苦瓜汁對(duì)四種細(xì)菌的抑菌活性研究

苦瓜汁對(duì)四種細(xì)菌的抑菌活性研究

杏仁是科黃瓜科的一種植物。因?yàn)樗鹬厥獾奈兜馈Ｋ脖环Q為洋甘菊、荔枝和糊狀草?？喙舷矞嘏潞?在我國(guó)南方栽培歷史悠久。其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,嫩果中含有豐富的礦物質(zhì)、氨基酸和多種維生素。近年來(lái)大量研究證明,苦瓜具有降血糖、抗癌、抗病毒等功效,已成為國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者的研究熱點(diǎn)。本文研究了苦瓜汁對(duì)四種常見(jiàn)細(xì)菌的抑菌活性及苦瓜汁抑菌活性的熱穩(wěn)定性,為苦瓜的深加工及其天然防腐劑的開(kāi)發(fā)和研制提供理論參考。1材料和方法1.1材料和實(shí)驗(yàn)設(shè)備鮮苦瓜市售;大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草桿菌(Bacillussabtilis)、沙門氏菌(Salmonella)均由實(shí)驗(yàn)室提供;牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。LX-C35L自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器合肥華泰醫(yī)療設(shè)備有限公司;SW-CJ-1F超凈工作臺(tái)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;pHS-25酸度計(jì)上海虹益儀器儀表有限公司;HW12電熱恒溫水浴鍋上海一恒科技有限公司;BL600A電子天平常熟雙杰測(cè)試儀器廠;HR1704攪拌機(jī)珠海經(jīng)濟(jì)特區(qū)飛利浦家庭電器有限公司;GZX-9070ME數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱上海博迅實(shí)業(yè)有限公司;LRH-250A生化培養(yǎng)箱廣東省醫(yī)療器械廠;LXJ-ⅡB離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1打漿機(jī)打漿將新鮮苦瓜切成小塊,加入35%的蒸餾水,放進(jìn)打漿機(jī)內(nèi)打漿。浸泡24h后,3500r/min離心15min,取上層淡綠色透明浸出汁,作為原液,放入冰箱低溫保存?zhèn)溆谩?.2.2活化次數(shù)及時(shí)間將所有供測(cè)試的菌種分別接種到試管斜面,37℃下活化24h,活化2~3次。將上述活化好的指示菌分別接種到滅菌好的液體肉湯培養(yǎng)基中,37℃恒溫培養(yǎng)7h,使其達(dá)到含菌量為106~108CFU/mL的菌懸液,備用。1.2.3抑菌圈直徑測(cè)定將滅菌的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到50℃左右,接入10%的含菌量為106~108CFU/mL的上述菌懸液,混勻。將混有指示菌的培養(yǎng)基15mL倒入培養(yǎng)皿內(nèi),每個(gè)培養(yǎng)皿中均勻放置三個(gè)牛津杯,加入苦瓜汁(空白組加入無(wú)菌水)。把平板放置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后,用尺子測(cè)量抑菌圈直徑。每種指示菌做三個(gè)平板,即9個(gè)重復(fù)。以上操作均在超凈工作臺(tái)中完成。1.2.4熱測(cè)試1.3結(jié)果不符合方差齊性應(yīng)用SPSS進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),如果不符合方差齊性則進(jìn)行秩和檢驗(yàn)。符合方差齊性者則進(jìn)行F檢驗(yàn),F檢驗(yàn)顯著則再用S-N-K法進(jìn)行兩兩比較。2結(jié)果與分析2.1s-n-k法測(cè)定培養(yǎng)模式對(duì)四種指示菌的抑菌圈平均直徑和生物測(cè)定結(jié)果通過(guò)測(cè)定苦瓜汁抑菌圈的直徑來(lái)評(píng)價(jià)其對(duì)四種指示菌的抑制狀況,結(jié)果如表1所示。對(duì)四種指示菌的抑菌圈大小做方差齊性檢驗(yàn),結(jié)果如表2所示。由表2可知,P=0.929,遠(yuǎn)大于0.05,可知抑菌圈大小分布滿足方差齊性,可以做方差分析,方差分析結(jié)果如表3所示。由P<0.001,可知苦瓜對(duì)四種菌體抑菌效果差異非常顯著,利用S-N-K法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比較,分析結(jié)果如表4所示?？喙现瓕?duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、枯草桿菌均能形成明顯的抑菌圈,四種指示菌形成的抑菌圈平均直徑分別為:9.93、9.00、10.00、9.36mm,說(shuō)明苦瓜汁對(duì)四種指示菌都具有明顯的抑制效果。通過(guò)方差分析可知,苦瓜汁對(duì)四種指示菌的抑制效果存在顯著區(qū)別。利用S-N-K法對(duì)四種指示菌進(jìn)行一對(duì)一比較分析,結(jié)果將四種菌分成了兩個(gè)亞組,金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌在一個(gè)亞組,組內(nèi)的P值為0.141,表明苦瓜汁對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用區(qū)別并不顯著;大腸桿菌和沙門氏菌在一個(gè)亞組,組內(nèi)的P值為0.763,表明苦瓜汁對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌抑制作用區(qū)別也不顯著。兩個(gè)亞組之間的P值大于0.05,表明苦瓜汁對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌這兩種革蘭氏陰性菌的抑制能力顯著區(qū)別于苦瓜汁對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌這兩種革蘭氏陽(yáng)性菌的抑菌能力。但是苦瓜汁對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抑制作用是否均大于對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的抑制作用,有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。2.2苦艾酒的穩(wěn)態(tài)研究2.2.1抑菌圈大小分布方差齊性分析將苦瓜汁分別于70℃和100℃下處理10min,做大腸桿菌的抗菌實(shí)驗(yàn),同時(shí)作未經(jīng)熱處理的對(duì)照,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示。對(duì)大腸桿菌的抑菌圈大小做方差齊性分析,結(jié)果如表6所示。由表6可知,P=0.521,遠(yuǎn)大于0.05,表明抑菌圈大小分布滿足方差齊性,可以做方差分析,方差分析結(jié)果如表7所示。結(jié)果表明,未經(jīng)熱處理、70℃加熱處理和100℃加熱處理后的苦瓜汁對(duì)大腸桿菌均能形成明顯的抑菌圈,其抑菌圈平均直徑分別為:9.67、9.67、9.5mm。方差分析所得P值為0.758,遠(yuǎn)大于0.05,表明加熱溫度對(duì)苦瓜汁的大腸桿菌抑菌能力沒(méi)有顯著差別。2.2.2熱處理對(duì)苦瓜汁抑菌圈的影響將苦瓜汁于100℃下分別處理10、20、30、40min,做大腸桿菌的抗菌實(shí)驗(yàn),同時(shí)作未經(jīng)熱處理的對(duì)照,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表8所示。對(duì)大腸桿菌的抑菌圈大小做方差齊性分析,結(jié)果如表9所示。由表9可知,P=0.837,遠(yuǎn)大于0.05,表明抑菌圈大小分布滿足方差齊性,可以做方差分析,方差分析結(jié)果如表10所示。結(jié)果表明,100℃下加熱處理10、20、30、40min和未經(jīng)熱處理的苦瓜汁均能對(duì)大腸桿菌形成明顯的抑菌圈,其抑菌圈直徑分別為9.5、9.7、9.9、9.7mm。方差分析所得P值為0.855,遠(yuǎn)大于0.05,表明熱處理時(shí)間對(duì)苦瓜汁大腸桿菌的抑菌能力沒(méi)有顯著差別。從2.2.1和2.2.2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,苦瓜汁抗菌活性在100℃以內(nèi)具有較好的熱穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果和宋宇等人報(bào)道的在100℃以內(nèi),溫度對(duì)苦瓜汁抑菌效果影響較明顯,溫度高于30℃時(shí)抑菌效果有減弱的趨勢(shì)相反,但是和張雁報(bào)道的當(dāng)加熱溫度不超過(guò)100℃,苦瓜水提物具有良好抑菌穩(wěn)定性相吻合。3膜法菌種的抑菌效果3.1苦瓜汁對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和枯草芽孢桿菌均具有較好的抑菌效果。3.2苦瓜汁對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌這兩種革蘭氏陰性菌的抑