微波提取槐米中蘆丁的研究

微波提取槐米中蘆丁的研究

中藥蝗蟲(chóng)是指干燥的花蕾和花。夏季花開(kāi)放或花蕾形成時(shí)采收,及時(shí)干燥,除去枝、梗及雜質(zhì)。前者習(xí)稱“槐花”,后者習(xí)稱“槐米”?；被ㄖ兄饕煞譃樘J丁(Rutin),又名蕓香苷(Rutioside),是中藥槐花米中止血的有效成分,臨床上主要用于治療高血壓及毛細(xì)血管出血。2005版《中國(guó)藥典》規(guī)定,蘆丁含量在槐米中不得少于20.0%,槐花中不得少于8.0%,因此人們常以槐花米為原料提取蘆丁。蘆丁是由槲皮素C3位上的羥基和蕓香糖結(jié)合而形成的雙糖苷,在熱水、熱醇中均有較大的溶解度;分子中含多個(gè)酚羥基,呈弱酸性,易溶于堿。常用的提取溶劑有水、醇、冷堿、熱堿;提取方式有水煮法、連續(xù)回流法、熱堿提取法等。水煎煮法簡(jiǎn)單易行,造價(jià)低,但蘆丁的收率低;連續(xù)回流法要大量有機(jī)溶劑,生產(chǎn)成本高;熱堿提取法因堿提時(shí)需加熱和保濕過(guò)濾,故在生產(chǎn)時(shí)需特殊設(shè)備。也有采用微波法和超聲法提取槐花米中蘆丁的報(bào)道,其微波法為輔助堿溶酸沉提取、連續(xù)回流等,需特殊裝置,操作較麻煩;而超聲法的提取條件文獻(xiàn)報(bào)道不一。本實(shí)驗(yàn)采用家用簡(jiǎn)單微波爐裝置加熱法和不同時(shí)間段的超聲提取槐花米中的蘆丁,并與2005年版《中國(guó)藥典》規(guī)定的回流法對(duì)比,研究各法的優(yōu)缺點(diǎn),以便合適的條件下推廣應(yīng)用。1實(shí)驗(yàn)部分1.1藥物和機(jī)器1.1.1特效藥槐花米(市售),蘆丁對(duì)照品(100080-200306,中國(guó)藥品生物制品檢定所),其他試劑均為分析純。1.1.2紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)、kq-25d型微波清洗器、kq-25d型微波清洗器、kq-25d型微波清洗器、kq-25d電子分析天平BT25S(日本島津),HH數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠),UV-VIS8500雙光束紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)(無(wú)錫科達(dá)儀器廠),GalanzWD800型微波爐(佛山市順德區(qū)格蘭仕微波爐電器有限公司),KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(功率:250W,工作頻率:40kHZ;昆山市超聲儀器有限公司)。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1測(cè)定了石膏含量1.2.1.加甲醇溶液精密稱取蘆丁對(duì)照品200mg,置50mL量瓶中,加甲醇適量,置水浴上微熱使溶解,放冷,加甲醇至刻度。精密量取5mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得(每1mL中含無(wú)水蘆丁0.2mg)。1.2.1.測(cè)定方法-可見(jiàn)分光光度法精密量取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6mL,分別置25mL量瓶中,各加水至6.0mL,加5%亞硝酸鈉溶液1mL,混勻,放置6min,加10%硝酸鋁溶液1mL,搖勻,放置6min,加氫氧化鈉試液10mL,再加水至刻度,搖勻,放詈15min,以相應(yīng)試劑為空白,照紫外-可見(jiàn)分光光度法(2005年版《中國(guó)藥典》附錄VA),在500nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,繪制A-C標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.2.2提取液用量的確定精密稱取本品粗粉1g(平行操作做3份),置索氏提取器中,加乙醚適量,加熱回流至提取液無(wú)色,放冷,棄去乙醚液。再加甲醇90mL,加熱回流至提取液無(wú)色,移置100mL量瓶中,用甲醇少量洗滌容器,洗液并入同一量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。精密量取10mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,搖勻。精密量取3mL,置25mL量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,自“加水至6mL”起依法測(cè)定吸光度。1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定精密稱取本品粗粉3g(3份),置250mL三角燒瓶中,加30mL雙蒸水浸泡10min,置微波爐低中功率(40%火力)加熱1min,趁熱過(guò)濾,濾渣再提取次2次(即重復(fù)加30mL水,微波加熱1min,趁熱過(guò)濾)合并3次濾液,移置100mL量瓶中,加甲醇10mL,加水至刻度,搖勻。精密量取10mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,搖勻。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,自“加水至6mL”起依法測(cè)定吸光度。同時(shí)做微波爐加熱時(shí)間為2、3、4、5min提取蘆丁。1.2.4濾渣的提取精密稱取本品粗粉3g(3份),置150mL三角燒瓶中,加30mL70%乙醇溶液,于室溫超聲提取10min,濾渣再提取2次(即再重復(fù)加70%乙醇30mL,室溫超聲提取10min,過(guò)濾)合并3次濾液,移置100mL量瓶中,加水至刻度,搖勻。精密量取10mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,搖勻。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定吸光度。同時(shí)做20、30、40、50min超聲提取蘆丁。1.2.5加標(biāo)回收率的測(cè)定微波法回收率實(shí)驗(yàn):精密稱取本品粗粉0.1g(6份),置150mL三角燒瓶中,其中三份分別精密加入蘆丁6mg,加10mL雙蒸水浸泡10min,置微波爐低中功率(40%火力)加熱4min,趁熱過(guò)濾,濾渣再提取2次合并3次濾液,移置50mL量瓶中,加甲醇0.5mL,加水至刻度,搖勻。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,測(cè)定吸光度,計(jì)算回收率。超聲法回收率實(shí)驗(yàn):精密稱取本品粗粉0.1g(6份),置150mL三角燒瓶中,其中三份分別精密加入蘆丁6mg,加10mL70%乙醇溶液,于室溫超聲提取30min,濾渣再提取2次合并3次濾液,移置50mL量瓶中,加水至刻度,搖勻。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,測(cè)定吸光度,計(jì)算回收率。2結(jié)果與討論2.1干擾物質(zhì)的測(cè)定蘆丁為黃酮類化合物對(duì)紫外光區(qū)有兩個(gè)區(qū)域的特征吸收。蘆丁與Al(NO3)3顯色劑反應(yīng),可引起相應(yīng)吸收帶紅移,從而排除具有相同吸收雜質(zhì)的干擾,用于含量測(cè)定。蘆丁光譜掃描(200～600nm)結(jié)果表明,蘆丁與Al(NO3)3生成的絡(luò)合物在500nm有吸收峰,可用于定量分析。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)系列在500nm的波長(zhǎng)處測(cè)定,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度C(mg/25mL)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以濃度對(duì)吸收度的回歸方程為:C=1.9540A,r=0.9997。2.2菊花米中蘆丁的提取按中國(guó)藥典(2005)規(guī)定的方法,以甲醇為溶劑回流法提取7～8h,提取液基本無(wú)色,測(cè)定3份槐花米中蘆丁的結(jié)果見(jiàn)表1,供試品中蘆丁的平均含量為12.77%,RSD為1.60%。2.3微波加熱時(shí)間及溫度微波是頻率介于300MHz～300GHz之間的電磁波,微波加熱升溫快,植物細(xì)胞內(nèi)的極性物質(zhì)吸收微波能,細(xì)胞內(nèi)溫度迅速上升,使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)。微波加熱方式為選擇性加熱,水對(duì)微波吸收能力大,因此實(shí)驗(yàn)選用水為溶劑。由于微波加熱,升溫太快,易出現(xiàn)沸騰溢出,故實(shí)驗(yàn)選用40%火力,且加熱時(shí)間不能太長(zhǎng),并用較大容積的三角燒瓶。微波加熱時(shí)間與收率的關(guān)系的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。2.4超聲時(shí)間的影響超聲提取藥物主要源于超聲波的空化作用,即一定頻率的超聲波作用于溶液時(shí),液體中尺寸適宜的小氣泡發(fā)生共振現(xiàn)象,強(qiáng)烈的沖擊波使細(xì)胞壁破裂,有效成分溶出,但整個(gè)系統(tǒng)的溫度并未升高許多,有效成分不會(huì)被破壞,提取可在室溫下進(jìn)行。超聲時(shí)間長(zhǎng),理論上應(yīng)獲得更高的提取率,但長(zhǎng)時(shí)間的超聲,原料會(huì)被粉碎成較細(xì)的顆粒而透過(guò)濾紙,影響含量測(cè)定。超聲時(shí)間與收率的關(guān)系的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。2.5返回率實(shí)驗(yàn)在槐花米供試品中,加入蘆丁對(duì)照品,測(cè)得的結(jié)果見(jiàn)表4,兩方法的回收率范圍為95%～103%,RSD在3%以內(nèi)。2.6微波法和超聲法提取菊花米2005年版《中國(guó)藥典》規(guī)定用索氏提取器連續(xù)熱回流提取槐花米中蘆丁為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法,該法測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好,我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室里同時(shí)采用微波法和超聲法提取槐花米中蘆丁,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示,由表可見(jiàn),微波法用雙蒸水作溶劑提取12min和超聲法用70%乙醇作溶劑提取90min相當(dāng)于連續(xù)熱回流法用甲醇作溶劑提取時(shí)間為7～