制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座

介紹河北科技大學——生物科學專業(yè)河北大學——生物化學與分子生物學石藥集團歐意藥業(yè)制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第1頁微生物與制藥行業(yè)息息相關藥品生產藥品檢驗微生物混入藥品中危害人體健康速凍食品中檢出金黃色葡萄球菌——新國家標準乳制品中黃曲霉素超標制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第2頁目錄第一章微生物總論第二章微生物類群第三章消毒與滅菌第四章微生物污染與控制制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第3頁第一章微生物總論什么是微生物？人類是怎樣認識微生物？微生物有什么特點？微生物都分布在哪里？微生物是怎樣代謝？制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第4頁日常接觸到微生物日常接觸到微生物食物發(fā)霉——霉菌肥面（老面或面肥）——酵母菌酸奶——乳酸菌、雙歧鏈桿菌等流感——病毒制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第5頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第6頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第7頁微生物（microorganism）是指一些個體微小、結構簡單、肉眼看不見只有借助顯微鏡才能觀察到生物總稱。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第8頁人類對微生物世界認識過程感性認識階段（史前時期）形態(tài)學發(fā)展階段（初創(chuàng)時期）生理學發(fā)展階段（奠基時期）分子生物學發(fā)展階段（成熟時期）制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第9頁1.感性認識階段（史前期）

細菌冶金漚糞肥田 制曲釀酒提倡輪作種痘防花麥曲治瀉制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第10頁2.形態(tài)學發(fā)展階段（初創(chuàng)期）列文虎克發(fā)覺微生物，為微生物學發(fā)展做出了極大貢獻。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第11頁3.生理學發(fā)展階段（奠基期）本期特點①建立了研究微生物所必要方法和技術②開創(chuàng)了尋找病原微生物“黃金時期”③從形態(tài)學推進到生理學④成為獨立學科形式制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第12頁巴斯德徹底否定了自然發(fā)生說證實發(fā)酵由微生物引發(fā)免疫學—預防接種創(chuàng)造巴氏消毒法代表人物和主要事件制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第13頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第14頁巴氏消毒巴氏滅菌法，亦稱低溫消毒法，是一個利用較低溫度既可殺死病菌又能保持物品中營養(yǎng)物質風味不變消毒法。現(xiàn)用巴氏殺菌方法普通有兩種：一、加熱到62～65℃之間，30分鐘；二、加熱到75～90℃攝氏度以上，最少保持15秒鐘。巴氏消毒法所用溫度低，故達不到滅菌程度。不過它能夠使細菌總數(shù)降低90％－95％，故能起到降低疾病傳輸，延長食品使用時間作用。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第15頁科赫建立微生物學研究基本技術證實了疾病病原菌學說提出科赫準則制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第16頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第17頁4.分子生物學發(fā)展階段（成熟期）

J.D.Waston(沃森),H.F.C.Crick(克里克)

發(fā)覺DNA雙螺旋模型制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第18頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第19頁

微生物分類：三型八類：

原核細胞型微生物——細胞核分化較低，僅有原始核，無核膜、核仁。細胞器很不完善。DNA和RNA同時存在。這類微生物眾多，有細菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第20頁微生物分類：三型八類：非細胞型微生物——是最小一類微生物。無經典細胞結構，只能在活細胞內生長繁殖。核酸類型為DNA或RNA。病毒屬之。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第21頁微生物分類：三型八類：真核細胞型微生物——細胞核分化程度高，有核膜和核仁，細胞器完整。如真菌。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第22頁大腸桿菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第23頁放線菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第24頁

支原體掃描電鏡圖片支原體（mycoplasma）以前被認為是最小能獨立存活原核生物，以前也被認為是地球上迄今為止被發(fā)覺最小細胞生物。全世界90%豬體內寄生著支原體。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第25頁酵母菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第26頁

青霉是種真菌，屬于子囊菌。有能產生青霉素，救了無數(shù)人命。產生無性孢子。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第27頁愛滋病病毒制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第28頁微生物五大共性體積小，面積大；吸收多，轉化快；生長旺，繁殖快；適應強，易變異；分布廣，種類多。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第29頁體積小，面積大微生物大小單位是μm

（1m＝106μm）或nm（1m＝109nm）。物體表面積和體積之比稱為比表面積。把一定體積物體分割得越小，它們總表面積就越大。假如把人比表面積值定為1，則大腸桿菌比表面積值竟高達30萬！制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第30頁吸收多，轉化快因為微生物比表面積大，這非常有利于微生物經過體表吸收營養(yǎng)和排泄廢物，就使它們“胃口”十分龐大。如大腸桿菌在適當條件下，每小時能夠消耗相當于本身重量倍糖，而人要完成這么一個規(guī)模則需要40年之久。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第31頁生長旺，繁殖快微生物以驚人速度“生兒育女”。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第32頁適應強，易變異微生物對環(huán)境條件尤其是惡劣“極端環(huán)境”含有驚人適應力，這是高等生物所無法比擬。微生物個體微小，與外界環(huán)境接觸面積大，輕易受到環(huán)境條件影響而發(fā)生性狀改變（變異）。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第33頁分布廣，種類多微生物在地球上幾乎無處不有，無孔不入,人類生活在微生物汪洋大海之中，但經常是“深在菌中不知菌”。微生物種類繁多。迄今為止，我們所知道微生物約有10萬種，有些人預計當前已知種只占地球上實際存在微生物總數(shù)20%，微生物很可能是地球上物種最多一類。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第34頁微生物“生物界之最”個體最小數(shù)量最多分布最廣形態(tài)最簡變異最易起源最早胃口最大抗性最強發(fā)覺最晚食譜最廣休眠最長界級最寬繁殖最快種類最多制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第35頁微生物營養(yǎng)要求微生物生長繁殖所需營養(yǎng)物質主要有水、碳源、氮源、無機鹽和生長因子等。水：水是各種生物細胞必需。水是良好溶劑，微生物新陳代謝過程中一切生化反應都離不開水作用。碳源：碳源是合成菌體成份原料，也是微生物獲取能量主要起源。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第36頁氮源：氮源主要是供給合成菌體結構原料。無機鹽類：無機鹽主要可為微生物提供除碳、氮以外各種主要元素。微生物需要無機鹽類很多，主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等，其主要功效為組成菌體成份；調整滲透壓；作為一些酶成份，并能激活酶活性等。生長因子：有些微生物即使供給它適合碳源氮源和無機鹽類，仍不能生長，還要供給一定量所謂“生長因子”。其種類很多，主要是B族維生素化合物等。生長因子能夠從酵母浸出液、血液或血清中取得。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第37頁微生物生長和繁殖

細菌生長曲線

(Ⅰ.延遲期，Ⅱ.對數(shù)期，Ⅲ.穩(wěn)定時，Ⅳ.衰亡期)制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第38頁微生物生態(tài)分布微生物因為結構簡單、繁殖快等特點，所以，它們在地球上分布遠比動植物要廣泛得多。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第39頁土壤：土壤是微生物生活最適環(huán)境，在土壤中分布著形形色色微生物類群。土壤中細菌占大多數(shù)。水：水含有微生物生命活動適宜溫度、PH、氧氣等。所以，水中生長著眾多微生物類群，90%微生物為革蘭氏陰性菌，主要有弧菌、假單胞菌、黃桿菌等?？諝猓嚎諝庵形⑸镏饕鹪从趲в形⑸锞w及孢子灰塵。但空氣本身缺乏微生物生活所必需營養(yǎng)物，日光對微生物也含有很強殺菌作用，另外空氣普通是干燥，所以空氣不是微生物生活良好環(huán)境。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第40頁

正常人體微生物分布

部位主要微生物種類口腔白色葡萄球菌、綠色鏈球菌、類白喉桿菌、梭形桿菌、螺旋體、真菌胃普通無菌腸大腸桿菌、產氣桿菌、變形桿菌、葡萄球菌、糞鏈球菌、產氣莢膜桿菌、破傷風桿菌、真菌、腺病毒等鼻咽腔葡萄球菌、綠色鏈球菌、類白喉桿菌、卡答兒球菌、綠濃桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、副大腸桿菌、變形桿菌、腺病毒皮膚葡萄球菌白色葡萄球菌、類白喉桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、真菌外耳道葡萄球菌、類白喉桿菌、綠濃桿菌、非病原性抗酸菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第41頁第一章小結微生物定義：微生物是指一些個體微小、結構簡單、肉眼看不見只有借助顯微鏡才能觀察到生物總稱。人類對微生物認識四個階段：感性認識階段、形態(tài)學發(fā)展階段、生理學發(fā)展階段、分子生物學發(fā)展階段。微生物分為原核細胞型、真核細胞型和非細胞型微生物。微生物五大共性是：體積小，面積大；吸收多，轉化快；生長旺，繁殖快；適應強，易變異；分布廣，種類多。微生物生長繁殖所需營養(yǎng)物質主要有水、碳源、氮源、無機鹽和生長因子等。細菌生長四個時期是：延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定時、衰亡期。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第42頁第二章微生物類群微生物都有哪些類型？它們有著什么樣結構？每種結構有什么樣作用？制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第43頁

第一節(jié)細菌

細菌是一類細胞細而短、結構簡單、細胞壁堅韌，以二等分裂方式繁殖原核微生物，分布廣泛。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第44頁光學性質——細菌為半透明體。表面積——細菌體積微小，相對表面積大。帶電現(xiàn)象——均帶負電。其帶電現(xiàn)象與染色反應、

凝集反應、抑菌和殺菌作用等親密相關。半透性——細菌細胞壁和細胞膜都有半透性。滲透壓——菌體內為高滲透壓。細菌特點制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第45頁一、細菌形態(tài)與結構觀察細菌慣用光學顯微鏡，其大小用測微尺在顯微鏡下進行測量，以微米(μm)為單位。細菌按其外形，主要有球菌桿菌螺形菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第46頁鏈球菌球菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第47頁葡萄球菌球菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第48頁四聯(lián)球菌球菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第49頁八疊球菌球菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第50頁桿菌不一樣桿菌大小、長短、粗細很不一致。炭疽芽胞桿菌3-10μm大中大腸埃希菌2-3μm制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第51頁桿菌形態(tài)多樣分枝桿菌雙歧桿菌桿菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第52頁螺形菌弧菌螺菌螺桿菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第53頁細菌結構基本結構細胞壁、細胞膜、細胞質、核質特殊結構莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第54頁基本結構：細胞壁、細胞膜、細胞質、細胞核特殊結構：莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞細菌結構制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第55頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第56頁革蘭陽性菌革蘭陰性菌革蘭染色革蘭染色法：涂片風干固定結晶紫碘液95%乙醇蕃紅1min1min脫色制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第57頁革蘭氏染色意義判別細菌選擇藥品與致病性相關革蘭氏陽性菌能產生外毒素，革蘭氏陰性菌能產生內毒素，二者致病作用不一樣。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第58頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第59頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第60頁細菌莢膜抗吞噬作用黏附作用抗有害物質損傷作用抗干燥作用當缺乏營養(yǎng)時，莢膜可被利用作碳源和能源，有莢膜還可作氮源。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第61頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第62頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第63頁芽孢一些細菌到一定發(fā)育階段或當環(huán)境條件不適于細菌繁殖時，會在細胞內形成一個圓形或橢圓形，對不良環(huán)境條件含有高度抵抗力休眠體，叫做芽孢.自然界中抗熱性最強嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢需要在121度下12分鐘才能殺死。所以，在日常消毒滅菌中，均選擇芽胞菌作為生物指示劑。輻照滅菌中，選擇短小桿菌芽胞；熱力滅菌中，選擇嗜熱脂肪桿菌芽胞；環(huán)氧乙烷消毒滅菌，選擇枯草桿菌黑色變種芽胞。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第64頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第65頁蠟狀芽孢桿菌芽孢制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第66頁細菌內毒素內毒素：細胞壁外層，屬于細胞壁組成部分（脂質A）普通與細胞結合在一起不分泌到環(huán)境中，只有當細菌溶解（裂解）后才釋放出來，故稱內毒素。少許內毒素（0.001μg）入血即可引發(fā)發(fā)燒反應。內毒素被吞噬細胞吞飲后，細胞釋放出內源性致熱原，經血流抵達下丘腦，體溫調整中樞引發(fā)發(fā)燒。作用特點：沒有組織器官選擇性肌體發(fā)燒，腹瀉，出血性休克或其它組織損傷不能經甲醛脫毒制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第67頁熱原熱原系指由微生物產生能引發(fā)恒溫動物體溫異常升高致熱物質。特點：耐高溫；不具揮發(fā)性（主要疏水原理）；易被強酸、強堿破壞；可濾過性；易吸附性；可稀釋性（水溶性）。熱原通常是磷脂多醇與蛋白質結合而成復合物。磷脂多醇是復合物活性中心，致熱作用最強。其化學組成因菌種不一樣而有所差異。分子量為5×104～5×105，分子量越大致熱作用也越強。

它包含細菌性熱原、內源性高分子熱原、內源性低分子熱原及化學熱原等。這里所指“熱原”，主要是指細菌性熱原，是一些細菌代謝產物、細菌尸體及內毒素。致熱能力最強是革蘭氏陰性桿菌產物，其次是革蘭陽性桿菌類，革蘭陽性球菌則較弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能產生熱原。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第68頁細菌繁殖

二分分裂繁殖制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第69頁菌落單個或少數(shù)細菌細胞生長繁殖后，會形成以母細胞為中心一堆肉眼可見、有一定形態(tài)結構子細胞集團，這就是菌落。細菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。細菌菌落特征因種而異。可作為判定細菌種依據。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第70頁

粘質沙雷氏菌菌落特征

沙門氏菌菌落特征

銅綠假單孢菌菌落特征

弗氏志賀氏菌菌落特征

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第71頁

第二節(jié)放線菌

放線菌形態(tài)、大小和結構在顯微鏡下，放線菌呈分枝絲狀，我們把這些細絲一樣結構叫做菌絲，菌絲直徑與細菌相同，小于1微米。依據菌絲形態(tài)和功效不一樣，放線菌菌絲可分為基內菌絲、氣生菌絲和孢子絲三種。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第72頁

放線菌菌絲

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第73頁放線菌繁殖放線菌主要經過形成無性孢子方式進行無性繁殖，成熟分生孢子或孢囊孢子散落在適宜環(huán)境里發(fā)芽形成新菌絲體；另一個方式是菌絲體無限伸長和分枝，在液體振蕩培養(yǎng)（或工業(yè)發(fā)酵）中，放線菌每一個脫落菌絲片段，在適宜條件下都能長成新菌絲體，也是一個無性繁殖方式。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第74頁第三節(jié)霉菌霉菌菌絲組成霉菌營養(yǎng)體基本單位。菌絲是一個管狀細絲，把它放在顯微鏡下觀察，很像一根透明膠管，它直徑普通為3-10微米，比細菌和放線菌細胞約粗幾倍到幾十倍。菌絲可伸長并產生分枝，許多分枝菌絲相互交織在一起，就叫菌絲體。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第75頁霉菌繁殖

霉菌有著極強繁殖能力，而且繁殖方式也是各種多樣。即使霉菌菌絲體上任一片段在適宜條件下都能發(fā)展成新個體，但在自然界中，霉菌主要依靠產生形形色色無性或有性孢子進行繁殖。孢子有點像植物種子，不過數(shù)量尤其多，尤其小。霉菌無性孢子直接由生殖菌絲分化而形成，常見有節(jié)孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢子。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第76頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第77頁第四節(jié)酵母菌

酵母菌是單細胞真核微生物。酵母菌細胞形態(tài)通常有球形、卵圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細菌單細胞個體要大得多，普通為1-5微米×5-30微米。酵母菌無鞭毛，不能游動。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第78頁

酵母菌細胞形態(tài)

酵母菌細胞形態(tài)

酵母菌細胞結構顯微照片

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第79頁酵母菌芽殖過程1．泡；2．小管；3．核；4．液泡

酵母菌假菌絲形成圖中1、2、3、

4·······

是出芽次序酵母菌無性繁殖制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第80頁酵母菌子囊孢子形成過程1、2、3、4：兩個細胞結合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子

酵母菌有性繁殖制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第81頁酵母菌菌落

大多數(shù)酵母菌菌落特征與細菌相同，但比細菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤、粘稠，輕易挑起，菌落質地均勻，正反面和邊緣、中央部位顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個別為黑色。

各種酵母菌菌落

啤酒酵母菌落

紅酵母菌落制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第82頁第五節(jié)病毒形態(tài)結構病毒形態(tài)基本可歸納為三種：桿狀、球狀和這兩種形態(tài)結合復合型。病毒粒子主要成份是核酸和蛋白質，在宿主細胞幫助下，經過核酸復制和核酸蛋白裝配形式進行增殖。病毒粒子通常形成螺旋對稱、二十面體對稱和復合對稱。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第83頁噬菌體制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第84頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第85頁毒性噬菌體制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第86頁噬菌體應用細菌判定與分類分子生物學研究主要工具細菌感染診療與治療制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第87頁第二章小結細菌按外形可劃分為：球菌、桿菌和螺旋菌。細菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。革蘭氏陽性菌呈紫色、革蘭氏陰性菌呈紅色。細菌基本結構包含：細胞壁、細胞膜、細胞質和核質。特殊結構包含：莢膜、鞭毛、菌毛和芽孢。霉菌基本單位為菌絲。熱力滅菌中選擇嗜熱脂肪芽孢桿菌作為生物指示劑。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第88頁第三章消毒與滅菌什么叫消毒、滅菌和無菌？消毒和滅菌有哪些方法？這些方法有何特點？制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第89頁第一節(jié)概述消毒：采取物理或化學方法，去除或殺滅外環(huán)境(傳輸媒介)中病原微生物或其它有害微生物。對消毒意義了解，有兩點需要注意，其一是無須去除殺滅全部微生物，主要是針對病原微生物；其二消毒是相正確，不是絕正確，只要將微生物降低到無害化程度。消毒劑：用于殺滅微生物化學藥品。如乙醇、新潔爾滅等。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第90頁滅菌：用物理和化學方法殺滅一切活微生物(包含病原微生物和非病原微生物，繁殖型或芽胞型微生物)，其概念是絕正確。工業(yè)化生產滅菌，允許將滅菌概率標準要求為10-6，即在100萬個試驗對象中，可有1個以下有菌生長，就可認為該批產品是無菌。滅菌劑：能殺滅一切微生物藥品。如過氧乙酸、甲醛等。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第91頁消毒與滅菌是兩個不一樣概念，消毒處理不一定能到達滅菌程度，而滅菌則一定能到達消毒之目標。滅菌是最徹底消毒。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第92頁無菌：是指物體或任一介質中沒有活微生物存在，即不論用何種方法，檢不出活微生物。無菌操作：指在操作中，采取或控制一定條件，盡可能防止產品污染微生物一個操作方法程序。為此目標，所用一切物品、環(huán)境，均應事先滅菌，操作也應在無菌操作室中進行。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第93頁第二節(jié)物理消毒滅菌法利用物理原因作用于微生物，將之殺滅或去除，稱為物理消毒法。慣用物理法有：機械消毒法、熱力消毒法、光消毒法、電消毒法、聲消毒法及輻射消毒法。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第94頁一、機械消毒法此方法不是真正殺滅微生物，而只是到達機械排除。如刷、沖洗、擦拭、吸附、過濾等。過濾除菌是用物理阻留方法除去微生物。如用砂濾法制備生活飲用水，廠房空氣凈化設施以及戴口罩等，都是利用過濾除菌有效方法。當前，濾膜器孔徑最小可達0.01μm，能制取優(yōu)質注射用水．可將空氣處理到100L中只有1顆0.3μm塵粒超凈水平。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第95頁

二、熱力消毒法在全部消毒與滅菌方法中，熱力是一個應用最早，效果最可靠．使用最廣泛方法。熱殺滅微生物機理是損傷微生物細胞壁，細胞膜、破壞微生物蛋白質(凝固或變性)．從而造成其死亡。熱力消毒與滅菌方法分為兩類：干熱和濕熱。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第96頁A)干熱消毒與滅菌

1．灼燒：灼燒是直接用火焰滅菌。如微生物試驗室接種針、接種環(huán)、涂菌捧等不怕熱金屬器材滅菌。灼燒法來菌溫度很高，效果可靠，但對器械有破壞性。

2．干烤：干烤滅菌是在烤箱中進行。適合用于高溫下不損壞、不變質物品滅菌。比如玻璃制品：平板、試管、吸管，注射器等均可用此法滅菌，普通在160-180℃下，干烤l～2h。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第97頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第98頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第99頁(B)濕熱消毒與滅菌濕熱滅菌法是指用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽進行滅菌方法。影響濕熱滅菌主要原因有：微生物種類與數(shù)量、蒸汽性質、藥品性質和滅菌時間等。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第100頁1．煮沸法：煮沸法消毒是使用最早消毒方法之一。因為其方法簡單、方便、經濟、實用效果好，故今仍是一個慣用消毒方法。2．高壓蒸汽滅菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第101頁制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第102頁

焚燒----最徹底滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法干烤----加熱160-180℃2小時干熱滅菌法濕熱滅菌與干熱滅菌比較制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第103頁濕熱滅菌法加壓蒸汽滅菌法最有效滅菌方法121℃20~30分鐘煮沸消毒法水煮100℃5分鐘(繁殖體)~2小時(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15~30分鐘(繁殖體)重復屢次流動蒸汽間歇加熱滅菌較低溫度殺滅致病菌制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第104頁同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好原因1、濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固2、濕熱穿透力比干熱大3、濕熱蒸汽有潛熱制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第105頁三、紫外線消毒紫外線可分為長波段、中波段和短波段3組。以短波段250．0～265.0nm殺菌力最強。普通多以253．7nm作為紫外線殺菌波長代表。當微生物被照射，此作用可引發(fā)細胞內成份，尤其是核酸、原漿蛋白與酶化學改變，從而使之死亡。紫外線穿透力極差，空氣中濕度、塵粒對其都有影響；在液體中，亦隨深度增加而降低。不能透過固體物質。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第106頁

四微波滅菌法微波是指頻率在30~3000MHz之間電磁波。水可強烈地吸收微波，使其極性分子轉動，分子間磨擦而生熱，且升溫快速，靠熱力而滅菌。在數(shù)十秒至幾分鐘之內可達100～150℃，并全部殺死液體中微生物，適于水溶性注射液滅菌。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第107頁五、電消毒法臭氧是以無聲放電法產生。在一對交流電極之間隔以介電體，當空氣或氧氣經過高壓電極(6000～8000V)時，在含有足夠動能放電電子中，使氧分子電離，一部分氧分子被聚合為臭氧。臭氧有很強殺菌力，高效、廣譜。有醫(yī)用高分予器材廠采取臭氧發(fā)生器進行了凈化車間空氣消毒，效果甚為滿意。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第108頁六、輻射消毒法輻射消毒法是采取放射性同位素放射γ射線殺滅微生物和芽孢方法。優(yōu)點：(1)消毒效果可靠；(2)不引發(fā)溫度升高，是一個“冷處理”滅菌；(3)節(jié)約能源；(4)不破壞包裝，可長久保留；(5)穿透力強，適合用于封裝滅菌；(6)無殘留毒性；(7)處理過程干燥，無消毒劑沾污；(8)可連續(xù)滅菌；(9)無環(huán)境污染。缺點：(1)一次性投資大；(2)必須有經過專門訓練技術人員管理。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第109頁第三節(jié)化學消毒滅菌法一、氣體滅菌法此法系指用化學試劑氣體或蒸汽對物品進行滅菌。慣用者為環(huán)氧乙烷、甲醛、過氧乙酸、丙二醇、乳酸、戊二醛等。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第110頁

（一）、環(huán)氧乙烷在室溫、常壓下是無色氣體，具醚樣臭，可聞出氣味閾值為700ppm，沸點為10．8℃，當溫度低于10.8℃時，氣體液化呈無色透明液體，能溶于水。環(huán)氧乙烷具較強擴散和穿透能力，作用快，對細菌芽胞、真菌和病毒等各種微生物都有殺滅作用，屬于廣譜滅菌劑。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第111頁環(huán)氧乙烷屬烷化劑，它能與微生物蛋白質、DNA等發(fā)生非特異性烷基化作用，對菌體細菌代謝產生不可逆性破壞。注意事項環(huán)氧乙烷具可燃可爆性。環(huán)氧乙烷對塑料、橡膠、紙板等穿透力強，親和力也強。故滅菌完成后需通空氣或采取排除毒性氣體裝置，將被一些材料吸收環(huán)氧乙烷降到最低濃度。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第112頁（二）、甲醛熏蒸甲醛熏蒸消毒是利用其與高錳酸鉀發(fā)生氧化還原反應過程中產生大量熱,使甲醛受熱揮發(fā),經一定時間后殺死病原微生物。此法是當前對消毒慣用方法之一,含有全方面徹底、省時、省力和消毒效果好等特點。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第113頁甲醛慣用于接種室、培養(yǎng)室、接種箱熏蒸滅菌，用量為每立方米10毫升。使用方法是按接種室體積計算甲醛用量放入特定容器中，再按甲醛毫升數(shù)二分之一數(shù)稱取高錳酸鉀所需克數(shù)放入玻璃或鐵制容器中，將接種室窗戶封閉嚴后，將甲醛倒入高錳酸鉀容器內，馬上退出，封閉房門，3－12小時后方可使用。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第114頁甲醛危害：含有對人體危害性和環(huán)境污染性。甲醛既是致癌物又是促癌物。甲醛生殖毒性會引發(fā)女性月經機能嚴重危害。長久在空氣中含甲醛工作環(huán)境中，人群普遍患有嗅覺下降、慢性咽喉類、記憶力減退等癥狀。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第115頁二、表面消毒選擇消毒劑必須是抗菌譜廣或有針對性。理想化學消毒劑應具備性質：使用情況下高效；有效濃度低；作用速度快；性質穩(wěn)定；無腐蝕性，低毒；無殘留毒性；使用無危險性；易溶于水；可在低溫下使用；不易受外界理化原因影響；無色、無味、無臭；價廉。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第116頁類別作用機制慣用種類用途酚類蛋白變性，細胞膜損傷石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒醇類蛋白變性乙醇皮膚、體溫計消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮膚消毒表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷新潔而滅手術洗手、浸泡手術器械慣用消毒劑種類和用途制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第117頁影響消毒劑作用原因消毒劑細菌

環(huán)境種類濃度作用時間菌齡種類有機物溫度酸堿度制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第118頁選擇適當消毒劑低毒價廉低破壞易貯藏方便有效制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第119頁第三章小結消毒與滅菌區(qū)分：消毒處理不一定能到達滅菌程度，而滅菌則一定能到達消毒之目標。滅菌是最徹底消毒。干熱消毒方法有：灼燒、干烤；濕熱消毒方法有：煮沸法和高壓蒸汽法。選擇消毒劑應注意哪些方面：有效、低破壞、低毒、方便、價廉和易貯藏。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第120頁第四章微生物污染與控制微生物是經過哪些路徑污染藥品？藥品生產人員應該注意哪些事項呢？制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第121頁微生物污染微生物污染是指因微生物產生、附著而給特定環(huán)境帶來不良影響。

假如細菌得到了必要養(yǎng)料、一定量水份和適當溫度，它們就能快速繁殖，它們繁殖速度快得驚人。通常一個細菌在僅僅24小時后可產生出281兆(百萬)個細菌。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第122頁微生物污染造成藥品變質原因藥品生產、儲存、使用全過程，都有因微生物污染而造成藥品變質原因。而藥品變質，普通需要很高微生物污染程度。也就是說，微生物面廣、量大繁殖才出現(xiàn)顯著易被覺察損壞現(xiàn)象。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第123頁預防微生物污染標準

1.了解污染源2.進行微生物監(jiān)測制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第124頁微生物控制意義預防疾病發(fā)生、發(fā)展和傳輸預防微生物污染預防微生物引發(fā)原材料變質和腐敗制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第125頁傳輸污染五大媒介空氣水表面人物料制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第126頁傳輸污染五大媒介－空氣

空氣：空氣并不是產生污染介質，但它是污染危險攜帶者?？諝庵写嬖趬m埃微粒是含有微生物(細菌等)。所以，空氣是侵襲我們產品污染物主要媒介。所以盡可能保持空氣潔凈是極為主要。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第127頁在藥品生產中，降低空氣中微生物數(shù)量方法有各種，慣用有以下3種方法：①空氣潔凈技術采取過濾方法過濾是最慣用方法。過濾介質種類很多，比如：纖維素、玻璃棉或人造纖維等?？諝鈨艋b置可用于整個房間如無菌操作室，也可只限于操作區(qū)域局部如超凈工作臺。②化學消毒方法采取消毒劑作用于室內空氣和物體表面。③紫外線照射方法采取紫外線對室內空氣進行照射。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第128頁傳輸污染五大媒介－水

在生產過程中，水是應用最廣泛原料之一。慣用對水消毒方法：①化學消毒劑方法②膜過濾法適合用于水系統(tǒng)連續(xù)循環(huán)處理。③紫外線照射法制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第129頁傳輸污染五大媒介－表面

表面包含：天花板、墻壁、地面、設備、容器、工具或桌子；一個表面看起來很潔凈，而實際上已經被千百萬個微生物所污染，除非已經做了正確消毒滅菌。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第130頁制藥企業(yè)生產車間廠房，庫房及試驗室都必須清潔整齊。建筑物表面不透水，光滑平整、無裂縫、接口嚴密、無顆粒物脫落，并能耐受清洗和消毒。設備、管道應易于拆卸、結構簡單，便于清潔消毒。尤其是藥品生產過程中使用容器，包含內包裝容器，都應進行清洗和消毒。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第131頁人體不一樣部位所帶細菌數(shù)量部位細菌數(shù)量手部前額頭皮腋窩鼻腔分泌物唾液糞便100～1000/cm21000～100000/cm2約100萬/cm2約1000萬/g約1000萬/g約10億/g710億/g傳輸污染五大媒介－人制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第132頁人員發(fā)菌量潔凈室內當工作人員穿無菌服時，靜止時發(fā)菌量為10～300個/(min·人)，軀體普通活動時發(fā)菌量為150～1000個(min·人)，快步行走時發(fā)菌量為900～2500個(min·人)；穿日常衣服時發(fā)菌量為3300～6個(min·人)；有口罩發(fā)菌量：無口罩發(fā)菌量為(1:7)～(1:14)；咳嗽一次發(fā)菌量為70～700個，噴嚏一次發(fā)菌量為4000～60000個。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第133頁人員污染路徑和方式人頭發(fā)和皮膚水滴衣著化裝品和珠寶手飾生產過程中人們所引發(fā)混雜和誤差制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第134頁傳輸污染五大媒介－物料原輔料可能將大量微生物帶入到藥品制劑中。所以，選取符合標準原輔料，將有利于控制藥品和環(huán)境污染水平。原輔料在儲備過程中必須注意環(huán)境條件。包裝材料，尤其是內包裝材料，首先包裝藥品，另首先預防外界微生物進入藥中。若處理不妥，在藥品儲備和運輸過程中，極易引發(fā)污染，造成嚴重后果。總之，包裝材料應考慮不一樣需要加以清潔或消毒處理進行合理封裝。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第135頁藥品生產人員衛(wèi)生注意事項新進人員健康檢驗建立生產人員健康檔案培養(yǎng)藥品生產人員良好個人衛(wèi)生習慣

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第136頁怎樣培養(yǎng)良好個人衛(wèi)生習慣勤洗手、勤剪指甲

定時洗澡、勤剪發(fā)

勤換衣服、勤洗工作服

在生產區(qū)內做到三個禁止：禁止吃東西、禁止吸煙、禁止大聲喧嘩制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第137頁潔凈區(qū)生產人員要求

一、人員衛(wèi)生凈化要求1.鞋凈化：可使用一個地墊，它含有粘性表面，能殺滅細菌并經抗靜電劑處理，可除去人員腳上塵粒。2.工作服凈化：工作服使用，可沉積吸附大量微生物和不清潔物，衣服本身也會散發(fā)纖維屑，故應經常清潔、滅菌。3.手凈化：手是交叉污染媒介，要教育生產人員警覺對產品污染。用消毒皂和流水洗。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第138頁4.頭罩：頭罩必須把全部毛發(fā)遮住。5.口罩：慣用口罩由4～6層紗布制成。帶口罩一定要遮住口、鼻；不能帶潮濕口罩；使用不能超出4h；不可正反兩面使用。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第139頁二、操作要求潔凈區(qū)工作人員要盡可能少而精，只有工作需要時才能進入；操作人員在潔凈區(qū)動作盡可能要遲緩，防止猛烈運動，以降低人發(fā)塵量；潔凈區(qū)門應關緊，防止無須要移動，以保持潔凈區(qū)風速、風量、風型和風壓；假如是無菌區(qū)話，操作人員自我約束就更多，要嚴格按無菌操作規(guī)程執(zhí)行。

制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第140頁日常工作注意事項生產前開啟紫外燈滅菌；生產結束后崗位人員工作：徹底清潔生產現(xiàn)場和設備表面；生產結束后滅菌人員工作：用消毒劑擦拭頂（包含高效送風口）、墻壁、地面等，并開啟紫外燈；定時進行消毒；制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第141頁無菌制劑中微生物控制產品無菌確保滅菌前微生物污染原料設備和生產過程生產環(huán)境生產時限滅菌工藝滅菌設備滅菌工藝驗證包裝密封性制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第142頁原輔料和內包材微生物控制潛在風險：微生物質量缺點后果：造成滅菌前微生物負荷失控產生風險原因：供給商質量確保不完善生產用水系統(tǒng)設計或管理不完善管理辦法供給商均按SOP要求經過嚴格篩選制訂原輔料微生物程度標準,并進行入庫檢驗控制倉儲條件,確保適宜儲存環(huán)境對于內包裝材料,應有牢靠運輸包裝,預防淋濕和昆蟲污染注射用水65-80℃以上高速循環(huán)按照SOP對總回水口每日取樣,對其它使用點每七天循環(huán)檢驗微生物和內毒素風險水平:年度質量回顧證實質量穩(wěn)定,能夠接收。制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第143頁滅菌前各工序微生物污染控制潛在風險:滅菌前微生物失控后果:超出已驗證滅菌工藝范圍,造成滅菌不徹底原因:設備清潔、消毒不妥包裝容器清洗不妥生產環(huán)境和操作人員引入關鍵設備偏差殘留微生物在適宜條件下繁殖管理辦法(監(jiān)控)制訂滅菌前微生物負荷警戒、行動程度取樣SOP確保滅菌前微生物含量樣品代表性,普通按照灌裝時間次序分前、中、后取樣,樣品應反應最差情況年度質量回顧可反應整體情況制藥企業(yè)微生物知識和無菌制劑微生物污染培訓專家講座第144頁管理辦法(設備清潔)應制訂清潔和消毒SOP,要求不一樣生產情況下設備清洗和滅菌周期和使用期設備及管路系統(tǒng)應配制CIP和SIP裝置設備與管路清洗清洗