化妝品中他克莫司和吡美莫司的測定

化妝品中他克莫司和吡美莫司的測定（BJH202301）1范圍本方法規(guī)定了化妝品中他克莫司和吡美莫司的測定方法。本方法適用于膏霜乳類、液體（水、油）類化妝品中他克莫司和吡美莫司的定性和定量測定。2方法提要樣品經(jīng)甲醇超聲提取后，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測。根據(jù)保留時間和特征離子對豐度比定性，待測組分相對應(yīng)離子峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。3試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法中所用試劑均為分析純及以上規(guī)格，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1甲醇，色譜純。3.2乙酸銨，色譜純。3.3乙酸，色譜純。3.4含0.1%乙酸-5mmol/L乙酸銨的水溶液：準(zhǔn)確稱取0.3854g乙酸銨（3.2），加入1.0mL乙酸（3.3），用水溶解并稀釋至1000mL，混勻。3.5含0.1%乙酸-5mmol/L乙酸銨的甲醇溶液：準(zhǔn)確稱取0.3854g乙酸銨（3.2），加入1.0mL乙酸（3.3），用甲醇（3.1）溶解并稀釋至1000mL，混勻。3.6標(biāo)準(zhǔn)品：他克莫司、吡美莫司的標(biāo)準(zhǔn)品純度均≥95.0%，標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見附錄A中的表A.1。3.7標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取他克莫司、吡美莫司標(biāo)準(zhǔn)品各10mg（精確到0.00001g），分別置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，混勻。制成標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的質(zhì)量濃度均為1000mg/L。置于-18℃冰箱中保存。3.8混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確移取他克莫司、吡美莫司標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.7）0.1mL置于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋至刻度，搖勻。制成濃度為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。置于-18℃冰箱中保存。4儀器與設(shè)備4.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。4.3超聲波清洗器。4.4渦旋混合儀。4.5高速離心機。5試樣制備與保存樣品應(yīng)按照標(biāo)簽標(biāo)示的貯存條件進行保存。取樣前，應(yīng)檢查封口的完整性，觀察樣品的性狀和特征，并使樣品混勻。打開包裝后，應(yīng)盡可能快地取出所要測定部分進行分析，取樣后，應(yīng)將樣品進行密封保存。6分析步驟6.1篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.8）適量，用甲醇（3.1）進行稀釋，配制成他克莫司、吡美莫司濃度為1.0μg/L的篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。6.2空白基質(zhì)提取液稱取空白試樣0.2g（精確到0.0001g），置于10mL具塞比色管中，自“加入8mL甲醇”起與樣品同法處理（6.5），作為空白基質(zhì)提取液。6.3基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.8）0.1mL置于10mL容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（6.2）稀釋至刻度，搖勻，制成他克莫司、吡美莫司濃度為100μg/L的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。6.4基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別精密量取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（6.3）適量，用空白基質(zhì)提取液（6.2）配制濃度為0.5、1.0、2.0、5.0、20、50μg/L的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液?；|(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。6.5樣品處理稱取混合均勻的試樣約0.2g（精確至0.0001g）于10mL具塞比色管中，加入8mL甲醇（3.1），于渦旋混合儀上振蕩30s至試樣與提取溶劑混合均勻。超聲提取15min，靜置至室溫，然后用甲醇（3.1）定容至刻度，搖勻，以4000r/min離心5min，上清液經(jīng)0.22μm濾膜濾過，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實際濃度進行適當(dāng)稀釋）。6.6儀器參考條件6.6.1色譜條件色譜柱：C18柱（2.1mm×100mm，1.7μm），或等效色譜柱；流動相：A為含0.1%乙酸-5mmol/L乙酸銨的水溶液，B為含0.1%乙酸-5mmol/L乙酸銨的甲醇溶液。梯度洗脫程序見表1。流速：0.3mL/min；柱溫：45℃；進樣量：2μL。表1梯度洗脫程序時間（min）流動相A(%)流動相B(%)0.0070300.5070303.0030708.0029811.0029811.30703015.0070306.6.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測模式：正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表2。表2他克莫司、吡美莫司監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定組分名稱母離子（m/z）子離子（m/z）CE（eV）他克莫司821.6768.6*20576.427吡美莫司827.6774.6*23564.427“*”為推薦的定量離子。注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。6.7定性判定取供試品溶液（6.5）與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測成分的特征離子峰保留時間與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）對應(yīng)的保留時間一致，且選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度的篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）的監(jiān)測離子對的相對豐度比的最大偏差不超過表3的規(guī)定，則可以判定樣品中存在對應(yīng)的組分。表3定性確證時相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度（k）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%允許最大偏差±20%±25%±30%±50%6.8定量測定取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（6.4）依次測定，以待測組分的系列濃度為橫坐標(biāo)，待測組分的峰面積為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。取供試品溶液（6.5）測定，將對應(yīng)的定量離子對色譜峰面積代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。按“7”項下公式，計算樣品中待測組分的含量。6.9平行試驗按以上步驟，對同一樣品進行平行實驗測定。6.10空白試驗除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進行。7結(jié)果計算結(jié)果按式（1）計算：式中：ω―樣品中他克莫司、吡美莫司的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，mg/kg；ρ―供試品溶液中他克莫司、吡美莫司的質(zhì)量濃度，μg/L；V―樣品定容體積，mL；m―樣品取樣量，g；D―稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。在相同條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8精密度與準(zhǔn)確度多家實驗室驗證回收率為80%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%（n=6）。9檢出限和定量限本方法中他克莫司、吡美莫司的檢出限、定量下限及取樣量為0.2g時的檢出濃度、最低定量濃度見表4。表4他克莫司、吡美莫司的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度組分名稱檢出限（ng）定量下限（ng）檢出濃度（mg/kg）最低定量濃度（mg/kg）他克莫司0.00040.0010.010.025吡美莫司0.00040.0010.010.02510圖譜圖1他克莫司標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖圖2吡美莫司標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖

附錄A他克莫司、吡美莫司的相關(guān)信息表A.1