啤酒酵母葡聚糖制劑和維生素c組合對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)和抗病力的影響

啤酒酵母葡聚糖制劑和維生素c組合對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)和抗病力的影響

在水產(chǎn)養(yǎng)殖條件下，高密度繁殖所帶來(lái)的各種污染物的熱量和污染破壞了水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的防御系統(tǒng)，增加了動(dòng)物對(duì)疾病的感知。已發(fā)現(xiàn)有20多種病毒可以感染蝦類,而對(duì)付這些病毒至今尚沒(méi)有有效的方法,其它傳染性細(xì)菌病在蝦類養(yǎng)殖中也很常見(jiàn)。據(jù)最近的研究報(bào)導(dǎo),應(yīng)用免疫刺激物如β_1,3葡聚糖或維生素C來(lái)提高蝦類的抗病力是一條很具吸引力的途徑。通過(guò)口服β_1,3葡聚糖對(duì)蝦類具有免疫刺激效果。Rao在飼料中添加β_1,3葡聚糖增強(qiáng)了斑節(jié)對(duì)蝦對(duì)弧菌和SEMBV的抗病力。Liao發(fā)現(xiàn)每kg飼料添加0.5～1g的一種來(lái)源于絲狀真菌Schizophyllumcommuneβ_1,3葡聚糖,斑節(jié)對(duì)蝦攝食10和20d后對(duì)注射V.damsela攻毒的抵抗力增強(qiáng)。Song在蝦苗培育期用β_1,3葡聚糖浸泡而在蝦養(yǎng)殖期在飼料中添加β_1,3葡聚糖使斑節(jié)對(duì)蝦對(duì)V.vulnificus和WSBV的抵抗力增強(qiáng)。Verlhao研究了虹鱒飼料中添加酵母β_葡聚糖和維生素C的綜合免疫刺激效果,發(fā)現(xiàn)飼料維生素C和酵母β_葡聚糖以4g∶1g/kg飼料時(shí)顯著提高補(bǔ)體激活的旁路途徑和吞噬細(xì)胞的化學(xué)發(fā)光反應(yīng),并在接種疫苗后增加抗體的產(chǎn)生。Madsen則發(fā)現(xiàn)虹鱒攝食富含酵母β_葡聚糖和維生素C的飼料在暴發(fā)由Flavobacteriumpsychrophilum引起的虹鱒幼魚綜合癥(RTFS)時(shí)脊柱畸形程度減少,但這類研究在對(duì)蝦中尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。本研究的目的是在飼料中添加酵母β_葡聚糖制劑和維生素C的組合通過(guò)飼養(yǎng)和注射致病細(xì)菌或病毒做攻毒試驗(yàn)以探討酵母β_葡聚糖和維生素C的組合對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)和抗病力的效果。1材料和方法1.1可溶性動(dòng)物群落啤酒酵母β_葡聚糖制劑:一種由廣東省農(nóng)科院畜牧所水產(chǎn)研究室提供,商品名為“特免王”,主要成分為β_1,3葡聚糖和甘露聚糖;另一種為本研究室自制,參考文的步驟,啤酒酵母先采用次氯酸鈉氧化,然后用二甲亞砜抽提所制得的一種可溶性細(xì)胞壁β_1,3葡聚糖制劑(SBG),主要成分為β_1,3葡聚糖。維生素C采用多聚VC磷酸酯,商品名“三寶高穩(wěn)C”,VC效價(jià)10%,惠州三寶生物化學(xué)科技有限公司生產(chǎn)。根據(jù)斑節(jié)對(duì)蝦的營(yíng)養(yǎng)需要設(shè)計(jì)了5組飼料(組成見(jiàn)表1),采用雙螺桿擠壓機(jī)制成粒徑為1.2mm的顆粒,自然曬干,貯存于-15℃的冰箱中備用。1.2重復(fù)飼養(yǎng)體質(zhì)量為2～3g左右的斑節(jié)對(duì)蝦苗70尾飼養(yǎng)在室外水泥池(3m×2m×1m)中,每天按體質(zhì)量的5%分3次投喂飼料,每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)計(jì)2個(gè)重復(fù),養(yǎng)殖期間每天充氣8h(0:00-8:00),試驗(yàn)期間不換水。飼養(yǎng)時(shí)間為30d,30d后檢查每池的蝦數(shù)量并稱重,每池隨機(jī)抽取3尾蝦取血淋巴于5000r/min下離心10min,測(cè)定血淋巴比容,同時(shí)取上層血清用微量凱氏定氮法檢測(cè)蛋白質(zhì)含量。全部數(shù)據(jù)采用單因素方差分析處理,若有顯著差異存在則用Duncans多重比較法確定組間差異。1.3尾蝦多次注射斑節(jié)蝦實(shí)踐飼養(yǎng)結(jié)束后,徹底清洗并用漂白粉將水泥池消毒,將池水加至30cm深,每池取20尾蝦,每尾蝦注射50μL海水活溶藻弧菌液(108CFU/mL);另取20尾蝦放于另一水泥池內(nèi),每尾蝦注射50μL出現(xiàn)斑節(jié)對(duì)蝦白斑綜合癥典型癥狀且處于瀕死狀態(tài)的病蝦勻漿病毒粒子濾過(guò)液;再取20尾蝦放于第3水泥池內(nèi),每尾蝦注射50μL生理鹽水。檢查24h內(nèi)可能由于操作機(jī)械損傷而非感染至死的蝦,每組繼續(xù)投喂原來(lái)的實(shí)驗(yàn)飼料,記錄7d內(nèi)蝦的累計(jì)死亡情況,計(jì)算相對(duì)存活百分比(RPS)。RPS%=注射細(xì)菌或病毒的蝦存活率注射生理鹽水的蝦的存活率×100RΡS%=注射細(xì)菌或病毒的蝦存活率注射生理鹽水的蝦的存活率×1002.結(jié)果與討論2.1對(duì)不同試驗(yàn)組飼料系數(shù)的影響斑節(jié)對(duì)蝦飼養(yǎng)30d后,其特定生長(zhǎng)率、存活率和飼料系數(shù)見(jiàn)表2。由表2可知,特定生長(zhǎng)率和存活率以SBG組、特免王組和高VC組顯著高于低VC組和對(duì)照組,但各試驗(yàn)組之間以及低VC組和對(duì)照組之間沒(méi)有顯著差異。飼料系數(shù)則正好相反,以SBG組、特免王組和高VC組顯著高于低VC組和對(duì)照組,但各試驗(yàn)組之間以及低VC組和對(duì)照組之間沒(méi)有顯著差異。由此可見(jiàn),飼料中添加β_葡聚糖制劑以及高劑量VC有助于斑節(jié)對(duì)蝦的生長(zhǎng)和存活,有利于提高飼料效率,使飼料系數(shù)降低,但低劑量的VC顯然對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦的生長(zhǎng)和存活在本試驗(yàn)期間內(nèi)沒(méi)有表現(xiàn)出有益效果。2.2血淋巴比容的檢測(cè)斑節(jié)對(duì)蝦攝食不同試驗(yàn)飼料30d后,其血清蛋白質(zhì)含量和血淋巴比容見(jiàn)表3。由表3可知,血清蛋白含量以特免王組、SBG組、高VC組和低VC組顯著高于對(duì)照組,特免王組、SBG組、高VC組和低VC組之間沒(méi)有顯著差異。血淋巴比容在各組之間無(wú)顯著差異。從以上數(shù)據(jù)可以認(rèn)為,飼料中的VC對(duì)血清中的蛋白含量有顯著提高的作用,添加葡聚糖制劑對(duì)血清蛋白的含量沒(méi)有表現(xiàn)出協(xié)同效果。甲殼類的防御體系主要由兩部分組成,細(xì)胞防御包括血淋巴細(xì)胞和定居的吞噬細(xì)胞,形成小結(jié)以及包囊;體液防御包括酚氧化酶(PO)和酚氧化酶原(proPO)激活體系,殺菌素和凝集素。添加VC和葡聚糖制劑雖然使血清蛋白含量提高,但是否使酚氧化酶激活體系的活性增強(qiáng)尚待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。2.3對(duì)斑節(jié)蝦葡聚糖飼料2d存活率結(jié)果見(jiàn)表1斑節(jié)對(duì)蝦攝食不同試驗(yàn)飼料30d后分別注射弧菌或白斑病毒濾過(guò)液7d內(nèi)的累計(jì)死亡率和相對(duì)存活率見(jiàn)表4。由表4可知,各試驗(yàn)組在注射50μL弧菌液后,12h內(nèi)的累計(jì)死亡率分別以對(duì)照組>低VC組>高VC組=特免王組>SBG組,相對(duì)存活率則正好相反,以對(duì)照組<低VC組<高VC組=特免王組<SBG組,但24h后,所有試驗(yàn)組的累計(jì)死亡率均達(dá)100%,說(shuō)明飼料中高含量的VC或添加β_葡聚糖制劑對(duì)注射弧菌這種急性的攻毒都只有有限的保護(hù)作用。攝食不同啤酒酵母β_葡聚糖制劑、不同含量VC磷酸酯飼料30d后注射斑節(jié)對(duì)蝦白斑病毒,72h內(nèi)對(duì)照組和低VC組的累記死亡率已達(dá)100%,比特免王組、SBG組和高VC組要高得多。72h后,累計(jì)死亡率以高VC組>特免王組>SBG組,而相對(duì)存活率以高VC組<特免王組<β葡聚糖組,但特免王組和SBG組之間的差異不是很明顯。到168h,高VC組的累計(jì)死亡率已達(dá)98.3%,而特免王組和SBG組的累計(jì)死亡率也達(dá)71.7%和65.0%,可見(jiàn)飼料中高含量的VC或添加β_葡聚糖制劑對(duì)注射病毒這種急性的攻毒都也只有有限的保護(hù)作用,但飼料中高含量的VC或添加β_葡聚糖制劑的這種保護(hù)作用相對(duì)于對(duì)照來(lái)說(shuō)是很顯著的。β_葡聚糖對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)和抗病力的效果很可能是刺激血淋巴的結(jié)果,已證實(shí)蝦浸泡于MacroGard混懸液中時(shí)血淋巴產(chǎn)生更多的超氧游離基和過(guò)氧化氫。Sung也報(bào)道了相同的結(jié)果,用β_1,3葡聚糖浸泡處理斑節(jié)對(duì)蝦可加速體內(nèi)V.vulnificus清除,增強(qiáng)酚氧化酶的活性和過(guò)氧化物的產(chǎn)生。3與高含量的vc磷酸酯配合使用對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦抗病力的影響通過(guò)以上的結(jié)果我們可以認(rèn)為,在飼料中添加啤酒酵母β_葡聚糖制劑對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦的增重、存活率有顯著的提高,能顯著降低飼料系數(shù),這種效果和添加高含量的VC磷酸酯的效果是相當(dāng)?shù)?。飼料中添加VC磷酸酯能顯著提高斑節(jié)對(duì)蝦