動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)劉

2.2動物細(xì)胞工程專題2細(xì)胞工程動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞工程常用技術(shù)其中動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)和1、動物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實施的原理是什么？

從動物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和繁殖。

原理是細(xì)胞增殖（有絲分裂）。一、動物細(xì)胞培養(yǎng)：一、動物細(xì)胞培養(yǎng)：1、概念動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。

注意關(guān)鍵詞:

細(xì)胞貼壁細(xì)胞的接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)閱讀課文44—46頁相關(guān)內(nèi)容細(xì)胞貼壁

懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞的接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制細(xì)胞的接觸抑制動物細(xì)胞生長特性細(xì)胞的接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。失去接觸抑制細(xì)胞的接觸抑制動物細(xì)胞生長特性癌細(xì)胞細(xì)胞的接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程分離組織（幼齡動物）分散細(xì)胞（胰蛋白酶）原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)分裝動物細(xì)胞培養(yǎng)過程細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)未改變2、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無限傳代細(xì)胞系單個細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變細(xì)胞貼壁細(xì)胞的接觸抑制剪碎思考討論：在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進(jìn)行處理？胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個細(xì)胞，使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸

。

有關(guān)概念:原代培養(yǎng)：指將要培養(yǎng)的動物細(xì)胞取出后,先用胰蛋白酶等使組織分散成單個細(xì)胞,然后配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，再將該懸浮液放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：

細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？多數(shù)組織細(xì)胞必須在固定的表面上生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變貼壁生長細(xì)胞分裂生長到相互接觸時就停止分裂增殖的現(xiàn)象叫接觸抑制

多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識，思考并討論以下問題：討論1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要提供哪些物質(zhì)2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境。3.動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（2）營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動物血清等。）（3）溫度和PH

36.5

+

0.5度,

7.2-7.4（4）氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目試一試思考：2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？4、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體4、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用（1）大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病

毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）（2）作為基因工程中的受體細(xì)胞（3）培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性（4）為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清動物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境比較項目植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖植物激素葡萄糖動物血清植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、培育無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白1.如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？2.傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？3.有些為何能一直傳下去？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展思考題4.人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)胞，因為10－50部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展思考題5.動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體既然動物體細(xì)胞核仍具有全能性，為什么不能直接利用動物體細(xì)胞培育動物體？

想一想利用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)動物細(xì)胞的全能性會隨著動物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能逐漸變?nèi)酢?/p>

怎樣才能使動物體細(xì)胞表現(xiàn)出全能性呢？卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞核移植技術(shù)二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物動物核移植是將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中,使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體?？寺游镉煤艘浦卜椒ǖ玫降膭游?、動物核移植：無性生殖2、為什么不是取供體細(xì)胞核進(jìn)行核移植操作，而是直接將供體細(xì)胞整個注入去核卵母細(xì)胞中？保證供核不被破壞，使所得個體的性狀更符合供體。想一想

1、受體細(xì)胞為什么選用卵母細(xì)胞？

卵母細(xì)胞體積大，易操作，而且含有促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的某種物質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì)。

2.體細(xì)胞核移植的過程供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞

卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛2、核移植過程P49討論：

為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？2.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？

培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10