中藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的提升

中藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的提升

[網(wǎng)絡(luò)發(fā)布時(shí)間]2014年08月19日。中藥材來源廣泛(植物、動(dòng)物以及礦物),種類繁多。傳統(tǒng)中藥材講究道地性,即道地藥材,是指在一定自然條件、生態(tài)環(huán)境的地域內(nèi)所產(chǎn)的藥材,因生產(chǎn)較為集中,栽培技術(shù)、采收加工也都有一定的講究,以致較同種藥材在其他地區(qū)所產(chǎn)者品質(zhì)佳、療效好。近年來由于藥材種植業(yè)和農(nóng)業(yè)的發(fā)展,人們可以通過一定的手段控制《中國(guó)藥典》規(guī)定檢測(cè)指標(biāo)性成分的含量,以達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),導(dǎo)致以劣充優(yōu)的狀況在購銷過程中時(shí)有發(fā)生?，F(xiàn)有評(píng)價(jià)中藥材質(zhì)量的方法有指紋圖譜、譜效關(guān)系、一測(cè)多評(píng)等,他們?cè)谠u(píng)價(jià)藥材質(zhì)量時(shí)都存在一定的缺陷。因此,本文提出“譜效關(guān)系+一測(cè)多評(píng)”的研究思路進(jìn)行藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究,達(dá)到“深入研究,淺出標(biāo)準(zhǔn)”的目的,為藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的全面提升提供有效的研究手段。1中藥指紋圖譜研究隨著科技的發(fā)展,市場(chǎng)上流通的藥材多數(shù)為種植的,由于對(duì)道地藥材的開發(fā)和利用不充分,大宗藥材的種植缺乏統(tǒng)一的規(guī)程,生產(chǎn)管理粗放,產(chǎn)量低、質(zhì)量差的現(xiàn)象較為普遍,把好中藥材質(zhì)量關(guān)是中藥邁出國(guó)門走向世界的重中之重。國(guó)務(wù)院2009年關(guān)于扶持和促進(jìn)中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展的若干意見中提出中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界研究的熱點(diǎn)之一。中藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)依據(jù)中藥質(zhì)量特征來建立,吳國(guó)泰認(rèn)為中藥系統(tǒng)質(zhì)量的特征在于以下三點(diǎn):(1)中藥基原的多樣性和差異性導(dǎo)致中藥質(zhì)量的多樣性和差異性;(2)中藥質(zhì)量在形成過程中是中藥化學(xué)物質(zhì)群或有效成分群的重組和構(gòu)建過程,質(zhì)量載體和質(zhì)量標(biāo)志物具有動(dòng)態(tài)性和隱蔽性;(3)中藥質(zhì)量需要體現(xiàn)中藥的功效。所以,中藥質(zhì)量的安全性、有效性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)需要反映化學(xué)和生物學(xué)的相互作用體系、相互作用過程和作用規(guī)律。目前,我國(guó)現(xiàn)行中藥質(zhì)量控制的基礎(chǔ)模式是參照國(guó)外植物藥的質(zhì)量控制方法,依靠對(duì)藥物進(jìn)行生藥學(xué)研究、指標(biāo)性化學(xué)成分或有效成分做定性或定量分析,其中以化學(xué)定性鑒別與指標(biāo)成分檢測(cè)為主要內(nèi)容,但個(gè)別指標(biāo)性成分或活性成分的生物活性不能全面反映中藥的獨(dú)特療效。中藥指紋圖譜可以在一定程度上反映藥材內(nèi)在質(zhì)量的均一性、穩(wěn)定性、差異性以及個(gè)體間群體的相似性,國(guó)外也普遍認(rèn)可以用指紋圖譜來評(píng)價(jià)中藥材的質(zhì)量,但指紋圖譜在評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量好壞時(shí)體現(xiàn)出藥材本身化學(xué)成分不清、化學(xué)成分與其藥理作用的相關(guān)性不明確等缺憾,因此中藥指紋圖譜只能作為過渡性的質(zhì)量控制方法。此外,多種成分共同測(cè)定以同步控制中藥材質(zhì)量的方法也是近年來中藥材質(zhì)量控制的主要研究方法。王智民等提出了“一測(cè)多評(píng)”法,即利用中藥有效成分內(nèi)在的函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系,測(cè)定一個(gè)成分,建立該組分與其他組分之間的相對(duì)校正因子,無需提供鑒別和定位用的對(duì)照品,通過校正因子計(jì)算其他組分的量來實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分的同步測(cè)定。2010年版《中國(guó)藥典》一部中已收錄了運(yùn)用“一測(cè)多評(píng)”法測(cè)定黃連中小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿等5個(gè)成分的含量。蔡海霞等在黃芪藥材多指標(biāo)控制研究中應(yīng)用黃芪藥材中1個(gè)易獲得的對(duì)照品(芒柄花素),通過建立該成分與其余待測(cè)成分(毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮)間的相對(duì)校正因子,計(jì)算出其余成分的含量,實(shí)現(xiàn)多指標(biāo)質(zhì)量控制。林芳等建立杜仲多指標(biāo)HPLC指紋圖譜,并以綠原酸為內(nèi)標(biāo),應(yīng)用一測(cè)多評(píng)法對(duì)藥材中松脂醇二葡萄糖苷、綠原酸、京尼平苷酸的含量同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。到目前為止,“一測(cè)多評(píng)”已應(yīng)用于許多中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)及中藥復(fù)方制劑的多指標(biāo)成分的測(cè)定研究中,涉及黃酮、皂苷、生物堿、蒽醌等各類成分。由于有效成分對(duì)照品存在種類有限、難以獲得、價(jià)格高等方面的問題,“一測(cè)多評(píng)”法可以作為多指標(biāo)含量測(cè)定方法的一種補(bǔ)充,用于中藥的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。但是該理論中化學(xué)成分與療效的相關(guān)性不明確,導(dǎo)致其所評(píng)價(jià)的化學(xué)成分不一定是藥材的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),因此,“一測(cè)多評(píng)”法還需進(jìn)一步完善。譜效關(guān)系是目前能將化學(xué)成分與療效相結(jié)合評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的方法,2002年由李戎提出,它是指建立在中藥指紋圖譜的研究基礎(chǔ)上,最大限度地獲取有用的化學(xué)信息,將標(biāo)示物質(zhì)群特征峰的指紋圖譜與藥效結(jié)果聯(lián)系起來,為確立中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、制定反映產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的控制標(biāo)準(zhǔn)而進(jìn)行的研究。近年來譜效關(guān)系在闡述中藥及復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、中藥及中藥制劑質(zhì)量控制、中藥炮制機(jī)制研究、中藥藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域中有一定的研究和應(yīng)用。唐光曦等在黃連體外改善胰島素抗體活性與HPLC指紋圖譜相關(guān)性研究中采用灰色關(guān)聯(lián)分析確定黃連指紋圖譜各共有峰與改善胰島素抵抗活性相關(guān)性,有利于黃連改善胰島素抵抗活性成分的篩選。王薇等采用灰色關(guān)聯(lián)分析法研究黃芩各成分與解熱抗病毒藥效的相關(guān)性,初步預(yù)測(cè)了黃芩解熱、抗病毒功效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。丁洪濤采用GC-MS建立了姜黃揮發(fā)油的指紋圖譜,并通過MTT法檢測(cè)了姜黃揮發(fā)油體外抗腫瘤活性,最終采用偏最小二乘法和雙變量相關(guān)分析法研究了姜黃揮發(fā)油的譜效相關(guān)性。但譜效關(guān)系僅預(yù)測(cè)與藥效相關(guān)的物質(zhì)的相關(guān)性大小,缺少各單體成分本身的療效驗(yàn)證。同一藥物因?qū)?yīng)病癥不同、療效不同所體現(xiàn)出各成分指紋圖譜與療效的相關(guān)性排序也有所差異。所以,單一的譜效關(guān)系研究也無法確定藥材可控的指標(biāo)性成分。因此,本文提出新的中藥材質(zhì)量控制研究方法,即譜效關(guān)系與一測(cè)多評(píng)相結(jié)合,研究上層層遞進(jìn),相輔相成,最終達(dá)到“深入研究,淺出標(biāo)準(zhǔn)”的目的。2對(duì)藥材質(zhì)量控制的研究針對(duì)目前中藥材質(zhì)量控制研究存在的問題,本文提出了以下的研究思路:(1)應(yīng)用灰色關(guān)聯(lián)分析、圖譜比對(duì)等方法研究中藥材各主要功效的譜效關(guān)系,找出與各療效有相關(guān)性的化學(xué)成分,綜合確定藥材藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。(2)通過液相色譜/電噴霧多級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC/ESI-MSn),硅膠、ODS反相、凝膠等柱色譜,分離譜效關(guān)系中與療效相關(guān)的化學(xué)成分,并鑒定其結(jié)構(gòu)。(3)將分離鑒定的各單體化合物進(jìn)行活性研究,驗(yàn)證各成分的藥效,從而判斷該成分是否可作為指標(biāo)性成分。(4)建立上述所確定的指標(biāo)性成分“一測(cè)多評(píng)”的研究方法。最終我們從整體出發(fā),以一個(gè)內(nèi)參對(duì)照品控制多個(gè)與療效相關(guān)的化學(xué)成分,從而全面提升中藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),做到“深入研究,淺出標(biāo)準(zhǔn)”,為中藥材質(zhì)量控制研究提供研究方法和新思路。如圖1所示。3強(qiáng)化藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中藥作為中華民族藥物的瑰寶,以其獨(dú)特的療效越來越受到關(guān)注,但是由于它來源多樣、成分復(fù)雜、研究手段受限等因素,難以制定出全面評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本課題組以“譜效關(guān)系+一測(cè)多評(píng)”的研究思路運(yùn)用到黃芪藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)全面提升的研究中,首先建立黃芪藥材指紋圖譜結(jié)合抗炎、耐缺氧藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究黃芪藥材的譜效關(guān)系,最終得到15種成分可能是其藥效物質(zhì)基礎(chǔ);其次,通過液質(zhì)聯(lián)用和分離分析技術(shù)確定這15種成分的結(jié)構(gòu)并對(duì)其活性篩選,驗(yàn)證15種單體的藥效;最后,以“一測(cè)多評(píng)”法對(duì)各藥效指標(biāo)加以控制,達(dá)到全面控制黃芪藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的目的。這一方法得到實(shí)例的印證,本文是有機(jī)地將指紋圖譜研究、“一測(cè)多評(píng)”法、結(jié)構(gòu)鑒定法以及譜效關(guān)系研究等一系列中藥材質(zhì)量控制辦法結(jié)合在一起