?克制生長和繁殖的制劑；消毒劑-殺滅微生物的化學品或滑雪混合物，不一定殺死芽孢，慣用于非生命體表面；化學殺菌劑-殺滅微生物的化學品或化學混合物；滅菌劑-能夠殺滅微生物的化學品或化學混合物。消毒劑種類：高效（含氯、過氧乙酸、戊二醛）-殺滅全部微生物，除大量細菌芽孢；中效（甲醛、酒精）-殺滅全部微生物，除了細菌芽孢；低效（季銨鹽）-殺滅多數細菌繁殖體和脂膜（親脂性）或中檔大小的病毒；最低有效濃度:能殺滅微生物活性。-表面消毒劑：氯及氯化物（廣譜、便宜、速效）-殺滅細菌、真菌、結核桿菌、病毒及芽孢；酒精-不能殺滅芽孢，殺菌濃度為70-75%，不能消毒橡膠或塑料管材料的儀器；戊二醛-對細菌繁殖體、芽孢、真菌、病毒都有殺滅作用；過氧乙酸-低濃度下快速殺滅全部微生物，分解物無害，但腐蝕性大；季銨鹽類-殺滅真菌、細菌、親脂類病毒，不能殺滅芽孢、結核分枝桿菌及病毒。-空氣熏蒸消毒劑：甲醛-20℃殺滅全部微生物及芽孢，除朊病毒，用于封閉空間。微生物對外界抵抗力：親脂類病毒或中檔大小的病毒（HSV,CMV,RSV,HIV,HBV等）＜細菌繁殖體（金葡、綠膿）＜真菌（念珠菌、曲霉屬）＜非脂類或小病毒（脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒）＜分枝桿菌（TB）＜細菌芽孢朊粒：需壓蒸汽滅菌134℃、≥2h，才干使其失去傳染性，對輻射、紫外及慣用消毒劑（甲醛、乙醇等）有很強的抗性。②物理消毒滅菌：紫外、高壓蒸汽滅菌、焚燒和HEPA過濾除菌等。紫外-空氣、物體表面消毒；殺菌作用最強波段250nm～270nm；室內安裝紫外燈平均每m3不少于1.5W，照射時間不少于30min；加熱-最慣用的去除病原體污染的物理手段；“干熱”-沒有腐蝕性，可對耐受160℃或更高溫度2~4h的物品滅菌，燃燒或焚化也是干熱；“濕熱”-高壓蒸汽滅菌最有效，但是注意高沸不能殺滅全部微生物或病原體。預真空式高壓滅菌器：氣體通過裝有HEPA過濾器的排氣閥排出；滅菌結束時，蒸汽自動排出；可在134℃下進行；對多孔性物品的滅菌很抱負，但不能用于液體高壓滅菌。重力置換式高壓滅菌器：蒸汽在壓力作用下進入滅菌器，由上而下置換較重的空氣并通過滅菌器的排氣閥（裝有HEPA過濾器）排出。燃料加熱壓力鍋式高壓滅菌器：從頂部裝載物品，燃氣、電力或其它燃料加熱。水蒸汽由下而上置換空氣并經排氣孔排出。全部空氣排出后，關閉排氣孔的閥門，緩慢加熱使壓力和溫度上升到安全閥預置的水平。此時記為滅菌開始時間，滅菌結束后停止加熱，讓溫度下降到80℃下列再打開蓋子。脈動真空蒸汽內循環(huán)高壓滅菌器：運用真空控制系統、通過壓力蒸汽循環(huán)，以飽和蒸汽替代殘存空氣，達成滅菌；避免了因內部冷空氣排除不徹底而存在的滅菌效果不穩(wěn)定等問題；滅菌后可真空加溫熱烘干，達成干燥滅菌物品。高壓滅菌質量確保的生物指標：干熱-慣用滅菌時間和溫度是170℃,60min；160℃,120min;150℃,150min。應用枯草芽孢桿菌（106）監(jiān)測滅菌效果。高壓蒸汽滅菌-慣用嗜熱芽孢桿菌（105）監(jiān)測滅菌效果。高壓蒸汽滅菌器使用注意事項：1.由受過良好培訓的人員操作和日常維護；2.由有資質人員定時檢查滅菌器柜腔、門的密封性以及全部的儀表和控制器。；3.滅菌器柜腔裝載要松散；4.滅菌器應含有互鎖安全裝置，避免門被打開；5.當對液體高壓滅菌時，應采用慢排式設立；6.操作者打開門時應戴適宜的手套和面罩；7.高壓滅菌效果常規(guī)監(jiān)測中，生物批示劑或熱電偶計應置于每件高壓滅菌物品的中心；8.滅菌器的排水過濾器應當每天拆下清洗；9.保持高壓滅菌器安全閥的暢通。焚燒-抱負的是一級焚燒室的溫度最少應達成800℃，二級焚燒室的溫度最少應達成1000℃?！鲗嶒炇一顒拥纳镂：υu定是實驗室生物安全工作的核心內容。實驗室活動的危害評定：是指對某一種特定的操作程序或實驗或微生物種類的危險度進行評定。（最有用的工具之一就是列出微生物的危險度等級）《實驗室生物安全通用條例》（GB19489-）-當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，應進行危害程度評定。評定因考慮（但不限于）下列內容：生物因子的種類（未知的、已知的、基因修飾或未知傳染性的生物材料）。-實驗室風險評定和風險控制活動的復雜程度決定于實驗室所存在危險的特性，合用時，實驗室不一定需要復雜的風險評定和風險控制活動。病毒：-第一類（需要BSL-4條件，20種）：痘病毒（天花病毒等3種），絲狀病毒（埃博拉病毒等3種），黃病毒（6），沙粒病毒（6），副粘病毒（2）；-第二類（需要BSL-3條件，3種）：黃病毒（3），布尼亞病毒（1），披膜病毒（3），皰疹病毒（1）；細菌：（危險度最高等級是第二類）-第二類（需BSL-3條件，9種）：炭疽芽孢桿菌、布魯氏菌屬、鼻疽伯克菌、伯氏考克斯體、土拉熱弗朗西斯菌、牛型分枝桿菌、結核分枝桿菌、立克次體屬、鼠疫耶爾森氏菌；真菌：（需在BSL-3條件下，9種）粗球孢子菌、馬皮疽組織胞漿菌、莢膜組織胞漿菌、巴西副球孢子菌。有關闡明：★國外新發(fā)現（我國尚未發(fā)現）傳染病病原體的操作級別完全按照國外同類原則?！锓欠ǘ▊魅静〔≡⑸锏牟僮骷墑e重要參考國際有關原則。★本規(guī)定中所涉及病毒的操作級別重要指野生型病原微生物，重組體另加闡明。根據國內狀況，有些病原體防護原則低于/高于國外：有關闡明：-病毒培養(yǎng)：是指病毒的分離、培養(yǎng)、滴定、中和實驗、活病毒及其蛋白純化、病毒凍干以及生產活病毒的重組實驗等操作。運用活病毒或其感染細胞（或細胞提取物），不經滅活進行的生化分析、血清學檢測、免疫學檢測等操作視同病毒培養(yǎng)。使用病毒培養(yǎng)物提取核酸，裂解或滅活劑加入必須在與病毒培養(yǎng)等同級別的實驗室和防護條件下進行，裂解劑或滅活劑加入后可比照未經培養(yǎng)的感染性材料的防護等級進行操作。-動物感染實驗：是指或病原微生物感染動物的實驗。-未經培養(yǎng)的感染性材料的操作：指未經培養(yǎng)的感染性材料在采用可靠的方法滅活邁進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸檢測、生化分析等操作。-滅活材料的操作：指感染性材料或活病毒在采用可靠的辦法滅活后進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸檢測、生化分析、分子生物學實驗等不含致病性活病毒的操作。-無感染性材料的操作：指針對確認無感染性材料的多種操作，涉及但不限于無感染性的病毒DNA或cDNA操作。△脊髓灰質炎病毒：對于疫苗株按3類病原微生物的防護規(guī)定進行操作，病毒培養(yǎng)的防護條件為BSL-2，動物感染為ABSL-2，未經培養(yǎng)的感染性材料的操作在BSL-2，滅活和無感染性的材料操作為BSL-1。疫苗衍生毒株（VDPV）病毒培養(yǎng)的防護條件為BSL-2，動物感染為ABSL-3，未經培養(yǎng)的感染性材料的操作在BSL-2，滅活和無感染性材料的操作均為BSL-1。△未知樣本：在確保安全前提下，對臨床和現場的未知樣本檢測操作可在BSL-2或以上防護級別的實驗室進行?！魑戳谐龅牟≡⑸铮河筛鲉挝簧锇踩瘑T會負責評定危害程度?！魇褂萌祟惒≡⑸锏闹亟M體：嚴禁2個不同病原體之間進行完整基因組的重組；對于人類致病的病毒，如存在疫苗株，只允許用疫苗株為外源基因體現載體；對于普通狀況下即含有復制能力的重組活病毒，操作防護條件不低于母本病毒；對于病毒作為體現載體，其防護水平總體上應根據其木本病毒的危害等級及防護規(guī)定進行操作，同時高致病性病毒基因重組入低致病但含有復制能力的病毒時，應按高致病的對應防護等級。△生物制品用菌毒種：△有關細菌、真菌實驗活動的闡明：大量活菌操作-“大量”是指病原菌的體積或濃度，大大超出了常規(guī)檢測所需要的量。如大規(guī)模發(fā)酵、抗原和疫苗生產、病原菌鑒定等。樣本檢測-涉及樣本的分離純化、藥品敏感性實驗、生化鑒定、免疫學實驗、PCR核酸提取、涂片、顯微鏡觀察等初