培養(yǎng)基管理規(guī)程

目的建立培養(yǎng)基的管理規(guī)程，確保產(chǎn)品的無(wú)菌及微生物程度檢查成果真實(shí)可靠。范疇合用于實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基的管理。職責(zé)實(shí)驗(yàn)員及實(shí)驗(yàn)室管理員負(fù)責(zé)對(duì)本制度實(shí)施。QA負(fù)責(zé)監(jiān)測(cè)本規(guī)程的執(zhí)行。規(guī)程種類(lèi)和規(guī)定：本實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌檢查和微生物程度檢查所使用的培養(yǎng)基均為脫水、干燥的商品培養(yǎng)基，商品培養(yǎng)基應(yīng)有處方、使用闡明和質(zhì)量報(bào)告書(shū)。培養(yǎng)基涉及硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基等培養(yǎng)基，規(guī)定來(lái)源于正規(guī)的生產(chǎn)廠家。培養(yǎng)基的購(gòu)置:崗位實(shí)驗(yàn)員要根據(jù)培養(yǎng)基使用狀況及剩余量及時(shí)向部門(mén)領(lǐng)導(dǎo)提出申購(gòu)，經(jīng)部門(mén)領(lǐng)導(dǎo)審批后方可購(gòu)置。應(yīng)當(dāng)從可靠的供應(yīng)商處采購(gòu)，生產(chǎn)廠家應(yīng)盡量穩(wěn)定，必要時(shí)應(yīng)當(dāng)對(duì)供應(yīng)商進(jìn)行評(píng)定；一次購(gòu)入量不適宜過(guò)多。培養(yǎng)基的接受：培養(yǎng)基購(gòu)進(jìn)后，由崗位實(shí)驗(yàn)員負(fù)責(zé)接受，并及時(shí)填寫(xiě)《培養(yǎng)基接受記錄表》（附件1），如培養(yǎng)基標(biāo)簽未標(biāo)注效期，則應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)基的容器上標(biāo)注接受日期。培養(yǎng)基的保管培養(yǎng)基性狀均為粉末，有特殊氣味，容易受潮。崗位實(shí)驗(yàn)員負(fù)責(zé)核對(duì)品名、數(shù)量后，按標(biāo)簽的規(guī)定于陰涼干燥處貯存，避免光照，潮濕。

儲(chǔ)存期限:新購(gòu)進(jìn)未開(kāi)瓶的干粉培養(yǎng)基按廠家闡明書(shū)上的儲(chǔ)存期限儲(chǔ)存。開(kāi)口后的干粉培養(yǎng)基的儲(chǔ)存條件和效期均按闡明書(shū)上的規(guī)定執(zhí)行。開(kāi)封后的干粉培養(yǎng)基使用后用3M封口膜纏繞密封。培養(yǎng)基的使用在制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)按使用闡明上的規(guī)定操作配制，每次配制前應(yīng)檢查脫水培養(yǎng)基與否變質(zhì)，如結(jié)塊、變色、變味等，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生變化的脫水培養(yǎng)基。每次使用需在需登記《培養(yǎng)基領(lǐng)用統(tǒng)計(jì)》（附件2）。培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)精確稱量脫水培養(yǎng)基，并做好統(tǒng)計(jì)，配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)干凈，配制培養(yǎng)基的溶劑為去離子水或純化水。脫水培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中，再進(jìn)行分裝與滅菌。配制時(shí)若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過(guò)分加熱，以避免培養(yǎng)基炭化顏色變深。培養(yǎng)基配制時(shí)，應(yīng)在溶解后滅菌前將pH值調(diào)節(jié)至適宜范疇，調(diào)節(jié)pH值用1mol/L的氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液。如滅菌后培養(yǎng)基的pH值不符合規(guī)定，則該配制批號(hào)的培養(yǎng)基不能使用，應(yīng)廢棄。pH值測(cè)定應(yīng)在25±2℃下測(cè)定。培養(yǎng)基配制編號(hào)的編寫(xiě)按配制日期（年＋月＋日）編寫(xiě)。如3月1日配制的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的編號(hào)為0301，猶如一天配制同種培養(yǎng)基，則第二次配制的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的編號(hào)為0301A，則第三次配制的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的編號(hào)為0301B，其它依次類(lèi)推。每次配制數(shù)量、滅菌起始時(shí)間、pH值及使用狀況(統(tǒng)計(jì)使用量，使用產(chǎn)品名稱、批號(hào)等信息)均應(yīng)具體統(tǒng)計(jì)，統(tǒng)計(jì)于《培養(yǎng)基配制、使用統(tǒng)計(jì)》（附件3）。培養(yǎng)基的貯藏培養(yǎng)基滅菌后不得貯藏在高壓滅菌器中，瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃下列寄存，由于冷凍可能破壞凝膠特性。培養(yǎng)基保存應(yīng)避免水份流失，避光保存。瓊脂平板最佳現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，，普通不超出1周，且應(yīng)密封包裝，若延長(zhǎng)保存效期，保存期需通過(guò)驗(yàn)證擬定。培養(yǎng)基取用人員在取用時(shí)應(yīng)核對(duì)培養(yǎng)基的使用期并檢查培養(yǎng)基的外觀，如培養(yǎng)基變質(zhì)或顏色發(fā)生變化，應(yīng)廢棄不用。固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次，以避免因過(guò)分受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化普通采用水浴或流通蒸汽。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過(guò)分受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基置于45-50℃的水浴中，不得超出8小時(shí)。傾注培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進(jìn)入培養(yǎng)基中造成污染。質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)

每一批脫水培養(yǎng)基均需做合用性檢查。培養(yǎng)基的合用性檢查實(shí)驗(yàn)若不符合規(guī)定，應(yīng)對(duì)各環(huán)節(jié)進(jìn)行調(diào)查，尋找不合格的因素，以避免問(wèn)題重復(fù)出現(xiàn)，任何不符合規(guī)定的培養(yǎng)基均不能使用。涉及菌種及菌懸液制備4.7.3.1涉及菌種A.大腸埃希菌EscherichiacoliB.金黃色葡萄球菌StaphylococcusaureusC.銅綠假單胞菌PseudomonasaeruginosaD.枯草芽孢桿菌BacillussubtilisE.白色念珠菌CandidaalbicansF.黑曲霉Aspergillusniger注：培養(yǎng)基的合用性檢查所用的菌種傳代次數(shù)不得超出5代，使用CMCC的菌種。4.7.3.2菌懸液制備取規(guī)格為102cfu/瓶，菌含量為10~99cfu/0.1ml的定量質(zhì)控菌株，使用前注入對(duì)應(yīng)的復(fù)溶液使其充足溶解，普通在渦旋儀上震蕩混勻30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌懸液，備用。注意每次取樣前再次將菌懸液混合均勻。微生物計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基接種A.取實(shí)驗(yàn)菌各0.1ml（含菌數(shù)＜100CFU）用涂布棒均勻的涂布到待檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基上，每株實(shí)驗(yàn)菌平行制備兩個(gè)皿。同時(shí)制備兩個(gè)空白平皿作為陰性對(duì)照。B.將接種后的培養(yǎng)基按藥典規(guī)定在規(guī)定條件下培養(yǎng)。C.計(jì)算：將培養(yǎng)皿內(nèi)每種微生物的測(cè)試平板平均值與參考平板平均值相比，計(jì)算回收率，并統(tǒng)計(jì)于《微生物計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基合用性檢查統(tǒng)計(jì)》（附件4）。D.檢定鑒定：若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5?2范疇內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，且陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，判該培養(yǎng)基的合用性檢查符合規(guī)定。液體培養(yǎng)基接種A.取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，規(guī)定溫度下培養(yǎng)3天；B.取每管裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，規(guī)定溫度下培養(yǎng)5天。定時(shí)觀察成果并統(tǒng)計(jì)于《液體培養(yǎng)基敏捷度檢查統(tǒng)計(jì)》（附件5）。C.成果鑒定空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的敏捷度檢查符合規(guī)定。統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基接受記錄表培養(yǎng)基領(lǐng)用統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基配制、使用統(tǒng)計(jì)微生物計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基合用性檢查統(tǒng)計(jì)液體培養(yǎng)基敏捷度檢查統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基啟用標(biāo)簽、培養(yǎng)基配制標(biāo)簽有關(guān)文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程HYT/SMP-QA-ZB-004偏差調(diào)查與解決管理規(guī)程HYT/SMP-QA-ZB-008檢查異常管理規(guī)程HYT/SMP-QA-ZB-010參考文獻(xiàn)無(wú)菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范YY0033-中國(guó)藥典修訂歷史序號(hào)生效日期文獻(xiàn)編號(hào)及版本號(hào)修訂性質(zhì)及因素修訂內(nèi)容及具體條款附件1：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基接受統(tǒng)計(jì)編號(hào)：HYT/SMP-QA-ZB-026培養(yǎng)基名稱接受日期批號(hào)規(guī)格生產(chǎn)廠家生產(chǎn)日期使用期接受數(shù)量接受人附件2：培養(yǎng)基領(lǐng)用統(tǒng)計(jì)編號(hào)：HYT/SMP-QA-ZB-026培養(yǎng)基名稱批號(hào)規(guī)格生產(chǎn)廠家生產(chǎn)日期使用期開(kāi)封日期開(kāi)封人儲(chǔ)存條件領(lǐng)用統(tǒng)計(jì)領(lǐng)用日期干粉確認(rèn)領(lǐng)用人領(lǐng)用數(shù)量（克）剩余數(shù)量（克）備注注：每次使用時(shí)領(lǐng)用人需檢查脫水培養(yǎng)基與否變質(zhì)，如結(jié)塊、變色、變味等，若無(wú)，就在干粉確認(rèn)一欄中打“√”，若有變質(zhì)，寫(xiě)明變質(zhì)現(xiàn)象附件3：培養(yǎng)基配制、使用統(tǒng)計(jì)編號(hào)：HYT/SMP-QA-ZB-026培養(yǎng)基名稱配制根據(jù)廠家批號(hào)規(guī)格使用期配制日期編號(hào)制備配制過(guò)程：稱量設(shè)備名稱及編號(hào)：培養(yǎng)基狀態(tài)：□固體□液體稱取本品g，加純化水ml，加熱攪拌，使溶液均勻。液體培養(yǎng)基與否分裝：□分裝（ml/□支或□瓶）,□不分裝加蓋方式：□牛皮紙□橡膠塞□膠塞滅菌時(shí)間：□121℃15分鐘□121℃20分鐘共配備□支或□瓶。固體培養(yǎng)基分裝的空皿的型號(hào)及批次：共分裝皿。滅菌后pH值規(guī)定規(guī)定：pH計(jì)編號(hào)：與否校準(zhǔn)：□已校準(zhǔn)□未校準(zhǔn)滅菌前pH值：添加□1mol/LNaOH（編號(hào)：）的量或□1mol/LHcl（編號(hào)：）的量滅菌后pH值：結(jié)論：□符合規(guī)定□不符合規(guī)定操作人：復(fù)核人：滅菌滅菌壓力：滅菌器編號(hào)：起始時(shí)間：從時(shí)分到時(shí)分操作人：復(fù)核人：日期數(shù)量使用狀況使用人備注附件4：微生物計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基合用性檢查統(tǒng)計(jì)編號(hào)：HYT/SMP-QA-ZB-0261培養(yǎng)基信息實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基名稱及批號(hào)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基配制編號(hào)對(duì)照培養(yǎng)基名稱及批號(hào)對(duì)照培養(yǎng)基配制編號(hào)檢查根據(jù)檢查日期2檢查環(huán)節(jié)及成果2.1菌株的準(zhǔn)備：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉，規(guī)格為102cfu/瓶，菌含量為10~99cfu/0.1ml的定量質(zhì)控菌株，使用前注入對(duì)應(yīng)的復(fù)溶液使其充足溶解，普通在渦旋儀上震蕩混勻30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌懸液，備用。注意每次取樣前再次將菌懸液混合均勻。2.2實(shí)驗(yàn)辦法：用平皿傾注法或表面涂布法在對(duì)照培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的每個(gè)平皿接種不大于100cfu實(shí)驗(yàn)菌，每種實(shí)驗(yàn)菌平行制備兩個(gè)平皿，培養(yǎng)，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。同時(shí)制備兩個(gè)空白平皿作陰性對(duì)照。2.3成果判斷：若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5?2范疇內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，且陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，則成果符合規(guī)定。菌種名稱菌種編號(hào)培養(yǎng)條件菌落數(shù)(菌落生長(zhǎng)狀況實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基對(duì)照培養(yǎng)基陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基對(duì)照培養(yǎng)基平皿1平皿2平皿1平皿23結(jié)論□符合規(guī)定□不符合規(guī)定檢查人：日期：復(fù)核人：日期：同意人：日期：附件5：液體培養(yǎng)基敏捷度檢查統(tǒng)計(jì)編號(hào)：HYT/SMP-QA-ZB-026檢查根據(jù)中國(guó)藥典檢查日期菌株的準(zhǔn)備：取生孢梭菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉，規(guī)格為102cfu/瓶，菌含量為10~99cfu/0.1ml的定量質(zhì)控菌株，使用前注入對(duì)應(yīng)的復(fù)溶液使其充足溶解，普通在渦旋儀上震蕩混勻30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌懸液，備用。注意每次取樣前再次將菌懸液混合均勻。取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5天。定時(shí)觀察成果。菌種定量菌株批號(hào)FTM培養(yǎng)基/培養(yǎng)溫度30~35℃（天）（培養(yǎng)基批號(hào)：配制編號(hào)：）（培養(yǎng)箱編號(hào)：）123菌種定量菌株批號(hào)TSB培養(yǎng)基/培養(yǎng)溫度20~25℃（天）（培養(yǎng)基批號(hào)：配制編號(hào)：）（培養(yǎng)箱編號(hào)：）12345白色