低聚果糖和乳酸桿菌對wisar大鼠便秘的潤腸作用

低聚果糖和乳酸桿菌對wisar大鼠便秘的潤腸作用

便秘是臨床上常見的復(fù)雜癥狀。隨著飲食結(jié)構(gòu)的變化，以及心理、心理和社會因素的影響，便秘的發(fā)病率呈上升趨勢，這使得許多辦公室員工和老年人面臨嚴(yán)重問題，也影響了他們的生活質(zhì)量。便秘人群易出現(xiàn)腸道菌群紊亂,長期便秘還與急性心腦血管疾病、癡呆、結(jié)直腸癌等有密切的關(guān)系。研究表示,近十幾年來,因各類便秘治療藥物在臨床研究和應(yīng)用中顯現(xiàn)諸多問題,比如療效不確切、特異性不強、不良反應(yīng)多和治療范圍局限等缺陷,沒得到更多的研究與開發(fā)。劉會艷等認(rèn)為微生態(tài)制劑可直接補充正常生理性細(xì)菌,調(diào)整腸道菌群,促進機體對營養(yǎng)物質(zhì)的分解與吸收,較適用于老年人便秘的治療。乳酸桿菌作為有益菌,可通過其抑菌活性、免疫增強作用及促進營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收等方面的作用而維持宿主腸道微生態(tài)平衡、增強宿主免疫功能并提高動物生產(chǎn)性能,加強腸道的蠕動和消化液的分泌,改善老年人習(xí)慣性便秘。低聚果糖(fructooligosaccharide,FOS)又稱果寡糖,是低聚糖類微生態(tài)調(diào)節(jié)劑中最常用的制品之一,可選擇性增值雙歧桿菌,抑制有害菌的增殖,促進腸道蠕動,尤其適用于老年人。鄭麗華等指出,長期服用果導(dǎo)片、番瀉葉、蘆薈膠囊等治療便秘的藥物,會造成電解質(zhì)紊亂、低血鉀、維生素缺乏、腸道炎癥,嚴(yán)重可誘發(fā)結(jié)腸黑變等癌前病變和精神源性假性梗阻,因此針對便秘的藥物研究,主要集中于胃腸動力劑、滲透性瀉藥以及純天然藥物。低聚果糖和乳酸桿菌均為天然藥物,都具有通便作用,但是最佳使用劑量和相互的比較未見報道。因此本項目擬參照文獻,使用鹽酸洛哌丁胺建立Wistar大鼠便秘模型,探討不同劑量低聚果糖和乳酸桿菌對便秘大鼠通便功能的影響,為臨床應(yīng)用提供參考。1材料和方法1.1儀器與設(shè)備植物乳酸桿菌由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院動物微生態(tài)研究中心提供。番瀉葉、鹽酸咯派丁胺雅安市怡人堂大藥房;低聚果糖(純度≥90%)廣東省江門星子高科生物股份有限公司;其余試劑均為分析純。PYX-DHS隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱上海市躍進醫(yī)療器械一廠;SW-CJ-2FD潔凈工作臺蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;CO2培養(yǎng)箱、臺式高速冷凍離心機美國Thermo公司;CMD-20X智能型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海瑯實驗設(shè)備有限公司;BCD-213K/T柜式冰箱Haier公司。1.2動物驅(qū)動模型健康SPF級雄性Wistar大鼠36只,體質(zhì)量為(130±3.67)g,購自成都達碩生物有限公司,動物合格證號:scxk(川)2008-24。在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)院動物實驗房(室溫(23±1)℃,相對濕度45%~50%,12h光照:12h黑暗)以標(biāo)準(zhǔn)飼料單籠適應(yīng)飼養(yǎng)7d后開始實驗。1.3植物乳酸桿菌培養(yǎng)方法低聚果糖溶液:高劑量(0.5g/mL)、中劑量(0.25g/mL)、低劑量(0.125g/mL)3個劑量組。乳酸桿菌菌懸液:將植物乳酸桿菌活化、擴大培養(yǎng)后進行計數(shù),分別配制高(1.0×1010CFU/mL)、中(1.0×109CFU/mL)、低(1.0×108CFU/mL)3個劑量組。番瀉葉浸劑:稱取藥用番瀉葉5.0g置于100.0mL沸水中浸泡25min,冷卻后以紗布過濾藥液,棄藥渣不用,所得的番瀉葉溶液定量至1000mL,得含生藥5.0×10-3g/mL的番瀉葉浸液,115℃滅菌15min后置4℃冰箱備用。1.4方法1.4.1大鼠小鼠小鼠造服刑模型取體質(zhì)量接近的Wistar大鼠36只,隨機選4只作為正常對照組(第1組),灌胃生理鹽水,其余大鼠連續(xù)3d按3.0mg/kg體質(zhì)量灌喂咯派丁胺(咯派丁胺溶于1.0mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的生理鹽水)造便秘模型。1.4.2各組乳酸桿菌、低聚果穗高劑量對見表1取造模成功的32只大鼠,隨機分成8組,每組4只,分別為:第2組(模型對照組)、第3組(番瀉葉浸劑治療對照組)、第4組(乳酸桿菌高劑量組)、第5組(乳酸桿菌中劑量組)、第6組(乳酸桿菌低劑量組)、第7組(低聚果糖高劑量組)、第8組(低聚果糖中劑量組)、第9組(低聚果糖低劑量組)。除第1組和第2組外,其余各組大鼠按2.0mL/kg體質(zhì)量的劑量連續(xù)7d灌胃相應(yīng)受試樣品,第1、2組同法同量灌胃生理鹽水。1.4.3糞便含水率測定在便秘模型造模3d與受試樣品灌喂7d期間,記錄大鼠采食量(mL)、飲水量(mL)、體質(zhì)量增量(g)、最后24h的糞便粒數(shù)、糞便鮮質(zhì)量和干質(zhì)量,按式(1)計算糞便含水率。式中:mf為糞便鮮質(zhì)量/g;md為糞便干質(zhì)量/g。1.4.4炭末推進試驗第7天灌胃受試樣品后,所有大鼠禁食不禁水24h,每只大鼠灌喂1.0mL炭末液(3.0g炭末溶于50.0mL0.5%羧甲基纖維素鈉溶液),30min后斷頸處死,剖腹,將消化道幽門至回盲瓣部分完全取出,測量小腸全長及炭末推進長度,按式(2)計算小腸炭末推進率。1.4.5菌種的培養(yǎng)第7天灌胃受試樣品后,收集大鼠新鮮糞便,取0.2~0.5g糞便經(jīng)PBS10倍遞增稀釋成10-1~10-6倍系列稀釋液,取適當(dāng)稀釋度樣品10μL接種在各類培養(yǎng)基上,每個稀釋度做3個重復(fù)。按相應(yīng)要求和條件進行培養(yǎng),以菌落形態(tài)、革蘭氏染色鏡檢、生化反應(yīng)等鑒定計數(shù)菌落,求平均值,計算每克濕便中的菌數(shù)。雙歧桿菌和乳酸桿菌分別用TPY瓊脂和MRS瓊脂,37℃厭氧培養(yǎng)48h。腸桿菌用EMB瓊脂,37℃需氧培養(yǎng)48h。腸球菌用EC瓊脂,37℃需氧培養(yǎng)48h。1.5兩種方法比較采用SPSS20.0軟件包對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,各組以變異數(shù)(ANOVA)進行比較,采用Duncanny’smultiplerangetest方法分析。如遇顯著差異時再進一步以鄧肯氏新多變域驗定分析處理均數(shù)間之差異,數(shù)據(jù)以x±s表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果與分析2.1大鼠腹瀉模型在整個實驗期間,大鼠均正常生長。由表1可知,模型對照組采食量、飲水量、體質(zhì)量增量、糞便粒數(shù)以及糞便含水率均明顯低于正常對照組(P<0.05),實驗期間未出現(xiàn)大鼠腹瀉現(xiàn)象,表明Wistar大鼠便秘模型造模成功。2.2大鼠糞便及飲水量的變化由表2可知,各受試樣品組與第2組相比,大鼠的采食量均極顯著提高(P<0.01),其中第4組的采食量最高并顯著高于第5、6組(P<0.05);除第7、8組外,其他受試樣品組便秘大鼠的飲水量均極顯著提高(P<0.01);除第8組外,其他組大鼠的小腸炭末推進率均極顯著提高(P<0.01);除第5、9組外,其他組大鼠的糞便粒數(shù)均顯著增加(P<0.05),其中,第6、7組大鼠的糞便粒數(shù)均極顯著增加(P<0.01);除第4組外,其他組大鼠的糞便含水率均顯著提高(P<0.05),其中,第6、7、8組大鼠的糞便含水率均極顯著提高(P<0.01)。表明給予受試樣品后,均可提高便秘動物采食量,對其無不良健康影響并具有通便功能,且以第6、7組效果最好。各組與第3組相比,除第6組外,其他組的采食量均極顯著提高(P<0.01);除第5、8組外,其他各組飲水量均與第3組差異不顯著;第6、9組大鼠的小腸炭末推進率顯著低于第3組(P<0.05),第4、5、7組大鼠的小腸炭末推進率極顯著低于第3組(P<0.01)。表明低聚果糖、乳酸桿菌較番瀉葉可更好的維持便秘動物正常飲食且具有如番瀉葉般的通便功能,但小腸推動作用結(jié)果提示番瀉葉的通便效果較佳。與第1組相比,受試樣品除第5、8組外,大鼠的體質(zhì)量顯著增加(P<0.05),其中以第6、7、9組增加量較高,表明受試樣品對大鼠的生長發(fā)育無不良影響。2.3各組大鼠腸蚤菌數(shù)、抑菌效果的比較由表3可知,各實驗組與第2組相比,有害菌腸球菌、大腸桿菌均表現(xiàn)下降的趨勢,受試樣品均在不同程度上抑制腸球菌、大腸桿菌的生長繁殖,其中第6、7組大鼠的腸球菌、大腸桿菌菌數(shù)顯著低于第2組(P<0.05),抑菌效果顯著;各組大鼠的乳酸桿菌、雙歧桿菌均差異不顯著,無統(tǒng)計學(xué)意義。說明受試樣品有抑制大鼠腸道有害菌生長繁殖的作用,對有益微生物的生長繁殖無不良影響。3乳酸桿菌和低聚糖對小鼠腸道生長和腸道運動的影響番瀉葉作為通便藥物已應(yīng)用多年,而低聚果糖和乳酸桿菌制劑對便秘患者的潤腸通便作用哪個效果更好又健康,以及其最佳使用劑量仍有待探索。研究表明,番瀉葉浸劑具有增強胃腸道推進作用和抑制腸道吸收液體,促進腸液分泌,機械性刺激腸壁而使蠕動增強的作用;低聚果糖在體內(nèi)外均對雙歧桿菌有顯著地增殖作用,并在腸道內(nèi)通過雙歧桿菌發(fā)酵,產(chǎn)生大量的短鏈脂肪酸,刺激腸道蠕動、增加糞便濕潤度并保持一定的滲透壓,從而防止便秘的產(chǎn)生,對產(chǎn)莢膜梭菌、大腸桿菌、艱難梭菌的生長有一定的抑制作用;乳酸桿菌制劑則通過調(diào)節(jié)免疫、拮抗腸道致病菌等保持腸道微生態(tài)平衡,從而有益于維持宿主腸道正常功能。本實驗采用鹽酸洛派叮胺為便秘誘導(dǎo)劑,通過抑制腸道水分泌和結(jié)腸蠕動建立便秘模型,以番瀉葉浸劑為陽性對照組,探討不同劑量乳酸桿菌和低聚果糖的通便效果。結(jié)果表明不同劑量受試樣品均起到了維持便秘動物正常飲食和抑制腸球菌、大腸桿菌等有害菌生長繁殖的作用,對大鼠生長和腸道有益菌繁殖無不良影響;低聚果糖、乳酸桿菌對便秘大鼠的通便作用和抑制腸球菌、大腸桿菌生長繁殖的作用與番瀉葉相當(dāng),其中低聚果糖高劑量和乳酸桿菌低劑量組效果顯著,且二者的排便功能和對小腸運動的影響在實驗檢測的各項指標(biāo)上差異不顯著;與番瀉葉浸劑相比,除小腸炭末推進率外,其他檢測指標(biāo)均差異不顯著。綜上,為了避免長期使用番瀉葉出現(xiàn)副作用,