第十四章 農藥、獸藥與霉菌毒素殘留量的測定

第十四章農藥、獸藥與霉菌毒素殘留量的測定主要內容食品中農藥殘留量的常規(guī)測定方法食品中農藥殘留的快速檢測方法食品中獸藥殘留檢測方法霉菌毒素殘留分析第一節(jié).食品中農藥殘留量的常規(guī)測定方法

一、概述：農藥殘留是指由于存留在農產品、或食品藥材等產品中的農藥及其降解代謝產物,還包括環(huán)境背景中存有的農藥污染物或持久性農藥的殘留物再次在產品中形成的殘留。一般來說,農藥殘留量是指農藥本體及其代謝物的殘留量的總和,表示單位為mg/kg。1.色譜技術1）薄層色譜法（TLC)2）紙色譜3）氣相色譜法（GC）4）高效液相色譜法（HPLC）5）色—質聯(lián)用技術2.電化學方法二、食品中有機氯農藥殘留量的測定一）氣相色譜法（GB5009.19-2003）操作方法（1）提取糧食：稱取樣品→石油醚提取→過濾到分液漏斗→定至約100ml

蔬菜：稱取樣品→搗碎→取勻漿→丙酮提取→過濾到分液漏斗→石油醚提取→加硫酸鈉溶液→分離→石油醚層過濾至分液漏斗→定至約100ml

肉類及動物組織：稱取絞碎樣品→加硫酸鈉研磨→加石油醚提取→濃縮至約100ml（2）凈化

3）測定①色譜條件電子捕獲檢測器（ECD）氣化室溫度：190℃（215℃）色譜柱溫度：160℃（195℃）檢測器溫度：165℃（225℃）載氣流速：60ml/min（90ml/min）色譜柱：固定液1.5%OV-17和2%QF-1，擔體白色硅藻土（80~100目），3~4mm×2m②標準曲線制備3）測定

③樣品測定

第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定一、有機磷農藥的結構與性質有機磷農藥是指在組成上含有磷的有機殺蟲劑、殺菌劑等。主要類型有：磷酸酯型，如久效磷、磷胺等；二硫代磷酸酯型，如馬拉硫磷、樂果、甲拌磷、亞胺硫磷等；硫酮磷酸酯型，如對硫磷、甲基對硫磷、內吸磷、殺螟松等；硫醇磷酸酯型，如氧化樂果、伏地松；磷酰胺型，如甲胺磷、乙酰甲胺磷；膦酸酯型，如敵百蟲、苯脯磷有機磷農藥種類很多，按毒性分為高毒（劇毒）、中毒、低毒三類；溶解性：多數(shù)難溶于水，可溶于有機溶劑水解性：在堿性介質中易水解氧化性：硫代磷酸酯類在溴、紫外線等作用下其中的S可被O取代。酶抑制活性：可抑制羧酸酯酶、膽堿酯酶的活性第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷類中有機磷農藥的多殘留測定方法本標準規(guī)定了水果、蔬菜、谷類中敵敵畏、速滅磷、久效磷、甲拌磷、巴胺磷、二嗪農、乙嘧硫磷、甲基嘧啶硫磷、甲基對硫磷、稻瘟凈、水胺硫磷、氧化喹硫磷、稻豐散、甲喹硫磷、克線磷、乙硫磷、樂果、喹硫磷、對硫磷、殺螟硫磷的殘留量分析方法。1.1原理樣品經提取、凈化后注入氣相色譜儀測定。含有機磷的樣品在富氫焰上燃燒，以HPO*碎片的形式，放射出波長526nm的特征光；這種光通過濾光片選擇后，由光電倍增管接收，轉換成電信號，經微電流放大器放大后被記錄下來。樣品的峰面積或峰高與標準品的峰面積或峰高進行比較定量。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷類中有機磷農藥的多殘留測定方法

1.2試劑、儀器1.3試樣的制備

取糧食樣品經粉碎機粉碎，過20目篩制成糧食試樣；取水果、蔬菜樣品洗凈，晾干，去掉非可食部分后制成待分析試樣。1.4分析步驟

1.4.1提取

水果、蔬菜稱取50.00g試樣，置于300mL燒杯中，加入50mL水和100mL丙酮(提取液總體積為150mL)，用組織搗碎機提取1~2min。勻漿液經鋪有二層濾紙和約10gCelite545的布氏漏斗減壓抽濾。從濾液中分取100mL移至500mL分液漏斗中。

谷物稱取25.00g試樣，置于300mL燒杯中，加入50mL水和100mL丙酮，以下步驟同上。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷類中有機磷農藥的多殘留測定方法

1.4分析步驟

1.4.2凈化

向濾液中加入10~15g氯化鈉使溶液處于飽和狀態(tài)。猛烈振搖2~3min，靜置10min，使丙酮從水相中鹽析出來，水相用50mL二氯甲烷振搖2min，再靜置分層。

將丙酮與二氯甲烷提取液合并，經裝有20~30g無水硫酸鈉的玻璃漏斗脫水濾入250mL圓底燒瓶中，再以約40mL二氯甲烷分數(shù)次洗滌容器和無水硫酸鈉。洗滌液也并入燒瓶中，用旋轉蒸發(fā)器濃縮至約2mL，濃縮液定量轉移至5~25mL容量瓶中，加二氯甲烷定容至刻度。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷類中有機磷農藥的多殘留測定方法

1.4分析步驟

1.4.3氣相色譜測定

色譜參考條件

色譜柱:a.玻璃柱2.6m×3mm(i.d)，填裝涂有4.5%(m/m)DC200＋2.5%(m/m)OV-17的ChromosorbW/AW/DMCS(80~100目)的擔體。

b.玻璃柱2.6m×3mm(i.d)，填裝涂有1.5%(m/m)DCOE-1的ChromosorbW/AWDMCS(60~80目)。

氣體速度氮氣(N2)50mL/min、氫氣(H2)100mL/min、空氣50mL/min。

溫度：柱箱240℃、汽化室260℃、檢測器270℃。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷類中有機磷農藥的多殘留測定方法

1.4分析步驟

1.4.4測定吸取2~5μL混合標準液及樣品凈化液注入色譜儀中，以保留時間定性。以試樣的峰高或峰面積與標準比較定量。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）2.糧、菜、油中有機磷農藥殘留量測定方法本標準規(guī)定了糧、菜、油等食品中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷、甲拌磷、稻瘟凈、殺螟硫磷、倍硫磷、蟲螨磷的測定方法。

原理、試劑、儀器同1.水果、蔬菜、谷類中有機磷農藥的多殘留測定方法分析步驟

2.1提取與凈化

蔬菜：將蔬菜切碎混勻。稱取10.00g混勻的樣品，置于250mL具塞錐形瓶中，加30～100g無水硫酸鈉(根據蔬菜含水量)脫水，加0.2~0.8g活性炭(根據蔬菜色素含量)脫色。加70mL二氯甲烷，在振蕩器上振搖0.5h，經濾紙過濾。量取35mL濾液，在通風柜中室溫下自然揮至近干，用二氯甲烷少量多次研洗殘渣，移入10mL(或5mL)具塞刻度試管中，并定容至2.0mL，備用。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）2.糧、菜、油中有機磷農藥殘留量測定方法分析步驟

2.1提取與凈化稻谷：脫殼、磨粉、過20目篩、混勻。稱取10.00g，置于具塞錐形瓶中，加入0.5g中性氧化鋁及20mL二氯甲烷，振搖0.5h，過濾，濾液直接進樣。如農藥殘留量過低，則加30mL二氯甲烷，振搖過濾，量取15mL濾液濃縮并定容至2.0mL進樣。小麥、玉米：將樣品磨碎過20目篩、混勻。稱取10.00g置于具塞錐形瓶中，加入0.5g中性氧化鋁、0.2g活性炭及20mL二氯甲烷，振搖0.5h，過濾，濾液直接進樣。如農藥殘留量過低，則加30mL二氯甲烷，振搖過濾，量取15mL濾液濃縮，并定容至2mL進樣。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）2.糧、菜、油中有機磷農藥殘留量測定方法分析步驟

2.1提取與凈化植物油第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）2.糧、菜、油中有機磷農藥殘留量測定方法分析步驟2.2氣相色譜測定

色譜柱：玻璃柱，內徑3mm，長1.5～2.0m。

分離測定敵敵畏、樂果、馬拉硫磷和對硫磷的色譜柱。a.內裝涂以2.5%(m/m)SE-30和3%(m/m)QF-混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。b.內裝涂以1.5%(m/m)OV-7和2%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。c.或內裝涂以2%(m/m)OV-101和2%(m/m)QF-混合固定液的60～80目ChromosorbWAWDMCS。

分離測定甲拌磷、蟲螨磷、稻瘟凈、倍硫磷和殺螟硫磷的色譜柱。a.內裝涂以3%(m/m)PE-GA和5%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。b.內裝涂以2%(m/m)NPGA和3%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）2.糧、菜、油中有機磷農藥殘留量測定方法分析步驟2.2氣相色譜測定

氣流速度：載氣為氮氣80mL/min；空氣50mL/min；氫氣180mL/min(氮氣、空氣和氫氣之比按各儀器型號不同選擇各自的最佳比例條件)。

溫度：進樣口為220℃；檢測器為240℃；柱溫為180℃，(測定敵敵畏為130℃)第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）2.糧、菜、油中有機磷農藥殘留量測定方法分析步驟2.2氣相色譜測定將混合農藥標準使用液2~5μL分別注入氣相色譜儀中，可測得不同濃度有機磷標準溶液的峰高。分別繪制有機磷標準曲線。同時取樣品溶液2~5μL注入氣相色譜儀中，測得的峰高從標準曲線圖中查出相應的含量。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）3.肉類、魚類中有機磷農藥殘留量的測定方法

本標準適用于肉類、魚類中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷農藥的殘留分析。敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷最低檢出量為0.6，0.3，0.3，0.15ng，當進樣量相當于0.002g時，最低檢出濃度分別為0.03，0.015，0.015，0.008mg/kg。

原理、試劑、儀器同前。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）3.肉類、魚類中有機磷農藥殘留量的測定方法分析步驟

提取凈化：將有代表性的肉、魚樣品切碎混勻，稱取20.00g于250mL具塞錐瓶中，加60mL丙酮，于振蕩器上振搖0.5h，經濾紙過濾，取濾液30mL于125mL分液漏斗中，加60mL硫酸鈉溶液(20g/L)和30mL二氯甲烷，振搖提取2min后，靜置分層，將下層提取液放入另一個125mL分液漏斗中，再用20mL二氯甲烷于丙酮水溶液中同樣提取后，合并二次提取液，在二氯甲烷提取液中加1g中性氧化鋁(如為魚肉加5.5g)，輕搖數(shù)次，加20g無水硫酸鈉。振搖脫水，過濾于蒸發(fā)皿中，用20mL二氯甲烷分二次洗滌分液漏斗，倒入蒸發(fā)皿中，在55℃水浴上蒸發(fā)濃縮至1mL左右，用丙酮少量多次將殘液洗入具塞刻度小試管中，定容至2~5mL，如溶液含少量水，可在蒸發(fā)皿中加少量無水硫酸鈉后，再用丙酮洗入具塞刻度小試管中，定容。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）3.肉類、魚類中有機磷農藥殘留量的測定方法分析步驟

色譜條件

色譜柱：內徑3.2mm，長1.6m玻璃柱，內裝涂以OV-17(1.5%m/m)和QF-1(2%m/m)的混合固定液的80~100目ChromosorbWAWDMCS。

流量：氮氣60mL/min；氫氣0.7kg/cm2；空氣0.5kg/cm2。

溫度：檢測器250℃，進樣口250℃，柱溫220℃(測定敵敵畏時為190℃)。如同時測定四種農藥可用程序升溫。

第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（一）氣相色譜法（GB5009.20-2003）3.肉類、魚類中有機磷農藥殘留量的測定方法分析步驟

測定：將標準使用液或樣品液進樣1~3μＬ，以保留時間定性；測量峰高，與標準比較進行定量。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（二）氣相色譜法【GB/T5009.145-2003】食品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥多種殘留的測定

本標準規(guī)定了糧食、蔬菜中敵敵畏、乙酰甲胺磷、甲基內吸磷、甲拌磷、久效磷、樂果、甲基對硫磷、馬拉氧磷、毒死蜱、蟲螨磷、倍硫磷、馬拉硫磷、對硫磷、殺撲磷、克線磷、乙硫磷、速滅威、異丙威、仲丁威、甲萘威等農藥殘留量的測定方法。

1.原理

樣品中有機磷和氨基甲酸酯農藥用有機溶劑提取，再經液液分配、微型柱凈化等步驟除去干擾物質，用氮磷檢測器(FTD)檢測，根據色譜峰的保留時間定性，外標法定量第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（二）氣相色譜法【GB/T5009.145-2003】食品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥多種殘留的測定

2.分析步驟2.1試樣的制備

取糧食樣品以粉碎機粉碎，過20目篩制成糧食試樣。蔬菜擦去表層泥水，取可食部分勻漿制成分析試樣。2.2提取

(1)蔬菜

方法一：稱取10g試樣于三角瓶中，加入與樣品含水量之和為10g的水和20mL丙酮。振蕩30min，抽濾，取20mL濾液于分液漏斗中。

方法二：稱取5g試樣(視樣品中農藥殘留量而定)，置于50mL離心管中，加入與樣品含水量之和為5g的水和10mL丙酮。置于超聲波清洗器中，超聲提取10min。在5000r/min離心轉速下離心使蔬菜沉降，用移液管吸出上清液10mL至分液漏斗中。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（二）氣相色譜法【GB/T5009.145-2003】食品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥多種殘留的測定

2.分析步驟2.2提取

(2)糧食

稱取20g樣品于三角瓶中，加入5g無水硫酸鈉和100mL丙酮，振蕩提取30min，過濾后取50mL濾液于分液漏斗中。2.3凈化

向方法一分液漏斗中分別加入40mL凝結液和1g助濾劑celite545，或方法二的分液漏斗中分別加入20mL凝結液和1g助濾劑celite545，輕搖后放置5min，經兩層濾紙的布氏漏斗抽濾，并用少量凝結液洗滌分液漏斗和布氏漏斗。將濾液轉移至分液漏斗中，加入3g氯化鈉，依次用50，50，30mL二氯甲烷提取，合并三次二氯甲烷提取液，經無水硫酸鈉漏斗過濾至濃縮瓶中，在35℃水浴的旋轉蒸發(fā)儀上濃縮至少量，用氮氣吹干。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（二）氣相色譜法【GB/T5009.145-2003】食品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥多種殘留的測定

2.分析步驟2.2提取

2.3凈化

取下濃縮瓶，加入少量正己烷。以少許棉花塞住5mL醫(yī)用注射器出口，1g硅膠以正己烷濕法裝柱，敲實，將濃縮瓶中液體倒入，再以少量正己烷：二氯甲烷(9+1)洗滌濃縮瓶，倒入柱中。依次以4mL正己烷：丙酮(7+3)，4mL乙酸乙酯，8mL丙酮：乙酸乙酯(1+1)，4mL丙酮:甲醇(1+1)洗柱，匯集全部濾液經旋轉蒸發(fā)儀45℃水浴濃縮近干，定容至1mL。向糧食提取的分液漏斗中加入50mL5%氯化鈉溶液，再以50mL，50mL，30mL二氯甲烷提取三次，合并二氯甲烷層經無水硫酸鈉過濾后，在旋轉蒸發(fā)儀40℃水浴上濃縮近干，定容至1mL。第四節(jié)食品中有機磷農藥殘留量測定二、測定方法（二）氣相色譜法【GB/T5009.145-2003】食品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥多種殘留的測定

2.分析步驟2.4測定(1)氣相色譜參考條件

色譜柱：BP5或OV-10125m×0.32mm(內徑)石英彈性毛細管柱。

氣體流速：氮氣50mL/min；尾吹氣(氮氣)30mL/min；氫氣0.5kg/cm2；空氣0.3kg/cm2

溫度：柱溫采用程序升溫方式

檢測器：氮磷檢測器(FTD)。

(2)色譜分析

量取1μL混合標準溶液及樣品凈化液注入色譜儀中，以保留時間定性，以試樣峰高或峰面積與標準比較定量。

2有機磷農藥殘留量的測定

2.1定性檢驗－剛果紅法和紙上斑點法2.1.1剛果紅法

2.1.1.1原理利用樣液中的有機磷農藥經溴氧化后，與剛果紅作用，生成藍色化合物，來鑒別樣品是否存在有有機磷農藥。2.1.1.2操作步驟

取經粉碎的樣品用苯浸泡、振搖，用濾紙過濾，取濾液于蒸發(fā)皿上，加入100g／L甘油甲醇溶液1滴，瀝干，加1mL水混勻。將樣液滴于定性濾紙上，揮發(fā)干。將濾紙置于溴蒸氣上熏5min，取出，在通氣處將溴揮發(fā)盡。滴人5g／L剛果紅乙醇溶液，置于濾紙的點樣處，如果濾紙顯示出藍紫色則表示樣品中有有機磷存在。呈粉紅色者則為溴的色澤。2.1.2紙上斑點法2.1.2.1原理樣液中的硫代磷酸酯類有機磷與2，6一二溴苯醌氯酰亞胺，在溴蒸氣作用下，形成各種有顏色的化合物，用以鑒定是否存在有機磷及是哪一種有機磷。2.1.2.2操作步驟(1)2，6一二溴苯醌氯酰亞胺試紙稱取0．05g2，6一二溴苯醌氯酰亞胺，溶于10mL95%(體積分數(shù))乙醇中，將定性濾紙浸濕，晾干備用。(2)檢驗

吸取按剛果紅法制備的樣液滴，于2，6一二溴苯醌氯酰亞胺試紙上，稍干，置于溴蒸氣上蒸熏片刻，呈現(xiàn)出不同顏色的斑點，根據所顯示斑點的顏色鑒別屬于哪種有機磷農藥。試驗時，為防止色素干擾，試紙要臨時配制。有機磷農藥呈色反應如表6-1所示。

表6一l有機磷農藥的呈色反應

農藥種類反應顏色反應時間3911鮮黃，周圍較深5s-3min1605淡黃→紫紅30s-3min1059鮮黃→暗黃30s-3min4049黃→黃棕30s-5min樂果黃→橙黃20s-5minM-74淡土黃→暗紫紅30s-5min三硫磷土黃→杏紅15s-5min1240鮮黃→暗黃30s-3min2.2有機磷農藥殘留量的定量檢測2.2.1原理

氣相色譜法－將樣品的峰高或峰面積與標準品相比較做定量分析。本法適用于水果、蔬菜、谷類的檢測。最低檢出量為0.1－0.25ng,2.2.2儀器和試劑(1)儀器組織搗碎機，粉碎機，旋轉蒸發(fā)器，氣相色譜儀：附有火焰光度檢測器(FPD)。(2)試劑

丙酮，二氯甲烷，助濾劑Celiee545，農藥標準品：敵敵畏99％，速滅磷順式60%,久效磷99%，甲拌磷98％，巴胺磷99％，二嗪農98％.

2.2.3操作步驟

(1)標準溶液的配制

分別準確稱取標準品，用二氯甲烷為溶劑，分別配制成1.0mg／mL的標準儲備液，儲于冰箱(4℃)中。使用時用二氯甲烷分別稀釋成1.0ug／mL的標準使用液。

(2)試樣制備取糧食樣品粉碎，過20目篩制成糧食試樣；取水果、蔬菜樣品洗凈，晾干，去掉非可食部分后制成待測試樣。(3)提?、俜Q取50.00g水果、蔬菜試樣，置于300mL燒杯中，加入50mL水和100mL丙酮(總體積150mL)。用組織搗碎機搗1～2min。勻漿液經鋪有兩層濾紙和約10gCellte545的布氏漏斗，減壓抽濾。從濾液中分取l00mL，移至500mL分液漏斗中。

②稱取25.00g谷物試樣，置于300mL燒杯中，加入50mL水和100mL丙酮，以下同上一步驟。(4)凈化向以上兩種濾液中，加人10～15g氯化鈉，使呈飽和狀態(tài)。猛烈振搖2～3min，靜置10min，使丙酮從水相中鹽析出來，水相用50mL二氯甲烷振搖2min，再靜置分層。將丙酮與二氯甲烷提取液合并，并經裝有20～30g